五脉绿绒蒿总黄酮及其中苜蓿素的体外抗氧化活性

目的研究五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素的体外抗氧化作用。方法采用体外实验研究五脉绿绒蒿总黄酮与不同剂量苜蓿素的化学抗氧化作用(包括对羟基自由基和超氧阴离子的清除作用)以及动物组织抗氧化作用(包括对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用和对H2O2诱导的红细胞氧化溶血的保护作用)。结果五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素可清除羟基自由基与超氧阴离子;抑制大鼠肝匀浆自发性与VitC-Fe2+诱导性脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的生成;减少H2O2诱导的红细胞氧化溶血。结论五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素具有清除自由基及抗脂质过氧化的作用。

苜蓿素对脂多糖刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞活性和炎症相关基因表达的影响

本试验旨在研究苜蓿素对脂多糖(LPS)刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞活性和炎症相关基因表达的影响。将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成6组,对照组采用基础培养基,试验组在基础培养基中分别加入1μg/m L LPS(L组)、1μg/m L LPS和2.5μg/m L苜蓿素(L+2.5组)、1μg/m L LPS和5.0μg/m L苜蓿素(L+5组)、1μg/m L LPS和10.0μg/m L苜蓿素(L+10组)以及1μg/m L LPS和15.0μg/m L苜蓿素(L+15组),培养24 h。结果表明:1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞相对增殖率极显著降低(P<0.01),而L+2.5组和L+10组则极显著升高(P<0.01);2)与L组相比,L+10组和L+15组细胞超氧化物歧化酶活性显著升高(P<0.05),而乳酸脱氢酶活性和一氧化氮浓度显著降低(P<0.05);3)与L组相比,L+5组和L+10组细胞的白细胞介素8、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、Toll样受体2和Toll样受体4的相对表达量均极显著降低(P<0.01),L+5组细胞的髓样分化因子88相对表达量均显著降低(P<0.05)。结果提示,在LPS刺激下,添加苜蓿素能够提高奶牛乳腺上皮细胞活性和抗氧化性能,抑制炎症相关基因的表达,发挥抗炎作用。

苜蓿素对小鼠免疫功能的影响

目的研究苜蓿素对小鼠免疫功能的影响。方法用DNFB制备KM种小鼠迟发型超敏反应(DTH)模型,用打孔器取下直径8 mm的耳片,摘取脾脏和胸腺组织,称量上述组织,计算肿胀度抑制率和脾脏、胸腺指数;取正常小鼠脾脏,淋巴细胞培养,分别用刀豆蛋白、脂多糖刺激分化成T、B淋巴细胞,分别加入不同浓度(20、10、5、1、0.5和0.1μg/m L)苜蓿素,37℃,48 h后,测定吸收度并计算受试药对淋巴细胞增殖的抑制率。结果苜蓿素剂量5 mg/kg和10 mg/kg均能减轻小鼠耳肿胀程度且降低DTH小鼠的胸腺指数,10 mg/kg苜蓿素能降低其脾脏指数,但是5 mg/kg苜蓿素并没有降低DTH小鼠的脾脏指数;体外细胞实验发现:苜蓿素终浓度为20、10、5、1、0.5和0.1μg/m L时能抑制正常小鼠T淋巴细胞的增殖,苜蓿素终浓度为20、10、5、1和0.5μg/m L时能抑制正常小鼠B淋巴细胞的增殖。结论苜蓿素具有一定的免疫抑制作用。

