密旋链霉菌Act12发酵液对石油胁迫下紫花苜蓿幼苗生长及生理特性的影响

[目的]考察密旋链霉菌Act12发酵液对石油胁迫下紫花苜蓿幼苗生长及生理特性的影响,探讨其缓解石油胁迫的作用机制。[方法]以‘中苜3号’紫花苜蓿为供试植物,采用盆栽试验,考察质量分数3%(W/W)石油胁迫和不同浓度(0、1%、10%和100%)Act12发酵液处理下紫花苜蓿幼苗生长、根系构型、光合特性、渗透调节物质含量和抗氧化能力等指标的变化。[结果]相较于对照组(CK),3%石油胁迫显著抑制了幼苗的光合作用和生物量,同时增加了丙二醛(MDA)的积累,降低了可溶性糖和可溶性蛋白含量,改变了超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性。中低浓度(1%和10%)的发酵液处理可以有效缓解石油胁迫对紫花苜蓿幼苗的毒害,并以10%的Act12发酵液效果最佳;与不施用Act12发酵液处理相比,10%Act12发酵液处理幼苗的株高、地上部干质量、地下部干质量、茎耐受指数、根耐受指数、总根长、根表面积、根体积和根尖数均显著增加,地上部分和地下部分MDA含量分别降低了42.49%和56.45%,可溶性糖含量分别增加了79.25%和89.83%,可溶性蛋白含量分别增加了167.63%和256.15%,根系SOD和POD活性分别提升了35.81%和57.33%。[结论]中低浓度密旋链霉菌Act12发酵液能有效增强石油胁迫下紫花苜蓿幼苗的抗氧化酶活性和渗透调节能力,降低MDA含量,提高光合作用能力,增加生物量,有效缓解石油胁迫对幼苗生长的抑制。

来源于链霉菌Streptomyces fradiae var.k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的基因克隆与鉴定

通过设计简并引物和TAIL-PCR的方法从Streptomyces fradiaevar.k11中克隆得到一个β-l,4-甘露聚糖酶编码基因manS221,其全长1 359 bp,编码452个氨基酸,前端28个氨基酸为预测信号肽。构建表达载体pET-28a-manS221并转化大肠杆菌BL2l(DE3),特异性表达manS221基因,重组的甘露聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析纯化。酶学性质分析表明,重组甘露聚糖酶最适温度为52℃,最适pH值为6.0,在pH5.0～9.0的范围内有良好的稳定性,并且对中性蛋白酶具有高抗性。这些优良的性质使得ManS221在食品、饲料和纺织工业生产中具有良好的应用前景。

链霉菌Streptomyces tz92发酵液的抗真菌谱及稳定性

研究了链霉菌Streptomyces tz92发酵液的抗真菌谱及稳定性。结果表明,菌株Streptomyces tz92发酵液对水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌等31种植物病原真菌的抑菌圈直径在20mm以上,其中对水稻纹枯病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达52.45mm;发酵液中的抗菌物质对温度变化、光照、紫外光以及在碱性条件下都比较稳定,但在强酸环境中不稳定;菌株Streptomyces tz92连续传接10代,抑菌活性仍然稳定。

梵净山土壤链霉菌Streptomyces sp.FJS 31-2生产的Ⅲ型聚酮类化合物

研究特殊生境梵净山土壤来源链霉菌Streptomyces sp.FJS31-2次级代谢产物,为微生物药物开发提供结构复杂新颖物质来源,也为其衍生物的合成提供先导物。通过薄层层析、反复正(反)相硅胶柱层析等技术对Streptomyces sp.FJS31-2次级代谢产物纯化分离;利用质谱、核磁共振波谱技术进行结构鉴定。从Streptomyces sp.FJS31-2发酵产物分离得到3个化合物,结合质谱、核磁共振波谱技术进行结构解析,鉴定为2-(2'S-羟基丙基)-7-羟基色原酮(1)、Aloesone(2)和3,4-dihydro-3-(2-oxo-propyl)-3,6,8-trihydroxy-1(2H)-naphthalenone(3),都为III型聚酮类化合物。化合物1~3是首次从放线菌家族中分离鉴定得到天然产物。

