热性惊厥大鼠海马区c-Fos蛋白表达及苔藓纤维发芽特征

目的探讨热性惊厥(FS)大鼠海马区c-Fos蛋白表达及苔藓纤维发芽(MFS)特征。方法21日龄雄性SD大鼠36只分为热性惊厥(FS)组、发热对照(FG)组及正常对照(NG)组,每组12只。采用热水浴法建立FS模型,应用免疫组织化学和Timm′s染色方法对海马CA1、CA3区的c-Fos蛋白表达和MFS进行观察。结果FS组大鼠海马CA1区有c-Fos蛋白过度表达,FS组c-Fos蛋白面积百分比[(2.26±0.23)%]较FG组[(1.08±0.19)%]和NG组[(0.71±0.14)%]高,FS组与其他两组的差异有显著意义(χ2=10.48 P<0.01);FS、FG、NG组c-Fos蛋白平均灰度值依次为(139.43±3.64)(、159.26±3.66)、(170.88±3.58),3组差异有显著意义(F=12.31 P<0.01)。NG组海马CA3区未见MFS,FS、FG组的MFS评分依次为(4.30±0.80)、(1.45±0.68)分,两组差异有显著意义(t=12.14 P<0.001),提示FS组海马CA3区出现显著的MFS;FS组大鼠惊厥2、6、10次后MFS的平均宽度及面积百分比依次为[(19.71±4.68)μm、(21.53±6.87)%]、[(28.57±5.19)μm、(38.22±7.15)%]及[(43.16±5.65)μm、(54.42±7.69)%],不同惊厥次数间的差异有显著意义(F=22.47 P<0.01;χ2=18.77 P<0.01)。结论FS发作可引起大鼠海马CA1区c-Fos蛋白过度表达,并促使CA3区异常苔藓纤维发芽。FS可导致近期及远期海马结构病变。

遗传性癫痫易感大鼠P77PMC海马苔藓状纤维发芽的研究

目的 :研究遗传性癫痫易感大鼠模型——P77PMC大鼠在反复惊厥过程中海马的可塑性变化 ,探讨此模型的癫发生、发展的病理生理机制。方法 :采用Timm硫化银染色法分析P77PMC大鼠在反复听源性惊厥不足10次以及惊厥 2 0次、30次和 5 0次时海马苔藓状纤维 (mossyfiber ,MF)发芽现象。 结果 :在全身性强直阵挛性惊厥发作次数少于 30次的P77PMC大鼠以及对照的Wistar大鼠海马内均未见到MF发芽表现 ;而在经历 5 0次Ⅳ～Ⅴ级听源性惊厥发作的一组P77PMC大鼠海马内观察到了MF发芽的现象 ,在海马齿状回内分子层内见到Timm染色呈棕黑色颗粒异常分布的MF末梢。结论 :不仅边缘脑性惊厥可导致海马MF发芽 ,而且在遗传性听源性惊厥这种脑干起源但迅速泛化为全身性惊厥发作的癫动物模型也有海马内MF突触重组的表现 ;听源性惊厥易感大鼠在经历足够多次的惊厥发作后可发生海马MF发芽 ,即单纯惊厥的反复发作就可导致海马内MF发生突触重组。

抗痫增智胶囊对戊四唑点燃大鼠海马苔藓纤维发芽的干预作用

目的:探讨中药抗痫增智胶囊对戊四唑致痫大鼠海马苔藓纤维发芽的干预作用。方法:运用戊四唑点燃法,复制癫痫大鼠模型。实验大鼠随机分为中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、丙戊酸镁组、模型组、正常对照组。造模成功分别灌药28天后应用Timm染色法观察各组大鼠海马苔藓纤维发芽的情况。结果:Timm染色结果显示模型组大鼠海马CA3始层及齿状回分子层苔藓纤维发芽明显增多,其单位面积的密度百分比显著高于正常对照组(P<0.05)。抗痫增智胶囊高、中剂量组的发芽密度百分比低于模型组(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论:抗痫增智胶囊对海马CA3区及齿状回苔藓纤维发芽有较强的干预作用。

