苗药香囊对小鼠肺组织中NF-κB表达的影响

目的探讨苗药香囊对小鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)(P65)表达的影响。方法昆明种雄性小鼠80只,随机分为8组,空白对照组(A组)、匹多莫德组(阳性对照组,C组)、苗药香囊组(E组)、匹多莫德+苗药香囊组(G组)、冷刺激组(B组)、匹多莫德冷刺激组(D组)、苗药香囊冷刺激组(F组)、匹多莫德+苗药香囊冷刺激组(H组)。预防用药4周后,B、D、F、H四组予冷刺激[(4±1)℃暴露3 h]4 d制造冷刺激免疫低下模型。采用免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot法检测小鼠肺组织中NF-κB(P65)的表达。结果与A组比较,E、C、G组小鼠肺泡上皮细胞NF-κB(P65)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,F、D、H组小鼠肺泡上皮细胞NF-κB(P65)表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苗药香囊能够上调小鼠肺组织中NF-κB(P65)的表达,增强呼吸道免疫力。

苗药香囊对LPS诱导的急性肺损伤保护作用及其相关信号通路NF-κB的研究

目的:探讨苗药香囊对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)及相关信号通路NF-κB的影响。方法:48只雄性C57BL/6小鼠随机按每组12只分为4组,即正常对照组、模型组、香囊预防组、地塞米松预防组。香囊预防组每天吸入苗药香囊,为期30 d;地塞米松预防组连续3 d腹腔注射地塞米松作为阳性对照。第31天对除正常对照组外其余各组小鼠进行气管插管滴入脂多糖(LPS)进行急性肺损伤造模。检测肺组织湿/干质量比、髓过氧化物酶(MPO)活性、肺泡灌洗液(BALF)中总细胞数量、总蛋白浓度及IgM含量,酶联免疫吸附测量促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,HE染色光镜下观察肺组织病理学,采用蛋白印迹法检测肺组织中NF-κB、IκB的磷酸化水平,免疫组化染色检测肺组织中NF-κB的入核情况。结果:与正常对照组比较,模型组肺湿/干质量比及BALF中总蛋白、IgM、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,肺组织MPO活性及NF-κB、IκB磷酸化水平、NF-κB入核显著增高(P<0.001),肺组织病理学损伤明显;与模型组比较,香囊预防组上述指标显著降低(P<0.01或P<0.001),肺组织病理学损伤明显改善。结论:苗药香囊对脂多糖诱导的急性肺损伤有一定保护作用,其机制可能与调节NF-κB信号通路有关。

苗药香囊对小鼠肺泡灌洗液及肺组织中免疫球蛋白的影响

目的观察苗药香囊对正常小鼠肺泡灌洗液中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、免疫球蛋白G1(IgG1)及肺组织中免疫球蛋白A(IgA)、IgG1的影响。方法雄性昆明小鼠50只,随机分为5组(每组10只):空白对照组、玉屏风颗粒组(阳性对照组)、苗药香囊持续吸入组、苗药香囊间断吸入组、苗药香囊持续吸入+玉屏风颗粒组(香+玉组)。实验小鼠连续用药4周后,采用ELISA法检测肺泡灌洗液中SIgA、IgG1的含量,Western blot分析检测肺组织中IgA、IgG1蛋白的表达。结果与空白对照组相比,苗药香囊持续吸入组小鼠肺泡灌洗液中SIgA和IgG1含量显著升高,分别为(255.83±94.96)ng/ml和(165.37±54.59)ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);苗药香囊持续吸入组小鼠肺组织中IgA、IgG1的相对含量分别为3.90±0.29和2.69±0.89,显著高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论苗药香囊能够增加正常小鼠呼吸道中IgA、SIgA和IgG1的含量,进而提高其呼吸道黏膜的免疫功能。

苗药香囊对正常小鼠肺泡灌洗液及血清IL-2、IL-18水平的影响

目的观察苗药香囊对正常小鼠肺泡灌洗液及血清IL-2、IL-18水平的影响。方法雄性昆明小鼠50只,随机分为5组,即空白对照组、玉屏风颗粒组(阳性对照组)、香囊持续吸入组、香囊间断吸入组和香囊持续吸入+玉屏风颗粒组(香+玉组)。连续用药1个月后采用ELISA试剂盒检测灌洗液及血清中IL-2、IL-18水平的变化。结果香囊持续吸入组肺泡灌洗液IL-2和IL-18的含量分别为(90.99±10.27)pg/ml和(175.29±71.60)pg/ml,显著高于空白对照组的(54.08±23.49)pg/ml和(85.66±28.19)pg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论苗药香囊能够增加正常小鼠呼吸道中IL-2和IL-18的含量,进而增强正常小鼠呼吸道黏膜的局部免疫功能。