苜蓿素对脂多糖诱导下奶牛乳腺上皮细胞炎症和乳蛋白合成相关基因表达的影响

为分析苜蓿素对脂多糖诱导下体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗炎和乳蛋白合成相关基因表达的影响,本研究将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成4组,即基础培养基(对照)和基础培养基中分别加入1μg·m L-1LPS(L)、1μg·m L-1LPS+10μg·m L-1苜蓿素(L+T)和10μg·m L-1苜蓿素(T)。结果显示,1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞的活性显著下降(P<0.05),而T组则显著升高(P<0.01)。2)L+T组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L组(P<0.01),而一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量则显著低于L组(P<0.01)。3)LPS能够显著升高细胞的白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体2(TLR2)、TLR4和髓样分化因子88(My D88)表达水平(P<0.01),而添加苜蓿素能够显著降低IL-1β、TNF-α、TLR2和TLR4的表达水平(P<0.01)。4)与对照组相比,T组细胞的酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子5(STAT5)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、真核细胞始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)和核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)表达量显著升高(P<0.01),而碱性氨基酸转运载体1(CAT1)表达量显著降低(P<0.01)。LPS能够显著降低细胞的CAT1、L型氨基酸转运载体1(LAT1)、STAT5、m TOR和4EBP1表达水平(P<0.01或P<0.05),而添加苜蓿素能够显著升高STAT5表达水平(P<0.01)。结果表明,乳腺细胞在LPS刺激下,导致细胞内炎症因子基因表达升高和抑制乳蛋白合成相关基因的表达,而添加苜蓿素能够抑制乳腺细胞内炎症因子基因表达,但对乳蛋白合成的相关基因表达作用不明显;无LPS刺激下,添加苜蓿素能够提高乳腺细胞活性和促进乳蛋白合成相关基因的表达。

苜蓿素对人直肠癌SW1116细胞增殖和凋亡的作用及其机制

本文探讨苜蓿素对人直肠癌SW1116细胞增殖和凋亡的作用及其机制。采用MTT法检测苜蓿素对SW1116细胞生长的抑制作用;AO/EB染色后观察凋亡细胞形态;流式细胞术检测对细胞周期的影响;DNA片段化分析对细胞凋亡的作用;Western blot检测对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果显示,苜蓿素可明显抑制SW1116细胞的增殖,呈剂量依赖性;AO/EB染色观察到给药组出现细胞凋亡特征;苜蓿素可阻滞细胞于G0/G1期和增加SW1116细胞凋亡率;凝胶成像分析仪检测到典型的DNA阶梯状条带;苜蓿素可呈剂量依赖地减弱Bcl-2和增强Bax蛋白表达。上述结果表明,苜蓿素可显著抑制人直肠癌SW1116细胞的增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白有关。

苜蓿素对哮喘小鼠肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的抑制作用

目的观察苜蓿素对低剂量脂多糖(LPS)诱导的哮喘小鼠气道炎症的抑制作用。方法采用低剂量LPS+卵白蛋白(OVA)建立BALB/c小鼠哮喘气道炎症反应模型,随机分为哮喘模型组、苜蓿素组、地塞米松(阳性药)组,另设空白对照组。ELISA法对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症介质NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平进行检测;HE染色观察小鼠肺组织病理情况;RT-PCR法和Western blot法对小鼠肺泡巨噬细胞的Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κB p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白表达进行检测。结果苜蓿素可显著降低哮喘小鼠BALF液中NO、TNF-α、IL-1β水平,有效改善哮喘小鼠肺部炎症,显著下调肺泡巨噬细胞的TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量。结论苜蓿素对哮喘小鼠气道炎症有抑制作用,其机制可能与干预TLR4/My D88/NF-κB通路有关。

高效液相色谱法测定苜蓿中苜蓿素的含量

目的:建立苜蓿中苜蓿素的 HPLC 测定方法。方法:色谱柱为 Zorbox SB C_(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-水(65:35)为流动相,流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长为349 nm,进样量为5μL。结果:苜蓿素进样量在0.02～0.5 μg的范围内与峰面积积分值有良好的线性关系,r=0.9999。高、中、低3个浓度加样平均回收率(n=2)分别为97.8%,97.0%,100%;其偏差分别为0.57,0,90,0.80;平均回收率为98.3%(n=6)。结论:本方法操作简便,结果准确可靠。