NGF与癫痫后大鼠海马损伤修复及苔藓纤维发芽关系的研究

目的探讨神经生长因子(NGF)与癫痫后大鼠海马损伤修复及与苔藓纤维发芽(MFS)的关系。方法大鼠侧脑室内分别注入NGF正、反义寡核苷酸和磷酸盐缓冲液,并使用红藻氨酸(KA)致痫后分别在48h、72h、1w和4w采用普通病理方法、免疫组化和Timm’s染色法对鼠脑片进行研究。结果KA致痫后48h大鼠海马NGF蛋白表达已可见显著升高,持续较高水平表达至少4w,并伴随大鼠海马明显MFS;给予NGF反义寡核苷酸能够减少NGF蛋白表达和MFS过程,但神经元损伤更为严重;大鼠行为学观察各癫痫组未见明显差异。结论KA致痫后大鼠海马NGF蛋白表达升高并与MFS同时共存,但可被侧脑室内注入NGF反义寡核苷酸有效阻止,提示NGF可促进癫痫后大鼠海马损伤修复及MFS过程。

宽叶缬草提取物对戊四氮致癫大鼠海马苔藓纤维发芽的影响

目的观察戊四氮致癫大鼠海马苔藓纤维发芽(MFS)的情况及宽叶缬草提取物的影响,探讨宽叶缬草的抗癫痫作用。方法用戊四氮37.5mg/kg腹腔注射Wistar大鼠28天建立慢性癫痫模型,同时灌胃宽叶缬草提取物500mg/kg、1000mg/kg、1500mg/kg每天3次,观察大鼠行为及脑电图变化,Timm染色观察海马苔藓纤维发芽,并用彩色病理图文分析系统分析MFS的面密度。结果大鼠28天点燃后MFS明显增加,与模型对照组比较,宽叶缬草治疗大鼠癫痫发作次数明显减少,且发作时间缩短。结论宽叶缬草提取物能对抗戊四氮的点燃作用,并抑制海马的苔藓纤维发芽。

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠海马结构损伤的形态学及苔藓纤维发芽研究

摘 要：目的 观察幼鼠致病后海马的组织病理学改变。方法 采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制成幼鼠癫痫持续状态模型，应用常规病理及电镜观察海马结构的形态学改变，同时应用Timm组织化学染色方法进行苔藓纤维发芽的研究。结果 海马区神经元可见变性、坏死改变，以CA1区、CA3区为重。Timm染色见齿状回内分子层和CA3区下锥体层苔藓纤维发芽增加。结论（1）氯化鲤-匹罗卡品诱导的幼鼠癫痫持续状态可造成海马区神经元损伤；（2）幼鼠癫痫持续状态后海马CA1、CA3区神经元损伤较重；（3）幼鼠癫痫持续状态后可致苔藓纤维发芽增加。

发育鼠单次惊厥后脑内N-Cadherin的表达在海马苔藓纤维发芽中作用的研究

目的探讨单次惊厥发作后脑内神经性钙黏附分子(N-Cadherin)表达与海马结构中苔藓纤维发芽现象之间的关系及其作用。方法利用腹腔注射戊四氮(PTZ)制作发育期SD大鼠(14天、28天)单次惊厥发作模型,各日龄组随机分为生理盐水(NS)组、PTZ致惊组和吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)预处理组,采用免疫组化法检测N-Cadherin的表达,利用Timm染色法观察海马苔藓纤维发芽现象。结果NS组在海马CA3区可见极少Timm染色颗粒,致惊后1周偶见Timm染色颗粒,与NS组相比差异无显著性(P>0.05);致惊后3周可见较多Timm染色颗粒沿海马CA3区呈条带样分布,较NS组明显增加(P<0.01);PDTC预处理组可见Timm染色颗粒较PTZ致惊组明显减少(P<0.05)。同时,NS组14天和28天大鼠海马CA3区可见少量的N-Cadherin阳性细胞,着色不深;PTZ致惊组海马CA3和齿状回门区的N-Cadherin阳性细胞与NS组相比明显增多(P<0.01),PDTC预处理后相同区域内N-Cadherin阳性细胞较PTZ致惊组明显减少(P<0.05)。N-Cadherin与Timm染色颗粒的表达结果与惊厥鼠的日龄并无关联性。结论单次惊厥发作在幼鼠可以引起海马不同程度的苔藓纤维发芽,而N-Cadherin的分布位置与变化时相与苔藓纤维发芽相吻合,这表明N-Cadherin可能参与或促进了苔藓纤维的发芽。