链霉菌Streptomyces candidus粗提物促进白血病细胞株K562凋亡的研究

观察链霉菌Streptomyces candidus发酵产物对白血病细胞株K562的抑制作用。采用MTT法和流式细胞术(Annexin V-FITC双染法)分别检测链霉菌粗提物(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL及4.0 mg/mL)处理K562细胞从24 h,48 h及72 h 3个时间段所发生的凋亡。结果发现,链霉菌粗提物可促进K562细胞凋亡。随着链霉菌粗提物可作用浓度的升高,K562细胞的凋亡率逐渐升高;随着链霉菌粗提物可作用时间的延长,K562细胞的存活率也逐渐降低。表明链霉菌粗提物可显著促进白血病细胞株K562细胞凋亡。

卡那霉素链霉菌(Streptomyces kanamyceticus)抗噬菌体菌株的筛选

安徽朝阳化工厂在卡那霉素发酵生产中曾多次出现噬菌体感染。1977年春,我们从卡那霉素链霉菌的异常发酵液中分离出了噬菌体。电子显微镜研究说明,这是一种蝌蚪状的噬菌体。应用亚硝基胍或紫外光诱变并结合噬菌体处理,筛选得若干对噬菌体具有抗性的菌株,其中某些抗性菌株的卡那霉素产量在摇瓶发酵中大约比对照高百分之十六。

梵净山土壤来源链霉菌Streptomyces sp.FJS11-2次级代谢产物分析及抗菌活性研究

为了分析链霉菌Streptomyces sp. FJS11-2菌株次级代谢产物及次级代谢产物抗菌活性筛选,采用UPLC-DAD-HRMS方法对其次级代谢产物进行组分分析.用纸片扩散法对菌株次级代谢产物进行抗菌活性测试,测试菌株为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、粪肠球菌及布氏杆菌. UPLC-DAD-HRMS分析结果表明,该菌株含有多种未知代谢产物.且抗菌活性研究结果表明,该菌株代谢产物具有抗金黄色葡萄球菌、布氏杆菌活性. UPLC-DAD-HRMS分析结果及抗菌活性结果,为后续从该菌株次级代谢产物中发现活性良好、结构新颖的化学成分奠定基础,同时该方法也避免化学成分重复发现.

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205产环己酰亚胺含量测定方法的建立

建立白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205代谢产环己酰亚胺含量的检测方法,为菌株CT205的开发利用提供技术支持。采用高效液相色谱法(HPLC)、生物活性法和分光光度法等三种检测手段分别测定菌株CT205发酵上清液及粗提物中活性物质环己酰亚胺(Cycloheximide)的含量。三种方法测定环己酰亚胺标准品均具有较好的线性关系,其中相关系数R_(HPLC)^(2)法(0.9992)>R_(生物活性法)^(2)(0.9937)≈R_(分光光度法)^(2)(0.9965)。HPLC法及生物活性法分别测定CT205发酵液及粗提物中活性物质含量分别为72.87、1555.70及66.15、1259.00μg/mL,HPLC法与生物活性法测定的发酵上清液中活性物质含量误差在+6.72μg/mL。HPLC检测方法的准确性及灵敏度均高于生物活性法,适用于样品含量的准确测定,生物活性法适用于菌株诱变筛选及条件优化实验产生的大批量样品的测定及比较,分光光度法不适用检测杂质含量较多的样品。

娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)的抑制作用

为寻找安全高效的抑制蓝藻方法,以娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)为出发菌株,验证了其在不同浓度(1×105个/mL、1×106个/mL、1×107个/mL)、不同温度(25℃、35℃)、不同pH值(7、7.5、8)下对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)的抑制作用。结果表明,娄彻氏链霉菌在35℃、pH值为7.5~8时的抑藻作用较强,其合适的抑藻浓度为1×106~107个/mL。