苗药防感香囊对小鼠外周血NKp46表达的影响

目的探讨苗药防感香囊对小鼠固有免疫功能的影响,为苗药防感香囊预防流感提供理论依据。方法 60只昆明种雄性小鼠随机分为6组,每组10只:正常对照组(A组)、正常用药组[持续吸入香囊(B组)]、免疫低下模型组(C组)、模型用药组[间断吸入香囊(D组)、持续吸入香囊(E组)、玉屏风散灌胃(F组)]。预防用药4周后,冷刺激(4℃4 h暴露)3 d制造小鼠免疫低下模型后,取血用于流式细胞仪检测NKp46细胞。结果B组外周血NKp46较A组升高,差异有统计学意义(P<0.05);E组外周血NKp46较C组及D组升高,差异有统计学意义(P<0.05),且与F组相当(P>0.05)。结论持续吸入苗药防感香囊能上调正常小鼠及免疫抑制小鼠外周血NKp46的表达,增强机体固有免疫功能。

苗药防感香囊对小鼠呼吸道TLR2/4、SIgA、IgG1的影响

目的探讨苗药防感香囊(苗药香囊)对小鼠呼吸道免疫功能影响的分子机制。方法小鼠吸入香囊4周后,定量PCR和免疫印迹法检测小鼠肺组织TLR2、TLR4基因和蛋白表达,ELISA法测肺泡灌洗液SIgA和IgG1含量。结果持续吸入香囊组小鼠肺泡灌洗液中SIgA、IgG1含量较高,肺组织TLR2/4基因及蛋白表达水平较空白对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),且与玉屏风散阳性对照组相当(P>0.05)。结论持续吸入香囊能上调小鼠呼吸道SIgA、IgG1、TLR2/4表达,增强呼吸道抵抗力。

苗药防感香囊对小鼠体重和死亡率的影响

目的:观察苗药香囊对小鼠体重和死亡率的影响。方法:将60只正常昆明种雄性小鼠随机均分为香囊持续吸入组(A组)、玉屏风散阳性对照组(B组)、香囊间断吸入组(C组)、空白对照组(D组)和香囊持续吸入加玉屏风散组(E组);B、E组给予玉屏风散颗粒(20mg/10g/d)灌胃;A、C、D组给等体积生理盐水(NS)灌胃;A、E组持续吸入香囊,C组间断吸入香囊。4周后停止灌胃、吸入香囊,继续喂养小鼠11个月,观察小鼠的体重和死亡情况。结果:A、B、E组小鼠体重升高,与C、D组比较差异有统计学意义(P<0.05);A、B、E组两两比较差异无统计学意义(P>0.05);C组与D组比较差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、E组小鼠死亡率降低,与D组比较差异有统计学意义(P<0.05),A、B、E组与C组比较差异无统计学意义(P>0.05),A、B、E组两两比较差异无统计学意义(P>0.05),C组与D组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苗药香囊对机体有保护作用,其机制需进一步研究。

苗药防感香囊对小鼠肺组织IRAK-M、SOCS1基因和蛋白表达的影响

目的:探讨苗药防感香囊对小鼠肺组织白介素1受体相关激酶M(IRAK-M)、细胞因子信号抑制因子(SOCS1)基因和蛋白表达的影响。方法:48只小鼠随机分为空白对照组(A组)、单纯香囊持续吸入组(B组)、单纯冷刺激组(C组)、香囊持续吸入加冷刺激组(D组),每组12只,分别给予相应干预,37 d后收集肺组织,采用定量PCR和免疫印迹法检测小鼠肺组织IRAK-M、SOCS1 mRNA和蛋白表达。结果:B、D组小鼠肺组织中IRAK-M mRNA表达水平低下,与A、C组比较差异有统计学意义(P<0.05);B、D组肺组织中SOCS1 mRNA表达水平低于C组(P<0.05);B组SOCS1蛋白表达水平低下,与A、C组比较差异有统计学意义(P<0.05);其余各组IRAK-M的蛋白表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苗药防感香囊能够下调TLR通路的负性调控因子IRAK-M、SOCS1 mRNA及SOCS1蛋白的表达水平,增强TLR通路介导的天然免疫功能。

