朱琏抑制Ⅱ型针法对多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠IRS-1、IRS-2蛋白的影响

目的探讨朱琏抑制Ⅱ型针法改善多囊卵巢综合征(PCOS)伴胰岛素抵抗(IR)的作用和机制。方法将40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、西药组,每组10只,采用来曲唑联合高脂饲料喂养建立PCOS-IR模型。针刺组予朱琏抑制Ⅱ型针法针刺关元及双侧归来、足三里、三阴交、丰隆穴,留针30 min;西药组给予炔雌醇环丙孕酮0.18 mg/(kg·d)、二甲双胍135 mg/(kg·d)灌胃。每组均每日治疗1次,连续治疗28 d。经断尾采血法测定空腹血糖(FBG),ELISA法检测血清空腹胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);免疫组化法检测卵巢组织胰岛素受体底物-1(IRS-1)和胰岛素受体底物-2(IRS-2)蛋白定位表达;Western blot法检测卵巢组织IRS-1和IRS-2蛋白相对表达量。结果免疫组化染色结果显示,IRS-1、IRS-2蛋白在卵巢组织间质细胞、颗粒细胞、初级卵母细胞中均有表达。与空白组比较,模型组血清FINS水平和HOMA-IR值显著升高(P<0.05),卵巢组织IRS-1和IRS-2表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,针刺组和西药组血清FINS水平及HOMA-IR值显著降低(P<0.05),卵巢组织IRS-1和IRS-2表达明显升高(P<0.05)。针刺组和西药组各指标间比较差异均无统计学意义。结论朱琏抑制Ⅱ型针法针刺治疗可以改善PCOS大鼠IR情况,这可能与良性调控卵巢组织IRS-1和IRS-2蛋白表达有关。

以纤溶酶原激活物抑制剂1为靶标的心血管疾病治疗研究进展

纤溶系统的主要功能是溶解血管中沉积的纤维蛋白，从而促进血栓溶解。纤溶酶原激活物具有启动和活化纤溶系统的作用，而纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）则抑制纤溶反应的发生，组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）与PAI-1的动态平衡对纤溶系统的稳态具有重要作用。近年，PAI-1在心血管系统中的作用已经被阐明，PAI-1升高不仅是血栓前状态的重要标记物，也与高血压、动脉粥样硬化、血管再狭窄等心血管疾病的病理过程密切相关。因此，以PAI-1为靶标，对心血管疾病特别是血栓性疾病提供了新的思路和方法。

高血压大鼠血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞PAI-1表达的作用与ERK及AT_1受体的关系

目的 观察高血压大鼠的血管内皮细胞和平滑肌细胞上胞外信号调节激酶 (ERK)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 1型受体 (AT1R)的变化与AngⅡ对纤溶酶原激活物抑制物 - 1(PAI 1)活性调节作用的内在因果关系 ,探讨AngⅡ促血管内皮细胞和血管平滑肌细胞合成与分泌PAI 1的受体和受体后信号途径。方法 将 16只健康SD大鼠随机分为腹主动脉缩窄型高血压组 (n =8)和假手术对照组 (n =8)。第 6周时应用放射免疫法检测大鼠血浆与主动脉组织匀浆中AngⅡ含量 ,发色底物法检测血浆与主动脉孵育液中PAI 1活性的变化 ,免疫组织化学法测定ERK和AT1R在血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的表达。结果 血浆AngⅡ、血浆PAI 1、血管平滑肌细胞ERK、血管平滑肌细胞AT1R均显著增高 (P均 <0 0 5 ) ,且四者之间互为正相关 (r =0 89～ 0 96 ,P <0 0 1～ 0 0 0 1) ,主动脉匀浆AngⅡ、主动脉孵育液PAI 1、血管平滑肌细胞ERK、血管平滑肌细胞AT1R也显著增高 (P均 <0 0 5 ) ,且四者之间亦互为正相关 (r =0 86～ 0 96 ,P <0 0 1～ 0 0 0 1)。结论 高血压时AngⅡ具有诱导PAI 1合成与分泌的作用 ,可能与AngⅡ经AT1R激活ERK ,介导血管平滑肌合成及释放PAI 1有关。

