蝙蝠葛苏林碱调控Akt/mTOR信号通路对胶质瘤细胞增殖及自噬的影响

目的探讨蝙蝠葛苏林碱(DAS)对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制。方法用2.5、5.0和10.0μmol/L DAS(DAS组)、10.0μmol/L替莫唑胺(TMZ组)和空白对照(对照组)处理U251和U87细胞。采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低(P<0.05),DAS组细胞活力低于TMZ组(P<0.05)。胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11μmol/L和6.35μmol/L。Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少(P<0.05)。流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加(P<0.05)。DAS能增加胶质瘤细胞Bax、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、p-AKT、p-mTOR蛋白相对表达量(P<0.05),降低抗凋亡Bcl-2蛋白相对表达量(P<0.05)。透射电镜结果显示,DAS能增加胶质瘤细胞中自噬囊泡(P<0.05)。结论DAS可以抑制胶质瘤细胞活力与增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡,这可能与DAS激活Akt/mTOR信号通路抑制自噬有关。

蝙蝠葛苏林碱和蝙蝠葛碱犬体内药动学-药效学结合研究

目的 建立Beagle犬体内蝙蝠葛苏林碱(DS)和蝙蝠葛碱(Dau)的药动学-药效学(PK-PD)结合模型。方法 通过测定给药后Beagle犬体内的血药浓度并以给药后的Q-Tc间期延长率作为效应指标,采用Sheiner等提出的PK-PD结合模型进行PK-PD结合研究。结果 药物效应与效应室浓度成良好的相关性,符合Sigmoid-Emax模型,并通过计算得出相应的PK-PD模型参数。结论 本试验在Beagle犬体内成功地建立了DS和Dau的PK-PD结合模型,建立了药物效应E,血药浓度Cp及时间t之间的关系,故可较为成功地预测DS和Dau的血药浓度及其效应。

蝙蝠葛苏林碱对缺血性损伤细胞的保护作用

采用培养ＰＣ１２细胞为材料，观察了蝙蝠葛苏林碱（Ｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ，Ｄａｕ）对六种脑缺血样损伤模型中的细胞保护作用及其作用机制进行了分析。实验结果表明：Ｄａｕ１００μｍｏｌ／Ｌ对细胞损伤有明显的保护作用，其保护作用又以对一氧化氮毒性损伤较为敏感。

蝙蝠葛苏林碱对小鼠和大鼠脑缺血的保护作用

目的研究蝙蝠葛苏林碱对小鼠缺氧、急性脑缺血和大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用小鼠常压密闭缺氧实验，观察了蝙蝠葛苏林碱对小鼠耗氧量和存活时间的影响；结扎小鼠双侧颈总动脉造成急性全脑缺血模型，观察了蝙蝠葛苏林碱对急性脑缺血小鼠死亡率的影响；电凝阻断大鼠一侧大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型，观察了蝙蝠葛苏林碱对局灶性脑缺血大鼠梗塞面积和行为障碍的影响。结果蝙蝠葛苏林碱能明显降低常压密闭缺氧小鼠整体耗氧速度，延长缺氧小鼠的存活时间；明显降低急性脑缺血小鼠２ｈ死亡率；显著降低局灶性脑缺血大鼠梗塞范围，明显改善行为障碍。结论蝙蝠葛苏林碱具有抗缺氧、抗脑缺血作用。

蝙蝠葛苏林碱在犬体内药动学-药效学结合模型研究

目的 :研究蝙蝠葛苏林碱在beagle犬体内的药动学与药效学之间的关系。 方法 :4只beagle犬给予蝙蝠葛苏林碱 6mg·kg-1静脉注射后 ,分时取血 ,同时通过生理记录仪观察犬心电、血压及血流动力学的变化。采用反相高效液相色谱法测定血浆中蝙蝠葛苏林碱的浓度。结果 :蝙蝠葛苏林碱在犬体内动力学行为符合二房室开放模型 ,对犬药效学影响峰值为 10～ 15min ,皆明显滞后于血药浓度峰值。结论 :通过在beagle犬体内建立的蝙蝠葛苏林碱药动学 药效学 (PK PD)结合模型 ,可以成功预测蝙蝠葛苏林碱的血药浓度及其药理效应。

