苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒与Bt混合试剂对葡萄花翅小卷蛾的毒力分析

为测定野生型和重组型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,Ac MNPV)在葡萄花翅小卷蛾生物防治中的应用潜力,本文以野生型和重组型Ac MNPV及其与苏云金杆菌(Bt)的混合试剂为试验材料,分别测定病毒及其与Bt的混合试剂对葡萄花翅小卷蛾幼虫的室内生物活性。研究结果表明:感染WT(野生型Ac MNPV)、WT-31(Ac MNPV携带苹果蠹蛾颗粒体病毒Cydia pomonella granulovirus(CpGV)orf31)、WTgp64-31(Ac MNPV缺失gp64基因、携带Cp GV orf31)的幼虫逐日死亡率呈现逐渐上升趋势,但作用速率缓慢;WT与WT-31的校正死亡率分别为80.36%、71.43%,并显著高于WTgp64-31(58.93%),但前两者之间差异不显著性。以WT和WT-31为基础,在混合有1000 IU/mL Bt的情况下,进一步分析表明,WT-31的LC50和LC90分别为1.66×10^(3)PIB/mL、3.07×10^(5)PIB/mL;浓度为104PIB/mL、105PIB/mL的WT-31的LT50分别为5.67 d、4.24 d,LT90分别为11.62 d、9.33 d;Ac MNPV能够感染葡萄花翅小卷蛾,较低浓度的Bt能够显著促进重组Ac MNPV(WT-31)的杀虫效率。研究结果将为葡萄花翅小卷蛾的生物防治提供理论依据。

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的感染对Sf9细胞周期的影响

病毒的感染导致细胞内部发生一系列变化。应用流式细胞仪FACS的荧光检测 ,测出Sf9细胞完成整个周期循环大约需要 18h ,G1、S、G2 /M各时相的时间间隔约为 6h ;AcNPV感染Sf9细胞 12 18h ,细胞被抑制于G2 /M期 ;Sf9细胞同步于G1/S期后释放细胞并用AcNPV感染 ,12h后 ,2 / 3的细胞处于G2 /M期 ,1/

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾幼虫的杀虫活性及生防效果

为明确苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)对草地贪夜蛾幼虫的防治效果,采用室内生物活性测定、田间药效试验等方法,研究和分析AcMNPV对草地贪夜蛾幼虫的杀虫活性和生防效果,结果显示,AcMNPV对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC_(50)=2.9×10^(7)PIB/mL;在田间,AcMNPV+Bt复配制剂1千万苜核·苏云菌悬浮剂(1500 mL/hm^(2))药后第10天的平均虫口防效为68.99%,而药后第15天的平均防效亦有66.87%,均对草地贪夜蛾幼虫表现出较好的防治效果。应用DNAMAN 6.0软件对试验后死虫样进行DNA同源比对鉴定,结果显示polh、lef-8和lef-9基因序列同源性均达到100%。以上结果表明AcMNPV对草地贪夜蛾幼虫有较好的控制作用。建议在草地贪夜蛾低龄幼虫发生高峰期施用1千万苜核·苏云菌悬浮剂,最好选择在晴天16:00-17:00使用,避开高温和光照等不利环境条件的影响,以使病毒制剂能更好地发挥作用,提高其防治效果。

复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒制剂对两种夜蛾的毒力测定

对防治蔬菜甜菜夜蛾（ＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｅｘｉｇｕａＨüｂｎｅｒ）和斜纹夜蛾（ＰｒｏｄｅｎｉａｌｉｔｕｒａＦａｂｒｉｃｉｕｓ）为主并兼治菜螟、菜青虫、小菜蛾等鳞翅目害虫的单一型和复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＭＮＰＶ）生物杀虫剂进行筛选。毒力测定结果表明：选用单剂的ＡｃＭＮＰＶＡ株（从甜菜夜蛾虫体增殖获得）的毒力（ＬＤ５０＝１３１．８ＰＩＢ／头）比ＡｃＭＮＰＶＢ株（从草地贪夜蛾细胞株Ｓｆ９中获得）的毒力（ＬＤ５０＝１９４９．４ＰＩＢ／头）高１４．７９倍。ＡｃＭＮＰＶＡ株加苏云金杆菌（Ｂｔ）加斜纹夜蛾核型多角体病毒（ＰｌＮＰＶ）形成的复配型ＡｃＭＮＰＶＡ株制剂对甜菜夜蛾二龄幼虫的ＬＤ５０值（２１．８２～２１．４ＰＩＢ／头）与单剂ＡｃＭＮＰＶＡ株的ＬＤ５０值（１６８．８４～２０４．３６ＰＩＢ／头）比值为９．５～７．７倍。同样复配型ＡｃＭＮＰＶＡ株制剂对斜纹夜蛾二龄幼虫ＬＤ５０（３．１６～１５．４６ＰＩＢ／头）与单剂ＰｌＮＰＶＬＤ５０值（１６．０２～５３．５３ＰＩＢ／头）比值为５．１～３．５倍。说明以Ｂｔ和非耙标害?