苜蓿素抗变态反应作用

目的研究苜蓿素抗过敏作用。方法实验分为阳性对照组、NS组、溶媒组和苜蓿素高、中、低剂量组,分别通过致敏豚鼠和正常豚鼠离体回肠实验、大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验和致敏大鼠整体动物气道炎症反应实验来研究苜蓿素在抗过敏反应中的作用。结果苜蓿素在浴槽终末浓度1×10^(-5)g/mL、2×10^(-5)g/mL和4×10^(-5)g/mL的情况下,较对照组可以明显抑制Schultz-Dale反应引起的致敏豚鼠回肠张力的增加程度(P<0.01);在浴槽终末浓度2×10^(-5)g/mL能显著抑制组胺所致正常豚鼠回肠张力的增加(P<0.05)。苜蓿素5 mg/kg组和10 mg/kg组均能显著抑制大鼠肥大细胞脱颗粒(P<0.05)。在致敏大鼠整体动物气道炎症反应实验中,苜蓿素5 mg/kg组和10 mg/kg组均能显著降低大鼠血中白细胞(WBC)和嗜酸性粒细胞(EOS)数目,降低EOS%的百分量(P<0.05)。结论苜蓿素具有抗致敏动物变态反应作用。

苜蓿素的药理作用研究概况

苜蓿素(Tricin)属黄酮类化合物,普遍存在于禾本科、大戟科等植物中,具有广泛的药理作用,如抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等,尤其抗炎作用明显。本文对苜蓿素的提取分离方法、药理作用及作用机制进行总结,重点关注抗炎作用及机制的研究进展。苜蓿素潜在的临床实用价值说明其具有良好的开发前景。

竹茹中苜蓿素含量的测定

本文利用高效液相色谱技术对提取分离得到的苜蓿素进行含量测定,为竹茹中苜蓿素的含量测定提供参考依据。采用95%乙醇对竹茹进行浸泡提取,将提取后的浸膏溶于一定量的蒸馏水,依次用石油醚、乙酸乙酯萃取。利用HPLC法测定竹茹乙酸乙酯萃取物中苜蓿素的含量。结果显示,苜蓿素在50.0~350.0μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好,为Y=36009x-44332(R^(2)=0.9995),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<2%(n=6),加样回收率为97.98%(RSD=0.60%)。测得竹茹中乙醇提取物中苜蓿素的含量为6.73mg·g^(-1),竹茹中苜蓿素的含量为0.0064%。利用高效液相色谱技术测定竹茹中苜蓿素的含量测定,该方法准确可靠,重复性好,可为竹茹中苜蓿素的含量测定提供数据参考,为竹茹的进一步研究奠定基础。

苜蓿素在面包中的应用研究

将苜蓿素添加在面包中,通过正交实验分析,确定了其最佳用量。实验表明,苜蓿素可以添加在面包中,使面包的蛋白质含量大大提高。虽然苜蓿素的添加会降低面包的烘焙品质,但通过加入其他原料可以得到改善。在面包中添加苜蓿素的最大量为2%。

基于网络药理学和分子对接技术探讨苜蓿素抗结肠癌作用机制

目的利用网络药理学和分子对接技术分析方法,建立苜蓿素抗结肠癌的"化合物-靶标-疾病-通路"作用网络,来探索苜蓿素抗结肠癌作用机制。方法通过PubChem和swisstarget数据库来寻找苜蓿素的作用靶标,用Therapeutic target数据库寻找结肠癌疾病的可能相关靶标。采用bioinformatics数据库将两者交叉的靶点进行合并。接着运用String数据库结合Cytoscape软件绘制结肠癌靶点的蛋白相互作用网络,通过david数据库对通路进行富集与分析,采用DISCOVERY STUDIO软件对苜蓿素与作用靶点进行分子对接验证。结果苜蓿素与结肠癌交叉共有靶点有69个,经通路分析发现共涉及通路共有55条,有21条通路与癌症相关。分子对接显示苜蓿素分别能与AKT1、EGFR和ESR1蛋白稳定结合。并分别通过氨基酸残基LYS A276、THR A160、THR A195氢键连接、GLY A159、GLY A294、GLU A198碳氢键等连接与AKT1稳定结合;通过THR A570、METB576碳氢键、ALA A573 PI氢键、VAL A575、PRO A572PI烷基、GLY A574 PI酰基与EGFR能稳定对接;通过GLY B457、ARG A434氢键连接、TYR B459、ALA A430、SER A433、ASN B455碳氢键连接等与ESR1稳定结合。结论本研究揭示了苜蓿素治疗结肠癌具有多靶点、多通路的潜在机制,为后续的研究提供方向与思路。