蝙蝠葛苏林碱及异构体对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

用细胞培养术，以ＮａＣＮ加缺糖引起ＰＣ１２细胞损伤作为细胞缺血性损伤的模型，观察蝙蝠葛苏林碱（ＤＳ）及其３个光学异构体对ＰＣ１２细胞缺血性损伤的保护作用；以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为Ｃａ２＋的荧光探针，用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统观察ＤＳ及异构体对ＮａＣＮ引起的Ｃａ２＋内流的抑制作用。结果表明ＤＳ及３个异构体在１０－８～１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１的浓度范围内对ＰＣ１２细胞损伤有较明显的保护作用，其机制之一与抑制ＮａＣＮ加缺糖诱发的细胞内游离Ｃａ２＋异常升高有关。

蝙蝠葛苏林碱抗实验性心律失常作用

蝙蝠葛苏林碱ｉｖ给药能显著增加乌头碱诱发大鼠心律失常及哇巴因致豚鼠室性心律失常的用量；能显著提高电刺激兔心室致颤阈；对大鼠冠状动脉左前降支结扎复灌注引起的室性心律失常有明显的保护作用；

(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

用细胞培养方法，在原代培养的大鼠皮质神经细胞上，观察了（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的神经元损伤的保护作用。以Ｆｕｒａ２／ＡＭ为Ｃａ２＋的荧光指示剂，用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统观察（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸诱发大鼠脑皮质神经细胞内Ｃａ２＋升高的影响。结果表明（－）Ｓ·Ｒ蝙蝠葛苏林碱能剂量依赖性地抑制谷氨酸的神经毒作用，对谷氨酸诱发的神经细胞内游离Ｃａ２＋升高有明显的抑制作用。提示蝙蝠葛苏林碱对缺血性脑损伤有保护作用。

山豆根碱与山豆根苏林碱对血小板聚集和粘附的影响

观察山豆根碱（Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ，Ｄａｕ）及山豆根苏林碱（Ｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ，Ｄａｓ）对人血小板聚集和粘附功能的影响，并探讨其作用机制。结果表明，两者均可抑制由二磷酸腺苷、花生四烯酸和胶原引起的血小板聚集，药物浓度与聚集抑制率表现出明显的量效关系。Ｄａｕ处理的血小板其对二磷酸腺苷、花生四烯酸和胶原诱导聚集抑制的ＩＣ＿（５０）（ｍｍｏｌ／Ｌ）分别为０．０４２（ｎ＝５），０．０２８（ｎ＝９）及０．０４６（ｎ＝１０）；Ｄａｓ则分别为０．０４２（ｎ＝５），０．０２６（ｎ＝５）及０．０５７（ｎ＝４）。Ｄａｓ表现出对血小板粘附的明显抑制作用。测定经Ｄａｕ与Ｄａｓ处理的血小板内ｃＡＭＰ浓度，发现Ｄａｕ不影响血小板内ｃＡＭＰ水平，而Ｄａｓ可使ｃＡＭＰ水平明显升高。提示，Ｄａｕ与Ｄａｓ有很强的抗血小板生物活性作用，Ｄａｓ的作用可能与血小板内ｃＡＭＰ升高有关。

蝙蝠葛苏林碱对家兔在体心脏单相动作电位的影响(英文)

采用单相动作电位记录技术研究蝙蝠葛苏林碱 (DS)对家兔在体心脏单相动作电位 (MAP)作用的使用依赖性特征 .结果显示DS在 2 4 0 ,2 10 ,180ms起搏周长 (CL)均能降低MAP振幅 (MAPA) ,延长MAP复极达 50 %和 90 %的时程 (MAPD50 ,MAPD90 ) ,有效不应期 (ERP)和ERP/MAPD90 .延长MAPD50 百分率分别为 12 .8± 2 .9,9.5± 2 .6 ,9.0± 1.6 ,延长MAPD90 百分率分别为 10 .9± 2 .6 ,7.5± 2 .4 ,6 .5±2 .7,延长ERP百分率分别为 2 5.7± 4 .3,18.5±4 .1,2 4 .2± 7.2 ,延长ERP/MAPD90 百分率分别为13.7± 4 .5,10 .2± 2 .2 ,16 .1± 5.1(P >0 .0 5) .其延长作用均呈非使用依赖性特征 .在所有起搏周长下 ,索他洛尔亦降低MAPA ,延长MAPD50 ,MAPD90 ,ERP ,ERP/MAPD90 ,但其延长MAPD90 ,ERP的作用均呈逆向使用依赖性特征 (P <0 .0 5) .结果表明 ,DS能明显降低家兔在体心脏MAPA ,延长MAPD50 ,MAPD90 ,ERP ,ERP/MAPD90 ,该作用呈非使用依赖性特征 .