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64蛋白的优化表达

研究培养基成份、pH值、接种量、诱导温度、诱导时间及诱导剂浓度等条件对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达水平的影响.SDS-PAGE电泳分析结果表明:在37℃的LB培养基中培养3h,用终浓度为0.3mmoL/L的IPTG于30℃诱导5h时表达水平最高.苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64重组蛋白在大肠杆菌中的优化表达为深度解析其在病毒感染过程中的功能奠定了基础.

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Gp64基因的原核表达

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白Gp64是杆状病毒感染宿主细胞的重要功能蛋白之一.通过Oligo6.0设计一对特异性引物,用于扩增Gp64基因的部分DNA片段,对聚合酶链式反应扩增得到的DNA片段进行纯化,并对纯化后的双酶切DNA片段与经同尾酶双酶切后的原核表达载体p ET28a进行连接;对捕获有重组质粒p ET28a-Gp64的大肠杆菌BL21(DE3)细胞进行异丙基硫代半乳糖苷诱导,通过SDS-PAGE对诱导产物进行电泳分析,结果表明扩增的目的片段获得了表达;采用电透析的方法纯化了该蛋白,为进一步制备抗Gp64蛋白抗体做准备.

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白GP64与寄主细胞互作蛋白的初步鉴定

鉴定杆状病毒与宿主昆虫细胞间的互作蛋白,对于进一步研究病毒受体的特性与功能,理解病毒与宿主细胞的相互作用关系具有重要意义。为了阐明苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Ac MNPV)出芽型病毒粒子(BV)囊膜蛋白GP64是否与宿主细胞表面蛋白存在互作,利用蛋白酶K消化处理Tn细胞系的细胞膜蛋白,结果表明BV不能感染经300μg/m L蛋白酶K消化处理的Tn细胞,免疫荧光检测BV病毒粒子不能吸附于Tn细胞膜上。利用病毒覆盖蛋白印迹实验(VOPBA)及质谱初步鉴定的结果显示,Tn细胞膜上的翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是与BV囊膜蛋白GP64互作的候选蛋白。

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)增殖条件研究

试验研究表明：32℃温度条件下增殖病毒多角体的生产效率最高，以甜菜夜蛾为宿主，5龄幼虫是最适宜的喂毒时期，较低的喂毒剂量可以减少毒源多角体的消耗。5龄、32℃和105～106PIB·ml-1处理组合每头供试幼虫平均日产AcMN－PV多角体可达（2．30～2．

荧光增白剂对重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的增效作用

以 β -半乳糖苷酶基因为标志基因的重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体 (AcMNPV -hsp70 /lacZ)研究光增白剂对该病毒的增效作用及其作用方式 .通过病毒毒力的生物测定表明 :光增白剂FB - 2 8能提高甜菜夜蛾幼虫的死亡率 ,降低半致死浓度 ,缩短半致死时间 ;光增白剂的增效作用与感染虫龄有关 .此外 ,应用组织切片技术对中肠组织病理以及血淋巴细胞感染观察表明 :在幼虫的病毒接种物中添加合适浓度的荧光增白剂不会改变病毒在幼虫中肠组织中的感染部位 ,却可以提高幼虫对病毒的敏感性 ,产生更多的病灶 .图版 1图 4表 3参

米满对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒关于幼虫生长发育及羽化成虫后繁殖力的增效作用

研究了以甜菜夜蛾为靶标害虫时,米满对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的作用效果。结果表明,米满对病毒协同作用显著抑制了幼虫的生长发育,幼虫体重增长明显低于单用病毒;联合处理的存活幼虫羽化为成虫后,交配率、产卵量、卵孵率等均与对照无显著差异。

米满对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的增效作用研究

研究了以甜菜夜蛾为靶标害虫时,米满对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的作用效果。结果表明,在作用于甜菜夜蛾幼虫时,6.67mg/kg米满对AcNPV有显著增效作用,其增效作用表现为增加杀虫毒力和提高杀虫速度,可使病毒对3龄和4龄幼虫的毒力分别提高0.31倍和2.62倍,杀虫速度分别提高10.9%和6.9%,使总杀虫速度提高25%和20.4%。

病毒杀虫剂——苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒，是核型多角体病毒的一个代表种，属微生物源、核型多角体病毒、广谱、低毒杀虫剂。主要剂型：10亿PIB／毫升悬浮剂。本品克服了一般生物杀虫剂对害虫杀伤力缓慢的缺点，具备一般昆虫病毒杀虫持效期长、不污染环境、不影响作物品质，对人畜安全，长期使用害虫不易产生抗性等优点，杀虫谱广，

蛇床子素对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的增效作用

为寻找病毒增效新途径,克服天然昆虫病毒存在杀虫活性低和速度慢的缺陷,研究植物源提取物蛇床子素对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的增效作用。结果表明,以甜菜夜蛾为靶标害虫时,蛇床子素在作用于甜菜夜蛾幼虫时对AcNPV有显著增效作用,但对病毒杀虫速度无明显提高作用。蛇床子素在作用于甜菜夜蛾成虫时有效降低其繁殖力,取食含AcNPV和蛇床子素糖水的甜菜夜蛾产有效卵数量显著低于单取食含AcNPV糖水甜菜夜蛾的有效卵量。

苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒AcMNPVP78/83蛋白初步研究

AcMNPVORF9编码病毒核衣壳蛋白P78/83,该蛋白在宿主细胞内以磷酸化和去磷酸化两种形式存在,能够与细胞骨架成分肌动蛋白相互作用,序列分析表明其具有与WASP蛋白类似的结构,推测可能在病毒粒子的包装、运输等过程中起重要作用。本文利用Bac-to-Bac系统构建了P78/83与绿色荧光蛋白融合表达的重组AcMNPV,激光共聚焦显微镜观察表明,重组病毒感染Sf21细胞12h后绿色荧光主要集中分布于细胞质中,24h及以后绿色荧光主要集中分布于细胞核中。感染试验表明,超表达P78/83对病毒的生长无明显的影响。

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究

利用空斑技术，从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中，纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３。用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析，并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果，发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变，导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ变为ＧＡＴ，该位氨基酸由甘氨酸（Ｇｌｙ）变为天冬氨酸（Ａｓｐｑ）还利用ＰＣＲ技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段，并将它克隆入转移载体质粒ｐＥＶ５５，与不形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＨＢｓＤ４ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞，结果产生同样的大立方形多角体病毒。

苜蓿尺蠖核型多角体病毒对甜菜夜蛾的致病力和传播性研究

研究了苜蓿尺蠖核型多角体病毒AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾的致病力和传播流行性。结果表明:AcMNPV-AaIT对甜菜夜蛾有较高的毒力,温度对毒力有很大的影响,在17℃与23℃的条件下,LC50分别为104.56,105.92PIB/mL;感病幼虫的尸体容易腐烂流脓,且脓汁内含有大量病毒。低温贮藏对该病毒的毒力没有明显影响,说明AcMNPV-AaIT有较好的传播流行性,是一种理想的生防病毒。

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒囊膜内核衣壳排列图式的电镜观察

The arrangement patterns of nucleocapsids within the envelope of \%Autographa californica\% nuclear polyhedrosis virus were studied by electron microscopy. Numbers of nucleocapsids observed in an envelope in their cross sections ranged from 1 to 17, and the frequencies at 2,3,4,5,6 and 7 nucleocapsids were significantly higher than the others, suggesting that these numbers of nucleocapsids were more commonly involved in an envelope. The regular arrangement patterns of nucleocapsids within envelope were observed in cross sections. Envelope outlines can be classified into a triangle (3 nucleocapsids in an envelope),lozenge and square (4 nucleocapsids in an envelope), trapeziun (5 nucleocapsids in an envelope), pentagons (5 or 8 nucleocapsids in an envelope) and hexagons (7 or 10 nucleocapsids in an envelope). The irregular arrangement patterns of nucleocapsids within envelopes were also observed in cross sections.

敲除Ac148-150对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒复制和外源蛋白表达的影响

【目的】同时敲除苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组的Ac148、Ac149、Ac150(Ac148-150)基因,检测敲除Ac148-150基因片段对AcMNPV复制和外源蛋白表达能力的影响,为基因功能鉴定和缩小杆状病毒基因组提供参考。【方法】利用Red/ET同源重组系统和rpsL-AMP反向筛选系统对Ac148-150基因进行敲除,得到敲除型杆状病毒质粒(KOAc148-150杆状病毒质粒),提取AcMNPV KOAc148-150杆状病毒质粒和野生型杆状病毒质粒,将其分别与报告基因表达载体共转染Sf9细胞,成功构建重组杆状病毒(野生型病毒vAcMNPV/GFP和缺失突变病毒vAc△148-150/GFP),测定2种重组杆状病毒的一步生长曲线并比较其差异。将2种重组杆状病毒感染Sf9细胞后,采用荧光显微镜观察GFP荧光细胞分布,用流式细胞仪检测GFP荧光强度,再通过SDS-PAGE和Western blot检测Ac148-150缺失突变体表达的GFP产量。【结果】菌落PCR结果表明,AcMNPV中Ac148-150基因敲除成功。缺失突变病毒vAc△148-150/GFP与野生型病毒vAcMNPV/GFP的一步生长曲线基本一致,说明Ac148-150缺失不影响病毒的复制。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析结果表明,敲除Ac148-150对外源蛋白GFP分布和荧光强度未产生影响。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,缺失突变病毒vAc△148-150/GFP和野生型病毒vAcMNPV/GFP表达GFP蛋白产量基本一致。【结论】从AcMNPV基因组中同时敲除Ac148、Ac149、Ac150基因后,对病毒的复制和外源蛋白的表达能力无影响。

苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒vp39基因的克隆及其对S_f9细胞形态的影响

最近的研究发现：ＡｃＮＰＶ的ｖｐ３９基因与侵染密切相关［１］．在侵染过程中，ＶＰ３９蛋白与宿主的肌动蛋白结合，使其重排形成缆索（ｃａｂｌｅ）．导致细胞骨架发生变化有利于病毒编码的蛋白酶的水解．最后，子代病毒颗粒大量形成，宿主昆虫体全部液化成为脓水．可...