苗药九仙罗汉接骨汤含药血清对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、凋亡和Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2表达的影响

目的:观察苗药九仙罗汉接骨汤含药血清对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、凋亡及Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响,探讨其促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡的可能机制。方法:将体外培养的MC3T3-E1Subclone14细胞系分为空白对照组、仙灵骨葆胶囊组及九仙罗汉接骨汤含药血清低、中、高浓度组,各组制备含药血清后均用高糖DMEM培养液分别配制成不同浓度进行培养;培养24 h后采用MTT与流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡;RT-PCR与Western Blot、免疫组化法测定Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达。结果:与空白对照组比较,九仙罗汉接骨汤含药血清中、高浓度组增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Runx2、Osterix、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:苗药九仙罗汉接骨汤可促进MC3T3-E1Subclone14细胞增殖,并抑制其凋亡,其作用机制可能与调节Runx2、Osterix、Bax、Bcl-2基因及蛋白表达有关。

苗药九仙罗汉接骨汤干预胫骨骨折模型大鼠的成骨分化及骨折愈合

背景:九仙罗汉接骨汤具有活血散瘀、接骨消肿、止痛的作用,但目前其对胫骨骨折的具体作用机制尚未完全掌握。目的:探究苗药九仙罗汉接骨汤介导BMPs/Smad信号通路对胫骨骨折大鼠成骨分化及骨折愈合能力的影响。方法:60只SD大鼠随机分为模型组、苗药组、三七组,采用改良钻孔法建立不完全性胫骨骨折模型。造模成功当天,苗药组给予苗药九仙罗汉接骨汤煎剂(2 mL/kg)灌胃;三七组给予同体积三七粉液(1 mL/kg)灌胃;模型组给予同等计量蒸馏水灌胃,1次/d,共28 d。28 d后麻醉下取大鼠胫骨组织,茜素红染色测骨髓间充质干细胞成骨分化;三点弯曲试验测胫骨生物力学指标;苏木精-伊红染色测骨组织形态;ELISA检测血清中血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1表达水平;RT-PCR和Western blot检测骨形态发生蛋白2、转化生长因子β、Smad1、Smad2的mRNA和蛋白水平;实验已经过贵州中医药大学第二附属医院动物伦理委员会批准(2018-072)。结果与结论:①与模型组比较,苗药组与三七组骨髓间充质干细胞成骨分化后细胞多层重叠生长且形成灶状,有大量的钙结节形成,且苗药组较三七组效果更佳;②与模型组相比,三七组与苗药组骨形态发生蛋白2、转化生长因子β、Smad1、Smad2的mRNA和蛋白水平均有所上升(P<0.05);③三七组与苗药组最大载荷、刚度水平较模型组均有所升高(P<0.05);④模型组骨小梁较细,髓腔间空隙大,杂乱无章,较为松散,有大量的未钙化软骨细胞;三七组与苗药组大鼠骨组织形态较为接近,均表现为骨小梁较粗,髓腔空隙减小,分布较为有序,软骨细胞骨化较多;⑤与模型组相比,三七组与苗药组血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1表达水平有一定程度的提升(P<0.05);⑥模型组大鼠存在明显骨折线,三七组与苗药组标本骨折断端均达到完全愈合,但与三七组相比,苗药组标本骨折断端骨痂密度稍高;⑦结果说明,苗药九仙罗汉接骨汤可促进成骨细胞分化,加速骨折愈合,其作用机制可能是通过激活BMPs/Smad信号通路来实现。