戊四氮癫痫幼鼠海马内NF-κB与N-Cadherin定位与苔藓纤维发芽现象

目的:探讨单次癫痫发作后脑内NF-κB和N-Cadherin表达与海马结构中苔藓纤维发芽现象之间的关系与作用。方法:利用腹腔注射戊四氮(PTZ)制作发育期SD大鼠(14 d、28 d)单次惊厥发作模型,各日龄组随机分为生理盐水(NS)组、PTZ组、吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)组和PDTC+PTZ组,采用免疫组化法检测NF-κB和N-Cadherin的表达,利用Timm染色法观察海马苔藓纤维发芽现象。结果:NS组在海马CA3区可见极少Timm染色颗粒;致惊后1周偶见Timm染色颗粒、3周可见Timm染色颗粒沿海马CA3区呈条带样分布(P<0.01);PDTC预处理组Timm染色颗粒较PTZ致惊组明显减少(P<0.05)。NS组大鼠海马CA1、CA3区无NF-κB p65核转位细胞,致惊后24 h各日龄组幼鼠海马CA1、CA3区NF-κB p65核转位细胞较NS组明显增加(P<0.01);PDTC预处理后NF-κB p65的核转位细胞较致惊组明显减少(P<0.05)。NS组海马CA1、CA3区可见少量N-Cadherin阳性细胞;致惊组海马CA3和齿状回门区的N-Cadherin的阳性细胞与NS组相比明显增多(P<0.01),PDTC预处理后相同区域内N-Cadherin阳性细胞较PTZ致惊组明显减少(P<0.05)。NF-κB p65、N-Cadherin及Timm染色颗粒的表达结果与惊厥鼠的日龄并无关联性。结论:幼鼠单次惊厥发作可以引起海马不同程度的苔藓纤维发芽,而NF-κB p65、N-Cadherin的分布位置与变化时相与苔藓纤维发芽相吻合,表明NF-κB p65、N-Cadherin可能参与或伴随着苔藓纤维的发芽。

神经营养因子-3在颞叶癫癎后的表达与海马苔藓纤维发芽的关系

目的探讨神经营养因子-3(NT-3)在颞叶癫癎大鼠海马内表达与苔藓纤维发芽(MFS)的可能关系。方法大鼠侧脑室注射红藻氨酸(KA)建立颞叶癫癎模型后,侧脑室注射NT-3反义寡核苷酸(ASODN)及正义寡核苷酸(SODN);应用免疫组化法观察海马NT-3表达;应用Timm银染方法,光镜和电镜观察海马MFS,并与空白对照组及脂质体对照组进行比较。结果致癎后大鼠海马齿状回NT-3表达下降;海马苔藓纤维明显粗乱,侧支发芽;齿状回内分子层可见银标记突触末端,主要为轴-树型非对称突触,其中ASODN组海马NT-3蛋白水平降低及MFS程度更明显。结论 KA致癎和NT-3 ASODN均能降低大鼠海马齿状回NT-3表达,增加MFS程度。提示NT-3可能通过对MFS及突触重组作用来影响颞叶癫癎的发生和发展。

幼鼠致痫后海马区神经元损伤及苔藓纤维发芽的实验研究(英文)