波赛链霉菌合成蒽环类抗肿瘤抗生素研究进展

蒽环类抗生素(anthracyclines antibiotic)在治疗急性非淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、肉瘤、乳腺癌等方面有着很好的疗效,成为临床首选药物。波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)是合成柔红霉素、多柔比星、表阿霉素、表柔红霉素、洋红霉素、13-脱氧洋红霉素等多种蒽环类抗肿瘤抗生素的最重要菌株。该菌产生的生物活性物质及其合成途径成为国内外的研究热点。本文综述了近年来波赛链霉菌合成蒽环类抗肿瘤抗生素的研究进展,并展望其发展前景。

新分离菌Streptomyces产小分子CMC液化酶的研究

新分离纤维素分解菌经鉴定为链霉菌属中的新种，暂定名为ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐＬＸ，革兰氏阳性，产气生孢子，好氧生长，最适生长温度和ＰＨ为３０℃和７．２。该菌能够完全降解纤维素且不产生还原糖，并分泌一种分子量为９．２ｋｕ的液化性质的内切纤维素液化酶，亦即ＣＭＣ液化酶，该酶在裂解滤纸为短纤维的过程中既没有还原糖生成，也没有失重现象发生，而且纤维素的聚合度也几乎没有明显变化，推测可能是一种能打开氢键的小分子解链酶。

胶州湾产蓝色素海洋链霉菌的初步研究

在胶州湾沿海采取泥样和水样，从中分离了300余株海洋链霉菌（marine Streptomyces），并对其生理生化性质作了初步研究，建立了胶州湾海洋链霉菌菌种库。在该菌种库中，约有3％的菌株可产生天然蓝色素。其中一株海洋链霉菌（marine Streptomyces sp．）M259能够高产天然蓝色素。M259对绿脓杆菌（Pseudomonas areuginosa）、隐球菌（Crytococcal meningitis）有较强的抑菌活性。对其生理生化性质进行了鉴定，结果表明它可以利用可溶性淀粉、甘油、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、D-半乳糖、果糖、阿拉伯糖、肌醇、木糖、D-甘露糖、核糖等碳源；能利用大部分氮源，尤其对酵母粉的利用很显著；最适生长pH为7．0～7．4；最适培养温度为28～30℃。结果提示它属于蓝色类群，并与天蓝色链霉菌（Streptomyces cyanogenus）和产蓝链霉菌（Streptomyces ceolicolor）亲缘关系最为密切。此外还优化了M259的发酵培养基和培养条件，使得蓝色素在摇瓶条件下，OD590达到7．74。通过对M259所产蓝色素性质的研究，发现此色素水溶性较强，耐热性较好，在酸性条件下呈红色，在碱性条件下呈蓝色。此外，毒性实验的结果表明所提纯的蓝色素没有毒性，为进一步开发和利用该色素提供了可能。

海洋来源白浅灰链霉菌中环二肽类化合物的分离与结构鉴定

为了寻找新的抗肿瘤活性化合物,采用硅胶、SephadexLH20柱色谱和高效液相色谱,从白浅灰链霉菌Streptomycesalbogriseolus(A2002)中分离得到3个环二肽;利用理化及波谱学方法鉴定其结构分别为环(丙氨酸缬氨酸)[cyclo(AlaVal),1],环(丙氨酸脯氨酸)[cyclo(ProAla),2]和环(脯氨酸酪氨酸)[cyclo(ProTyr),3]。

通过原生质体质粒转化提高Streptomyces actuosus诺西肽产量的研究

研究利用大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pSE34,构建vhb基因的重组质粒pSEVhb,采用原生质体质粒转化法,将携带vhb的重组质粒转入诺西肽产生菌Streptomyces actuosus中,获得重组菌S.actuosus/pSEVhb。通过CO结合试验,证明VHb在重组菌中成功表达。限氧试验表明,重组菌S.ac-tuosus/pSEVhb诺西肽的的产量明显高于出发菌株。传代试验重组菌稳定,适合工业化大生产。