蝙蝠葛苏林碱对PC12细胞内游离钙浓度的影响

目的进一步探讨蝙蝠葛苏林碱（Dau）的抗脑缺血／缺氧损伤与其钙拮抗作用间的关系。方法：培养的PC12细胞用Fura－2／AM负载，用AR－CM－MIC阳离子测定系统观测Dau对单细胞内游离钙（[Ca(2+)]_i）升高的影响。结果：Dau（0．1～100μmol·L(－1)）可浓度依赖性抑制高钾和caffeine引起的[Ca(2+)］_i增加，对肌浆网钙泵抑制剂cy－clopiszonicacid引起的[Ca(2+)]_i升高也有抑制作用。结论：Dau不仅抑制电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流和caffeine引起的内钙释放．而且对钙泵也可能有影响，这可能是其抗脑缺血／缺氧损伤的重要机制。

蝙蝠葛苏林碱的抗致心律失常性迟后除极

应用标准微电极技术，探讨蝙蝠葛苏林碱（ＤＳ）对豚鼠心室乳头肌迟后除极（ＤＡＤ）和触发活动（ＴＡ）的影响。ＤＳ５０ｕｍｏｌ·Ｌ－１可消除哇巴因和咖啡因引起的ＴＡ，抑制异丙肾上腺素诱发ＴＡ。使低Ｋ＋高Ｃａ２＋、苯肾上腺素诱导ＴＡ的发生率分别由１００，７５％降低到９．１及２２．２％，显著抑制上述因素诱发的ＤＡＤ。表明ＤＳ对ＤＡＤ和ＴＡ有良好的抑制作用。

静脉注射蝙蝠葛苏林碱在兔体内的药动学

目的研究蝙蝠葛苏林碱（DS）在兔体内的药动学和组织分布特征。方法兔耳缘静脉注射Ds后，采用HPLC测定各时间点血浆和组织器官药物浓度。结果兔DS2．5，5．0，10．0mg·kg^-1静脉注射后，体内动力学行为符合二室开放模型。t1／2α分别为0、024，0．030，0．018h；t1／2β分别为3．0，3．4，6．9h；CL分别为3．1，3．6，4．4L·kg^-1·h^-1；Vd分别为13．1，18．0，43．6L·kg^-1。在Ds2．5—5．0mg·kg^-1内主要药动学参数无显著性差异（P〉0．05），但DS 10.0mg·kg^-1静脉注射后，Po超比例增加（由2．08mg·L^-1增加至10．72mg·L^-1，P〈0．01），t1／2β明显延长（P〈0．01）。结论DS在兔体内分布迅速、广泛，消除较快。在2．5～5．0mg·kg^-1内DS的消除为线性动力学，而10．0mg·kg^-1静脉注射后，本品在兔体内的消除未呈线性动力学。组织分布以肺脏含量最高，各组织器官中药量均显著高于血浆药物浓度。

蝙蝠葛苏林碱在兔血浆浓度监测及药代动力学

目的 建立测定血浆中蝙蝠葛苏林碱浓度的方法 ,并研究蝙蝠葛苏林碱在家兔体内的药代动力学。方法以蝙蝠葛碱作为内标。血浆样品经乙腈去蛋白 ,再用二氯甲烷两次萃取 ,采用RP HPLC方法检测。结果 血浆药物浓度在 0 0 5～ 2 0 0 0mg·L- 1 线性关系良好 (r=0 9996 ) ,最低定量浓度为 0 0 5mg·L- 1 ,绝对回收率均大于 80 % ,相对回收率为 (10 1± 5 ) % ,精密度试验的日内及日间RSD %分别为 1 9%～ 5 6 %和 3 5 %～ 6 5 %。药代动力学研究表明 ,家兔蝙蝠葛苏林碱单剂量iv后 ,其体内血药浓度时间数据符合二房室开放模型。结论 本方法专属性强、灵敏度高、回收率高、重现性好 ,可用于蝙蝠葛苏林碱血药浓度测定及药代动力学研究。

蝙蝠葛苏林碱光学异构体的合成及其钙拮抗活性的研究

以香兰醛和苯乙腈为起始原料,经合成及拆分得到四个光学活性的单苄基异喹啉化合物5～8。进而通过 Ullmann 反应,使5-7,6-8,5-8,6-7结合,然后分别脱苄基得 R,R-、S,S-、R,S-和 S,R-蝙蝠葛苏林碱。药理试验表明,其钙拮抗活性的顺序是 S,R-构型>R,S-构型>R,R-构型>S,S-构型。