背景:成鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后出现海马CA1区、CA3区及齿状回广泛的神经元脱失和苔藓纤维发芽已成为大量实验的共识,但有关幼鼠该方面研究得出的结论不一。目的:观察幼鼠致痫后海马区神经元的组织病理学改变。设计:随机对照实验研究。地点和对象:实验地点:北京大学人民医院实验动物中心进行。健康生后15～20dWistar幼鼠54只。随机分成3组,每组18只。生理盐水对照组,地西泮干预组,实验组。每组中用于光镜检查、电镜检查和Timm染色各6只。干预:实验组幼鼠采用氯化锂-毛果芸香碱腹腔注射制成幼鼠癫痫持续状态模型,生理盐水对照组以相同液体量的生理盐水取代毛果芸香碱。地西泮干预组在给予毛果芸香碱30min前给予地西泮腹腔注射。在光镜下观察海马结构的形态学改变。透射电镜下进行超微结构观察。Timm法观察苔藓纤维发芽情况。主要观察指标:①各组大鼠海马区的神经元形态学改变。②各组大鼠超微结构改变。③各组大鼠苔藓纤维发芽情况。结果:实验组CA1区和CA3区及齿状回可见许多神经元发生变性和固缩性坏死。CA2区未见明显改变。电镜下海马区神经元胞体浓缩变性,粗面内质网增生,内质网的核糖体脱落,胶质细胞可见有空泡变性。生理盐水对照组和地西泮干预组无明显的超微结构改变。Timm染色见?

锂-匹罗卡品癫痫模型中大鼠苔藓纤维发芽机制研究

目的:通过观察锂-匹罗卡品癫痫模型中大鼠实验性癫痫发作时的行为、脑电图及病理生理变化,探讨苔藓纤维发芽(MFS)在癫痫中的发病机制。方法:利用锂-匹罗卡品(Li-PC)制作大鼠急性癫痫持续状态(SE)的癫痫模型,造模后7 d、14 d、28 d,进行苔藓纤维发芽评分。结果:模型组大鼠2周时可见MFS穿过齿状回内分子层颗粒细胞层,进入内分子层及CA3区锥体细胞始层黑色颗粒形成,4周时形成连续密集颗粒带,MFS评分显著高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:急性期SE神经元损伤致苔藓纤维发芽,可能是慢性颞叶癫痫的病理基础。

小儿惊厥与海马硬化及苔藓纤维发芽的关系

本文从临床和动物研究方面综述了支持和反对儿童早期长时间高热惊厥或癫痫持续状态与海马硬化相关这一焦点问题。同时也对小儿时期长时间惊厥与苔藓纤维发芽关系方面的研究做了简要概述。这两方面仍是目前癫痫学研究上有待于更深一步研究的热点与难点的课题。

Nogo-A及其受体与癫痫大鼠海马苔藓纤维发芽的关系

目的研究神经轴突再生抑制因子Nogo-A及其受体NgR蛋白在癫痫大鼠海马细胞内的表达水平,探讨Nogo-A及NgR与癫痫大鼠海马苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting,MFS)发生、发展的关系,为进一步明确癫痫发病机制提供研究依据。方法采用红藻氨酸(KA)颈部皮下注射法建立大鼠癫痫模型。(1)采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法对大鼠海马中Nogo-A及NgR蛋白进行检测,并用图像分析仪对染色结果进行分析;(2)应用Timm's硫化银法对大鼠海马脑片进行染色,并对结果进行半定量分析。结果(1)实验组Nogo-A蛋白表达与对照组差别无显著性意义(P>0.05);(2)注射KA后4h NgR蛋白表达降低,至造模后7d,NgR蛋白表达升高至正常水平,实验组与对照组之间比较,组内、组间表达均有显著性差异(P<0.01);(3)Timm's硫化银染色结果显示:最早在造模2w后可见海马苔藓状纤维发芽,染色结果为淡染,至造模后2个月发芽脑片染色为深染。结论红藻氨酸造模后癫痫大鼠海马Nogo-A蛋白表达无改变;NgR蛋白表达在造模初期呈现"降量调节";癫痫大鼠海马苔藓状纤维发芽的发生可能与NgR蛋白水平表达下调有关。

