苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及多态性的研究

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增到６１个标准株、生产用菌株及２４个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全ＤＮＡ指纹图，通过计算多态性扩增片段的大小，利用ＮＴＳＹＳ软件进行聚类分析，蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群，这是此近缘种ＤＮＡ分子水平高度同源的新证据．６１个苏芸金芽孢杆菌的聚类结果表明：其ＤＮＡ指纹图与Ｈ－血清型有一定相关性．与引物０９５５－０３相比，引物０９４０－１２对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及蜡状芽孢杆菌菌株具有更高的鉴别价值，大多数特异株ＤＮＡ全指纹图有菌株特异性。

中国苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ag株发酵工艺条件研究

目的 开发具有特异性杀虫谱特性的Bt菌新株系。方法 在对摇瓶培养研究的基础上 ,通过改变培养基成分、通气量和pH等操作条件 ,检测不同条件对菌体生长量、芽孢及伴孢晶体形成的影响 ,研究中国苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ag株 (BtKen Ag)发酵罐间歇发酵的工艺条件。结果 中国BtKen Ag发酵罐发酵最佳工艺条件 :发酵温度维持 3 0℃ ,发酵前期 ,控制pH为 7 0 ,用较大的通气量 1∶2 0V/(V·min) ;发酵后期不控制pH ,并适当减小通气量为 1∶0 5V/(V·min)。发酵前期菌体达到 7 5× 1 0 10 /ml的较高浓度 ,发酵后期菌体向芽孢转化的转化率高达 98%以上。结论 初步得出适于该菌间歇发酵的最佳工艺 ,为该菌制剂的应用提供可靠依据。

我国粮食粉尘中苏芸金芽孢杆菌的分离及H血清型鉴定

【目的】对我国部分省市粮食粉尘中的苏芸金芽孢杆菌 (B t )野生株的进行分离、纯化及H血清型鉴定。【方法】利用NB选择培养基法分离、纯化B t 野生株 ;采用B t 标准株H抗原抗血清及试管凝集实验进行H血清型鉴定。【结果】我国部分省市粮食粉尘中的B t 野生株的平均出菌土样率为 4 8 8%,B t 的平均分离率为 1 5 78%;不同血清型的比例依次为H4a4c (48 8%) >H3a3b (1 6 2 %) >H2 1 (1 4 6 %) >H4a4b (6 5 %)>H5a5b (3 3%) >H1 8(2 4 %) ,H1 (2 4 %)。【结论】我国粮仓是B t 资源较为丰富的微生态系统 ,B t 种群高度多样化 ,肯尼亚亚种为仓贮环境中的优势种。

苏芸金芽孢杆菌的肠毒素及其编码基因的研究

目的对苏芸金芽孢杆菌（简称Ｂｔ）种群不同亚种存在的蜡状芽孢杆菌肠毒素基因及溶血素ＢＬ进行检测，以便评估Ｂｔ对人类及高等动物潜在的致病性。方法采用多重引物ＰＣＲ技术，在同一ＰＣＲ体系同时加两对引物，ｈｂｌＡ及ｂｃｅＴ基因的扩增片段分别为１０１７ｂｐ及４２７ｂｐ，与预期的完全一致；应用ＨＢＬ羊血平板，产溶血素ＢＬ的菌株可产生非连续型溶血环。结果４５株Ｂｔ标准株中，２９株含有ｈｂｌＡ基因，占６４．４％；１５个生产用菌株及野生株中，含ｈｂｌＡ基因的菌株为１０株，占６６．６６％；含ｂｃｅＴ基因的标准株２９株，占６４．４％，含ｂｃｅＴ的Ｂｔ生产用菌株及野生株为１３株，占８６．６％。ＨＢＬ羊血平板检测结果表明：２８．８％的Ｂｔ标准株及３３．３％的Ｂｔ生产用菌株及野生株含溶血素ＢＬ。结论ｈｂｌＡ及ｂｃｅＴ基因在苏芸金芽孢杆菌中是普遍存在的，建议在遴选Ｂｔ生产菌株时。

苏芸金杆菌中试规模发酵的工艺控制初探

采用密闭通风发酵设备对苏芸金杆菌ＢＴ—３７进行了中试规模液体深层发酵的实验和生产，就不同黄豆饼粉含量培养基和不同种子罐培养菌龄对最终发酵液活菌含量的影响作了初步探讨，为进一步优化工艺控制打下了基础。

全长δ-内毒素cryIA(c)基因在三种原核细胞中的表达

采用随机引物法标记苏芸金芽孢杆菌δ-内毒素cryIA(b)基因:从苏芸金芽孢杆菌HD-73质粒基因文库中筛选到了分别包含δ-内毒素cryIA(c)基因5’端和3’端的6.5kb和4.3kb两个片段,然后分别缺失其非编码区,重连得到全长3.92kb的crylA(c)基因,用穿梭载体pHT3101亚克隆后分别转化大肠杆菌NM522、枯草杆菌AS1176及苏芸金芽孢杆菌晶体缺陷型4D10(H3ab),得到了具有同一质粒的三种工程菌。SDS-PAGE电泳表明此基因在三个宿主系统中均表达了分子量为133300的原毒素,分子量大小与苏芸金芽孢杆菌HD-73晶体蛋白完全相同,免疫检测表明表达蛋白和天然晶体蛋白具有相同的免疫原性。用提取的粗表达产物对二龄小菜蛾幼虫作杀虫试验,证明三种细胞产生的表达蛋白均具有杀虫活性,测得它们的LD_(50)分别为0.311μg/cm^2、0.024μg/cm^2和0.017μg/cm^2。