苜蓿矮化病毒实时荧光定量PCR检测体系的建立

为灵敏、快速检测紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中的苜蓿矮化病毒(ADV),根据该病毒L蛋白保守序列设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测体系,并应用该方法对田间样品和种子进行快速检测。结果表明,建立的RT-qPCR检测技术可对苜蓿中的苜蓿矮化病毒含量进行精确检测,最低检测浓度为9.8×10^(2)copies/μL,灵敏度约是常规PCR的100倍。通过对101份苜蓿样品的检测验证,该方法阳性检出率为61%,较常规PCR高6%。挑选的10份苜蓿种子中有3份被检测出携带苜蓿矮化病毒,病毒含量范围为0~3.02×10^(6)copies/μL。表明建立的RT-qPCR检测体系特异性强、灵敏度高,可应用于苜蓿矮化病毒的定量检测。

苜蓿矮化病毒(ADV)中国分离物的鉴定和检测

为明确新疆栽培紫花苜蓿(Medicago sativa)矮化、丛枝等疑似病毒病症状的病原,本研究应用小RNA测序结合RT-PCR技术开展了病原分子检测与鉴定。结果表明,在36份样品中扩增得到一条长约1000 bp的特异性片段,该片段序列与已报道的其他苜蓿矮化病毒分离物聚合酶蛋白(L)基因的一致性为84.50%~88.24%。构建的系统发育树表明该病毒为苜蓿矮化病毒(Alfalfa dwarf virus),隶属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)细胞质弹状病毒属(Cytorhabdovirus)。首次报道了苜蓿矮化病毒病在中国的发生。