两种耐药性颞叶癫痫模型海马硬化及苔藓纤维发芽的对比

目的:用杏仁核电刺激慢点燃和匹罗卡品腹腔注射的方法建立多药耐药性颞叶癫痫模型,对比两种模型海马神经元坏死及苔藓纤维发芽(MFS)情况。方法:SD大鼠分为正常对照组、杏仁核敏感组、匹罗卡品敏感组、杏仁核耐药组及匹罗卡品耐药组,每组10只;后4组大鼠分别采用杏仁核电刺激慢点燃和匹罗卡品腹腔注射的方法建立颞叶癫痫模型、用苯巴比妥和苯妥英钠或卡马西平进行耐药性筛选,正常组大鼠不做任何处理;用HE染色观察海马组织神经元坏死情况,用硫化银染法(Timm’s)观察海马组织MFS情况。结果:4组模型大鼠海马CA3区神经元坏死比例均较正常对照组大鼠明显增多(P<0.05),且2组模型耐药大鼠高于各自的模型敏感组(P<0.05),但2种模型敏感组海马神经元坏死比例比较及2种模型耐药组神经元坏死比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05);匹罗卡品敏感组及耐药组大鼠海马组织的MFS评分分别高于杏仁核敏感组及耐药组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:匹罗卡品耐药模型MFS程度重,更加有利于癫痫耐药机制的研究。

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠苔藓纤维发芽的不同时点研究

目的探讨匹罗卡品致痫大鼠海马结构齿状回苔藓纤维发芽(MFS)各时间点的变化。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制成大鼠癫痫持续状态(SE)及颞叶癫痫模型,利用Timm组化染色法进行MFS观察研究。结果Timm染色可见到实验组大鼠SE24h时齿状回内分子层及CA3区下锥体层即有MFS现象;实验组不同时点与对照组大鼠CA3区和齿状回内分子层MSF评分间差异均有统计学意义(P<0·05)。结论匹罗卡品模型基本复制了人类颞叶癫痫的临床病理特征;诱导的SE可造成大鼠海马结构易损区的MFS增加,从SE后24h即开始出现MFS现象,且随时间的延长其程度加重。

癫痫持续发作时间与大鼠海马苔藓纤维发芽程度及自发性痫性发作的关系

目的探讨癫痫持续状态(SE)发作时间与致痫大鼠海马苔藓纤维发芽(MFS)程度及自发性痫性发作的关系。方法 104只雄性成年SD大鼠,随机分为对照组和3个SE实验组,建立氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型;诱发SE30min(A组)、60min(B组)、90min(C组)后注射水合氯醛终止发作。各组大鼠自SE终止发作后于相同实验条件下普通饲养45d,观察大鼠行为及脑电图(EEG)的变化,记录自发性痫性发作的发生率。通过苏木精-伊红染色、Nissl染色和Timm硫化银组织化学染色方法观察各实验组海马MFS情况。结果氯化锂-重复低剂量匹罗卡品成功诱导大鼠SE的发生,发作程度均达Ⅳ级以上,EEG类似人类颞叶癫痫。80%的大鼠癫痫持续状态均发展为自发痫性发作,与SE时间无关。与对照组相比,实验A、B、C三组双侧海马CA3区均表现MFS(P<0.05)。实验B组与A、C组相比,CA3区MFS明显增加(P<0.05)。结论氯化锂-重复低剂量匹罗卡品可诱导SE,癫痫持续发作60min后终止的大鼠海马CA3区MFS明显增加,SE发作时间与海马MFS程度并不一定呈正相关。