MISⅡR启动子的克隆及其组织特异性鉴定

目的克隆苗勒氏管抑制物Ⅱ型受体启动子(mullerian inhibiting substance typeⅡreceptor promoter,MISⅡRpr)并鉴定其在卵巢器官中的特异性表达活性。方法利用PCR从C57BL/6小鼠基因组中扩增苗勒氏管抑制物Ⅱ型受体启动子并将其克隆入载体pMD18-T,测序正确后将其亚克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体。将重组质粒pGL3-Basic/MISⅡRpr分别转染卵巢癌细胞系SKOV3、HT-8910,宫颈癌细胞系Hela、Si Ha,绿猴肾细胞系COS-7,乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在上述细胞系中的活性,以确定克隆的苗勒氏管抑制物Ⅱ型受体启动子是否具有卵巢特异性活性。结果构建的pGL3-Basic/MISⅡRpr质粒用SacⅠ和EcoRⅠ双酶切,片段大小分别为600 bp和1 000 bp,证明MISⅡRpr插入正确。重组质粒转染卵巢细胞系SK-OV3、HT-8910,荧光素酶高表达;对照细胞HT-29等转染后,荧光素酶低表达。结论克隆得到的MISⅡRpr具有明显的卵巢特异性活性。可以利用MISⅡRpr进行相关基因的卵巢特异性表达。

替米沙坦对高血压大鼠纤溶功能的作用机制

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促血管内皮细胞和平滑肌细胞合成与分泌纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)的受体和受体后信号转导途径以及替米沙坦对高血压大鼠纤溶参数的影响和可能机制。方法腹主动脉部分缩窄构建高血压大鼠模型,随机分成高血压组和替米沙坦组(3mg/·d)6周,另设假手术组为对照组。检测大鼠血浆与主动脉组织匀浆中AngⅡ含量,血浆与主动脉孵育液中纤溶酶原激活物(tPA)、PAI1活性,血管内皮细胞、平滑肌细胞胞外信号调节激酶(ERK)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)蛋白的表达。结果①高血压组血浆AngⅡ含量、血浆PAI1活性、血管平滑肌细胞ERK蛋白及AT1R蛋白的表达4者之间显著正相关(r=0.89～0.96,P<0.01～0.001)。主动脉匀浆AngⅡ含量、主动脉孵育液PAI1活性、血管平滑肌细胞ERK蛋白及AT1R蛋白的表达4者之间显著正相关(r=0.86～0.96,P<0.01～0.001)。②与高血压组比较,替米沙坦能明显抑制主动脉分泌PAI1的能力(P<0.05),降低血浆PAI1活性(P<0.05),升高血浆与主动脉孵育液中tPA活性、tPA/PAI1值(P均<0.05),明显改善纤溶参数。③替米沙坦组ERK和AT1R在血管内皮细胞和平滑肌细胞的表达较高血压组明显减少(P均<0.05)。结论替米沙坦抑制血管内皮细胞、血管平滑肌细胞ERK和AT1R的表达,抑制AngⅡ引起的PAI1合成增加,可能是其改善纤溶功能的机制。

开搏通、氯沙坦对大鼠腹主动脉缩窄后纤溶活性变化的影响

目的:探讨压力对纤溶活性的影响及纤溶活性与肾素血管紧张素系统的可能关系,探寻ACEI及ATI拮抗剂减少心肌梗塞再发生的机理。方法:用发热底物法测定大鼠腹主动脉缩窄后血浆纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)和组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的活性变化以及肼苯达嗪、开搏通、氯沙坦应用后其活性变化。结果:发现腹主动脉缩窄后,随颈动脉压力升高,PAJ-1活性升高,t-PA活性降低,纤溶活性降低;应用肼苯达嗪、开搏通、氯沙坦在有效降低压力同时,PAJ-1活性降低,t-PA活性提高,纤溶活性提高,且开搏通及氯沙坦改善纤溶活性的作用更明显.此作用二者之间无显著差别;由此推论压力与纤溶活性密切相关,有效降低压力,提高纤溶活性.结论:肾素血管紧张素系统与纤溶系统有潜在的内在联系,ACEI及AT1拮抗剂均能提高纤溶活性。

AT1R、ACE及PAI-1基因多态性的表达与AECOPD并发肺心病的相关性研究

目的研究I/D多态性和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、血管紧张素转化酶(ACE)及纤溶酶原活化剂抑制物-1(PAI-1)基因多态表达与慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)并发肺心病的相关性。方法选取2016年7月-2018年9月在我院就诊的AECOPD并发肺心病患者38例为观察组,并选取同期AECOPD患者38例为对照组,均行AT1R、ACE及PAI-1基因多态性表达检测,对比两组ACE基因型和等位基因分布、AT1R基因型和等位基因分布、PAI-1基因多态性表达情况,并分析其相关性。结果观察组ACE基因型频率(DD、ID)和等位基因频率(D)高于对照组,基因型频率Ⅱ和等位基因频率Ⅰ低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组AT1R基因型频率(AA、AC)及等位基因频率A高于对照组,AT1R基因型频率CC和等位基因频率C低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组PAI-1基因多态性表达(4G/4G、4G/5G、5G/5G)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson分析,AT1R、ACE及PAI-1基因多态性表达与AECOPD并发肺心病呈正相关性(P>0.05)。结论AT1R、ACE及PAI-1基因多态性表达与AECOPD并发肺心病呈正相关性,可以作为临床靶向基因检测因子。