Streptomyces albulus NK49合成ε-聚赖氨酸及其产物特征

从土壤中分离到一株ε-聚赖氨酸高产菌株．通过细胞、菌落形态特征研究、生理生化反应以及16SrDNA序列分析，对该菌株进行了分类鉴定．命名为小白色链霉菌NK49（StreptomycesalbulusNK49）．利用摇瓶培养72h后检测到ε-聚赖氨酸产量达0．74g／L．通过1HNMR、13CNMR和MALDI—TOF—MS对ε-聚赖氨酸的结构进行了表征．小白色链霉菌NK49所合成的ε-聚赖氨酸的聚合度为21～34，聚合度28～31的￡聚赖氨酸为主要组分．该聚合度与已报道的微生物产ε-聚赖氨酸的聚合度不同，具有独特性．

链霉菌JD211发酵条件优化

以戊二酰亚胺类抗生素菌株链霉菌(Streptomyces)JD211为研究对象,研究其发酵培养基和发酵条件,得出最佳培养基组成是甘油30 g/L、酵母膏10 g/L、硫酸铵5 g/L、Na Cl 5 g/L、Ca CO33.5 g/L。优化后的发酵条件为装液量50 m L/250 m L,初始p H 7.0,接种量7.5%,培养温度30℃,培养时间为144 h。培养基优化后菌丝体干重较优化前提高了166.61%,抑菌圈提高了30.77%。

白色链霉菌发酵生产ε-聚赖氨酸工艺的优化

采用白色链霉菌N31-69菌株发酵制备ε-聚赖氨酸,考察碳源、氮源等因素对ε-聚赖氨酸产量的影响,优化发酵培养基。结果表明,优化的培养基为葡萄糖、(NH4)2SO4和酵母浸出粉的浓度分别为30、7、7 g/L,ε-聚赖氨酸摇瓶发酵产量达1.519 g/L,比优化前的产量提高了28.0%。进一步对N31-69菌株在5 L发酵罐内的发酵工艺进行优化,发现发酵48 h后采用流加补糖方式控制还原糖浓度为10～15 g/L,从72 h开始控制pH为4.3,发酵168 h后ε-聚赖氨酸的产量可达15.60 g/L。

Streptomyces hygroscopicus谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及其性质研究

将新筛选的吸水链霉菌生产的谷氨酰胺转胺酶发酵液抽滤、盐析、离心和冷冻干燥,制得粗酶产品,酶的比活力为5 4 0U/ g ,收率为77 90 %。对粗酶的研究发现,在2 5～4 0℃、pH 6 0～8 0范围内,该酶都有较高的反应活性和稳定性。粗酶经离子交换层析后得到了较高的纯化,纯化倍数为13 1倍,收率6 3% ;再经凝胶过滤层析,酶纯化了1 14倍,收率6 5 % ;经SDS -PAGE电泳检测,得到了单一的区带,根据电泳标准分子量计算,该酶的相对分子质量约为38 32 4ku。

接合转移技术将外源DNA大片段引入变铅青链霉菌中的研究

为了发展一种将150 kb及以上的外源DNA片段引入变铅青链霉菌（Streptomyces lividans）中的有效方法,以大肠杆菌-变铅青链霉菌穿梭细菌人工染色体为载体,将携带完整格尔德霉素生物合成基因簇的3个150-180 kb的外源DNA片段期望以接合转移的方式从大肠杆菌宿主菌（Escherichia coli ET12567/p UZ8002）中横向转移入变铅青链霉菌（Streptomyces lividans）TK23菌株中。结果表明,接合转移技术能够有效地将携带完整格尔德霉素生物合成基因簇的3个外源DNA大片段引入到变铅青链霉菌基因组中并稳定传代。

链霉菌次生代谢中A因子级联调控研究进展

A因子、Bld因子在灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、天蓝色链霉菌(S.coelicolor)和其它链霉菌及非链霉菌放线菌中广泛存在,在链霉菌及相关放线菌的形态分化和次生代谢调控中有关键作用。A因子通过A因子-Arp-AdpA级联对多种链霉菌的次生代谢和形态分化有促进作用;Bld因子本质为tRNALeu-UUA,通过在翻译水平上调控含UUA密码子基因的表达来促进形态分化和次生代谢,A因子调控级联中的adpA也是Bld因子调控的靶基因之一。