苜蓿素对高脂饲粮诱发的大鼠血管内皮损伤的治疗作用

本试验旨在研究苜蓿素对高脂饲粮诱发的大鼠血管内皮损伤的治疗作用。将50只SD大鼠随机分为5组,即空白对照组、高脂模型组、辛伐他汀治疗组[1.8 mg/(kg·d)]和低剂量苜蓿素治疗组[5 mg/(kg·d)]及高剂量苜蓿素治疗组[15 mg/(kg·d)],每组10个重复,每个重复1只。除空白对照组外,其余各组均采用高脂饲粮喂养构建大鼠血管内皮损伤模型,建模周期和治疗周期各为5周,建模结束(第36天)时,测定空白对照组和高脂模型组大鼠的血脂相关指标,并通过苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉形态学变化。治疗结束(第70天)时,检测各组大鼠的血脂相关指标及观察主动脉形态学变化,微量法检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,酶联免疫分析法测定大鼠血清中炎症相关因子含量,Western blot法测定大鼠主动脉核因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白表达。结果表明:1)建模结束时,与空白对照组相比,高脂模型组大鼠血脂异常,血管内皮可见连续多处损伤,血管内皮和皮下组织均明显增厚,且内皮局部向管腔明显隆起,表明建模成功。2)治疗结束时,与模型组相比,各治疗组大鼠血脂水平均出现明显改善,主动脉内皮无损伤状况,血清SOD活性极显著升高(P<0.01),血清LDH活性(除低剂量苜蓿素治疗组)和MDA含量显著降低(P<0.05),炎症相关因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)]的含量或活性及NF-κB和MAPK信号通路蛋白[NF-κB p65蛋白(p65)、NF-κB抑制蛋白α(IKB)、磷酸化NF-κB p65蛋白(P-p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(P-IKB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(P-ERK1/2)]表达量和磷酸化水平均极显著降低(P<0.01),而且高剂量苜蓿素治疗组对炎症通路蛋白表达的抑制效果强于辛伐他汀治疗组。综上所述,苜蓿素能够通过降血脂、抗氧化、消炎等多种途径修复高脂饲粮诱发的大鼠血管内皮损伤。

小麦籽粒中苜蓿素提取的工艺优化

采用正交试验方法优化了小麦苜蓿素的提取工艺.结果表明,小麦苜蓿素的最佳提取工艺为:乙醇浓度70%、料液比1:20、醇提时间1.5 h、超声处理时间30 min.

苜蓿素和胎次对母猪繁殖性能的影响

试验旨在研究苜蓿素和胎次对母猪繁殖性能的影响,选择90头母猪,头胎、二胎和三胎各30头,每个胎次分为2个处理,分别饲喂试验日粮(添加500 g/t苜蓿素)和基础日粮,共6个处理,每个处理15个重复,每个重复1头母猪,饲养试验时间为配种至产仔。结果表明,日粮添加苜蓿素能显著降低弱仔数(P<0.05),在延长母猪妊娠期的同时提高产仔均重(P<0.01),但有增加死胎的趋势;胎次能显著提高健仔数(P<0.05)和死胎数(P<0.01),影响产仔均重(P<0.05),有增加产仔数和降低弱仔数的趋势;苜蓿素和胎次在弱仔数上有交互作用(P<0.05)。结果提示,随母猪胎次的增加会同时提高健仔数和死胎数,日粮添加苜蓿素可以延长妊娠期,提高健仔重,降低弱仔数,提高繁殖性能。