苗药防感香囊对小鼠肺组织中Toll样受体7和干扰素α/β表达的影响

目的研究苗药防感香囊对小鼠肺组织Toll样受体7(TLR7)、干扰素α(IFNα)、干扰素β(IFNβ)的表达影响,从Ⅰ型干扰素信号通路角度探讨苗药防感香囊调节呼吸道免疫功能的作用机制,同时为苗药防感香囊有效预防呼吸道病毒感染提供科学理论依据。方法 48只昆明种雄性小鼠随机分为空白对照组、香囊组、冷刺激组、香囊+冷刺激组,每组12只。香囊组、香囊+冷刺激组持续吸入苗药防感香囊30 d,第31天在已有干预基础之上给予冷刺激组、香囊+冷刺激组持续1周的冷刺激制造免疫低下模型,其后处死小鼠,留取标本检测。采用HE染色观察造模后肺组织结构,免疫组织化学染色、实时荧光PCR(Real time-PCR)、蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织中TLR7、IFNα、IFNβ的基因/蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附测定小鼠血清中IFNα、IFNβ分泌水平。结果与空白对照组比较,香囊组、香囊+冷刺激组小鼠肺组织中TLR7、IFNα/β的蛋白及mRNA表达增加(P<0.05),冷刺激组小鼠肺组织中TLR7、IFNα/β的蛋白及mRNA表达相对减少(P<0.05);与冷刺激组比较,香囊+冷刺激组小鼠肺组织中TLR7、IFNα/β的蛋白及mRNA表达水平增加(P<0.05);与空白对照组比较,仅香囊+冷刺激组中小鼠血清IFNα、IFNβ分泌水平升高(P<0.05),其他组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论苗药防感香囊能够良性调节小鼠肺组织TLR7、IFNα、IFNβ基因和(或)蛋白表达水平;寒冷刺激能抑制小鼠肺组织TLR7、IFNα、IFNβ的转录与表达;苗药防感香囊能在一定程度上改善寒冷对小鼠肺组织TLR7、IFNα、IFNβ表达的抑制状态;苗药香囊可通过TLR7介导的通路中IFNα、IFNβ起到有效预防呼吸道感染,增强机体非特异免疫的作用。

苗药防感香囊预防甲型H1N1流感的应用观察

流行性感冒是一种传染性强、传播速度快的全球性传染病,是严重的公共卫生问题。流感病毒分甲、乙、丙3个类型,其中甲型H1N1流感病毒可造成流行或大流行,且变异最常见,常引起严重的并发症和死亡。2010年,世界卫生组织和我国国家疾病预防控制中心对甲型H1N1流感病毒变异与再次大规模爆发可能性做出预警。为控制疫情，在黔东南州政府领导下，2010年3月，

苗药防感香囊活性提取物对聚肌胞苷酸刺激的支气管上皮细胞IFN-α、IL-6水平的影响及机制

目的探讨苗药防感香囊活性提取物甘草酸二铵(DG)与异草苷酸镁(MI)分别对聚肌胞苷酸(PIC)刺激的人正常支气管上皮细胞(NHBE)的作用与影响,明确DG与MI的疗效并探讨可能的作用机制。方法使用1μg/ml的PIC刺激NHBE构建细胞模型,阳性对照组地塞米松(DXMS)的浓度为10μg/ml,分别使用0.5、1.0、2.0 mg/ml低中高3种浓度的DG与MI进行细胞给药干预。使用CCK8法检测细胞活性,ELISA法检测干扰素α(IFN-α)、白介素-6(IL-6)表达水平,qPCR法检测IFN-α、 IL-6 mRNA表达水平,Western blot检测p-TAK1/TAK1与p-IkB/IkB水平。结果 CCK8检测结果显示,NHBE细胞活力随药物浓度的增加而下降,DXMS处理的阳性对照组中细胞活力下降更加明显。造模后,相较于空白对照组,IFN-α、IL-6表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05);相较于模型组,不同剂量的DG与MI处理后,IFN-α、IL-6表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。造模后,相较于空白对照组,IFN-α、IL-6 mRNA表达量显著上升(P<0.05);干预组相较于模型组,IFN-α、IL-6 mRNA表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。相较于空白对照组,PIC造模后的通路蛋白p-TAK1/TAK1与p-IkB/IkB比值有明显的升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,相较于模型组,经低中高3种浓度的DG与MI处理NHBE细胞后,p-TAK1/TAK1与p-IkB/IkB比值未见明显改变,而在DXMS处理后的阳性对照组细胞中该比值相较模型组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苗药防感香囊提取物主要活性成分之一为甘草酸铵。DG与MI对PIC诱发NHBE促炎症反应有一定疗效,其可能的作用方式是当细胞处于一种促炎症反应状态时,通过下调IFN-α、IL-6的表达量,减轻PIC诱导的炎症反应,降低炎症对宿主的免疫损伤,从而调节呼吸道免疫功能,抵抗呼吸道感染。对于PIC诱发NHBE促炎症反应机制是否与TAK1与IkB蛋白的磷酸化水平有关,则需要进一步深入研究。