(一)蝙蝠葛苏林碱对兔淋巴细胞内钙含量的影响

采用钙荧光指示剂Fura—2/Am定量测试法检测了静息淋巴细胞胞浆内游离钙浓度,并以Ca^(2+)载体A23187作为阳性对照.观察了(一)蝙蝠葛苏林碱(8701)对兔淋巴细胞胞浆内Ca^(2+)浓度的影响。结果表明:8701的各种实验浓度均可显著地促进淋巴细胞内Ca^(2+)浓度增加,在浓度为10^(-4)mol·L^(-1)时,增加细胞内Ca^(2+)浓度的作用显著高于Ca^(2+)载体A23187的作用(P<0.01),提示该药有可能作为淋巴细胞的刺激剂或在高浓度时可能造成淋巴细胞的Ca^(2+)中毒作用。

蝙蝠葛苏林碱对阿尔茨海默病小鼠海马的影响和机制

目的探讨蝙蝠葛苏林碱(DS)对阿尔茨海默病(AD)小鼠影响及机制。方法 C57BL/6小鼠随机分对照组、模型组、多奈哌齐组(0.001 g·kg-1)及DS高、中和低剂量组(1.08、0.54、0.27 g/kg)。采用β-淀粉样蛋白(Aβ)1~42(80 pmol/μl)脑室注射诱导AD模型。治疗30 d后测小鼠学习记忆能力,透射电镜观察海马CA3区,测脏器指数和脑伊文氏蓝(EB),酶联免疫吸附法测海马β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、Aβ1~42、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)。结果与模型组比较,DS改善AD小鼠学习记忆能力(P<0.05)和海马结构,明显升高脾和胸腺指数(P<0.05),其他脏器指数改变不明显(P>0.05),EB、APP、Aβ1-42、IL-1β、TNF-α和MDA明显降低(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH-Px明显升高(P<0.05)。结论 DS改善AD小鼠学习记忆及海马结构,增强免疫和抗氧化,抑制APP、Aβ1-42、IL-1β和TNF-α可能是抗AD机制。

自身化学离子化/傅里叶变换质谱法研究蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱及其衍生物的结构

采用自身化学离子化/傅里叶变换质谱(SCI/FTMS)技术研究了蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱及这二个化合物的9个衍生物,由[M+1]准分子离子峰和特征碎片峰的质谱数据鉴定了这些衍生物的结构。

乙酰基蝙蝠葛苏林碱抗缺血性脑损伤作用

用细胞培养方法和大鼠脑缺血损伤模型，研究乙酰基蝙蝠葛苏林碱（Ｏ，Ｏａｃｅｔｙｌｄａｕｒｉｓｏｌｉｎｅ，Ａｄａｕ）对缺血性脑损伤的保护作用。结果表明，Ａｄａｕ对低钾、高钾、ＢａｙＫ８６４４及去甲肾上腺素所引起ＰＣ１２细胞内游离钙浓度增加有抑制作用，其ＩＣ５０分别为４６３±０７２，０１５±００２，９３７±１７６和１００±１４μｍｏｌ·Ｌ－１。Ａｄａｕ在整体大鼠双动脉结扎（２５，５，１０ｍｇ·ｋｇ－１，ｉｖ）和四动脉结扎（５，１０ｍｇ·ｋｇ－１，ｉｖ）模型上，均能降低缺血脑组织脂质过氧化物含量，增加超氧物歧化酶（ＳＯＤ）活性。提示Ａｄａｕ对脑缺血损伤有明显的保护作用。

蝙幅葛苏林碱对大鼠复灌性局部脑缺血病理变化的影响

目的探讨蝙幅葛苏林碱（DSL）对局部脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法32只Wiistar雄性大鼠随机分为4组。．Ⅰ．Ⅱ．Ⅲ组分别为阻断大脑中动脉（MCA）后立即腹腔注射DSI·2mg·kg－1、5mg·kg-1和8mg·kg-1的实验组；IV组为阴性对照组。建立大鼠复灌性局部脑缺血模型，观察阻断大脑中动脉3h．复通21h的双侧脑组织的病理变化。结果未阻塞测未观察到脑组织的病理变化。阻塞侧，Ⅱ、Ⅲ组病理变化相似，Ⅰ、Ⅳ组病理变化相似，但是Ⅰ、Ⅳ组明显重于Ⅱ．Ⅲ组。结论提示DSL对复灌性脑缺血损伤有保护作用。