不同品种小麦籽粒中苜蓿素含量的比较研究

为了了解苜蓿素在不同品种小麦中的含量特征,采用溶液浸提法和紫外分光光度计法测量来自山东省、安徽省、河南省、江苏省和河北省5个省份的26个品种小麦的苜蓿素。结果表明,在26个小麦品种中苜蓿素含量最高的是山农20,为32.793μg/g,淮麦32中苜蓿素的含量最低,为6.290μg/g。有10个品种小麦苜蓿素的含量分布在6～10μg/g,14个品种小麦苜蓿素的含量在10～20μg/g,仅有山农20和良星77中苜蓿素的含量在20μg/g以上。不同品种小麦苜蓿素的含量变化较大,且存在显著性的差异。

PR-HPLC法测定甘肃蚤缀中苜蓿素、苜蓿素-4′-O-β-愈创木基甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素和苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷

目的建立HPLC法对甘肃蚤缀中苜蓿素、苜蓿素-4′-O-β-愈创木甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素和苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷同时定量的方法。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DiamonsilTM C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸梯度洗脱;体积流量为1.0mL/min;柱温为30℃;检测波长为350nm;进样量为10μL。结果苜蓿素、苜蓿素-4′-O-β-愈创木基甘油基酯、异牡荆素、异金雀花素和苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷5个化合物达到基线分离且线性关系良好,线性范围分别为5.44～97.92μg/mL(r=0.9992)、4.76～85.68μg/mL(r=0.9992)、6.52～117.36μg/mL(r=0.9996)、4.92～88.56μg/mL(r=0.9998)、1.60～29.34μg/mL(r=0.9991),平均加样回收率分别为100.21%(RSD=1.94%)、97.50%(RSD=2.50%)、100.38%(RSD=2.46%)、98.54%(RSD=2.40%)、97.45%(RSD=3.14%)。结论测定了4种来源的甘肃蚤缀样品中5个化合物的量,该方法分离度好、快速、简便,重现性佳。

制备高效液相色谱从竹根中制备苜蓿素的研究

目的研究从竹根中制备苜蓿素对照品的方法。方法结合硅胶柱色谱、制备HPLC法对竹根醋酸乙酯部位进行分离纯化,通过熔点及UV、IR波谱学方法对其分离产物进行结构鉴定。结果所得苜蓿素用归一化法定量,质量分数大于98%。结论本法简便,制备成本低,所得苜蓿素可作为中药定性、定量分析使用的对照品。

竹茹中苜蓿素对照品的高效液相半制备色谱制备研究

目的建立高效液相半制备色谱制备竹茹中苜蓿素对照品的方法。方法竹茹用50%乙醇提取,浓缩成浸膏,随后上聚酰胺柱色谱,采用70%乙醇柱色谱洗脱物进行HPLC分离制备。半制备色谱条件:色谱柱为Luna C18ODS(250 mm×10mm,10μm),流动相为乙腈-1%甲酸水溶液(35∶65);体积流量4 mL/min;进样量1 mL;检测波长345 nm。结果该法所得化合物用HPLC归一化法定量,质量分数大于98%,根据波谱学数据鉴定化合物为苜蓿素。结论建立的方法简便,所得苜蓿素纯度高,可作为分析方法的对照品。

HPLC法测定苜蓿素的表观油水分配系数

目的:测定苜蓿素在正辛醇-水和正辛醇-缓冲液体系中的表观油水分配系数。方法:采用HPLC法测定苜蓿素的浓度,使用Hypersil ODS色谱柱(5μm,4.6 mm×200 mm),以甲醇-水(65∶35)为流动相,流速为1.0 mL.min-1,检测波长270 nm,摇瓶法测定苜蓿素的表观油水分配系数。结果:苜蓿素的表观油水分配系数log P=1.66。结论:以HPLC法测定苜蓿素的表观油水分配系数简便、快捷。