听源性惊厥易感大鼠海马苔藓纤维发芽结构及功能研究

项目简介：癫痫是一种常见的慢性脑部疾患，对于癫痫发病机制的研究一直是神经科学研究中的一个热点领域，尽管经过长期、多方面的深入研究，癫痫发生及其反复发作的细胞和分子机制迄今仍未完全明了，其发病过程中的许多环节尚不清楚，在癫痫的发生发展过程中，海马结构具有极重要的作用，大量研究表明，海马内苔藓纤维发芽所致的突触重组是癫痫病理生理过程中的一个非常重要的变化，

伽玛刀对红藻氨酸模型大鼠海马形态学及苔藓纤维变化的影响

目的通过红藻氨酸（kainic acid,KA）癫痫大鼠模型的伽玛刀（gamma knife,GK）照射,探讨伽玛刀治疗癫痫的机制,以及伽玛刀与海马苔藓纤维发芽（mossy fiber sprouting,MFS）的关系。方法74只Wistar大鼠分为3组：正常对照组（A组）,红藻氨酸致痫模型大鼠组（B组）,40Gy伽玛刀照射红藻氨酸致痫大鼠组（C组）。应用常规病理、电镜观察海马结构形态学改变,Timm’s银染色组织化学方法观察伽玛刀对海马区苔藓纤维发芽的影响。结果B组可见以CA1、CA3区及齿状回内分子层（innermolecular layer,IML）为主的神经元变性、坏死。C组与B组相比,神经元损伤减轻。对Timm’s染色脑片海马CA3区透明层进行测定,B、C组大鼠海马苔藓纤维均出现明显的发芽现象,CA3区异常Timm’s阳性颗粒光密度值显著高于A组（P〈0.01）;C组与B组相比,1-14d苔藓纤维发芽未见明显减少（P〉0.05）,28-42d显著减少（P〈0.05）。结论海马细胞形态的改变——苔藓纤维发芽,可能是KA大鼠癫痫形成的重要机制。40Gy的伽玛刀照射对减轻神经元的损伤有重要作用,抑制苔藓纤维发芽是主要机制之一。

匹罗卡品癫痫模型中蛋白质netrin-1的表达与苔藓纤维出芽的动态变化

目的：探讨神经诱向因子蛋白质netrin-1在癫痫持续状态后海马苔藓纤维出芽（MFS）中的作用。方法：氯化锂-匹罗卡品建立大鼠颞叶癫痫（TLE）模型，采用Timm染色和免疫组化的方法分别检测MFS和netrin-1在大鼠海马组织中的表达。结果：TLE组大鼠在模型形成的第2周和第4周，海马齿状回内netrin-1的表达较正常对照组明显增加，并可见到MFS，穿越齿状回颗粒细胞层到达内分子层，并形成一条致密的层状带。结论：癫痫状态后在海马齿状回netrin-1的表达上调，证明其可能参与了癫痫后MFS过程。

颞叶癫痫患者海马苔藓纤维发芽的实验研究

目的观察颞叶癫痫病人海马齿状同和CA3区苔藓纤维出芽情况。方法癫痫组样本来自12例颢叶癫痫病例的手术切除标本包含海马齿状回和CA3区的脑组织,对照组脑组织样本来自4例非癫痫病的尸检脑组织。应用Timm组织化学染色方法在光镜和电镜水平进行海马结构苔藓纤维发芽的研究。结果光镜下癫痫组可见苔藓纤维穿越海马齿状同颗粒细胞层到达内分子层,CA3区也可见明显的苔藓纤维发芽。癫痫组CA3区和齿状同内分子层苔藓纤维发芽评分高于对照组,统计学上差异有显著性意义。电子显微镜下观察显示癫痫组患者齿状回内分子层可见到银标记的突触末端,主要和树突形成突触连接,所形成的突触为非对称性突触。结论颞叶癫痫可致海马齿状同和CA3区苔藓纤维发芽增加,这可能是难治性癫痫形成的重要机制。