氧化苦参碱脂质体对大鼠肝星状细胞作用的差异蛋白电泳分析

目的应用比较蛋白质组学的方法分析氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)脂质体作用于体外培养的肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)后,其蛋白表达的差异,以进一步阐明OMT脂质体对肝纤维化治疗作用的分子机制。方法建立四氯化碳(CCl4)致慢性肝损伤纤维化的大鼠研究模型,灌流法分离获得大鼠HSCs,将P2代细胞分为A(模型组)、B(OMT脂质体处理组)、C(脂质体对照组)3组进行实验,以正常大鼠来源的HSCs作为正常对照组,作用7天后,分别提取实验组和正常对照组细胞的总蛋白质,进行等电聚焦双向电泳,建立应用OMT脂质体作用前后HSCs双向电泳差异表达谱;选取两个差异最明显的蛋白点,经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)测定,确定差异蛋白结构和功能。结果 (1)总蛋白质点在OMT脂质体作用前后有所减少,分别为864和756个,匹配率为63%;(2)局部区域图像进行放大可得10种蛋白质在正常对照组和实验组之间具有表达差异;(3)经PMF分析和SWISS-PROT蛋白数据库检索可获得两个差异最显著蛋白点为分子量46.236kD的ATM和54.051kD的Miz1。结论 OMT脂质体作用于HSCs会造成其蛋白质表达的差异性,可能参与诱导其凋亡的信号途径。

乳糖化羧甲基壳聚糖包覆苦参碱脂质体在大鼠体内组织分布研究

目的研究乳糖化羧甲基壳聚糖包覆的苦参碱脂质体的制备方法并考察其在大鼠体内的组织分布。方法采用逆相蒸发-短时超声法制备苦参碱脂质体。合成乳糖化羧甲基壳聚糖并用其包覆苦参碱脂质体。采用反相高效液相色谱法测定大鼠组织中的苦参碱浓度。结果包覆后脂质体的平均粒径无明显变化,Zeta电位由负转正,包封率为51.0%,渗漏率略有降低,包覆前后的脂质体的体外释放均符合Higuchi方程。乳糖化羧甲基壳聚糖包覆的苦参碱脂质体的肝脏AUC值相对于苦参碱脂质体和苦参碱溶液具有显著性差异(P<0.05),包覆后的苦参碱脂质体相对摄取率为肺脏>肝脏>脾脏。乳糖化羧甲基壳聚糖包覆的苦参碱脂质体、苦参碱脂质体和苦参碱溶液肝脏靶向效率分别为28.85%,20.93%和13.31%。结论与苦参碱溶液和普通脂质体相比,乳糖化羧甲基壳聚糖包覆的苦参碱脂质体可以提高肝靶向性。

苦参碱脂质体的研究

对苦参碱脂质体的制备工艺进行了研究,并测定了包封率、渗漏率等脂质体的质量指标。以包封率为指标,优选了苦参碱脂质体的最佳制备工艺条件,结果表明:逆相蒸发法制备的脂质体包封率可达50.08%。抗肿瘤实验进行了3个剂量组对小鼠S180的抗瘤效应,结果显示,苦参碱脂质体中剂量组对小鼠S180抗瘤效应最好,对小鼠EAC亦有明显的抗肿瘤作用。

苦参碱脂质体的制备与包封率测定

目的制备苦参碱脂质体并测定其包封率。方法采用硫酸铵梯度法制备苦参碱脂质体，采用葡聚糖凝胶G-100分离苦参碱脂质体和游离苦参碱，并用高效液相色谱法测定脂质体的包封率。结果苦参碱脂质体包封率为33．4％，苦参碱在0．005—0．500mg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0．9998）。结论硫酸铵梯度法制备出包封率相对高的苦参碱脂质体，高效液相色谱法测定脂质体的包封率简单快速，方法准确，重现性好。

苦参碱脂质体毫微粒对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:观察苦参碱脂质体毫微粒对刀豆蛋白A(ConA)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法:72只NIH小鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,苦参碱脂质体毫微粒大剂量组(12.5mg/kg)、小剂量组(6.25mg/kg),苦参碱组(12.5mg/kg)和联苯双酯组(150mg/kg)。除正常组外,其他各组于实验首日静脉注射ConA 20mg/kg,苦参碱脂质体毫微粒大、小剂量组和苦参碱组均采用鼠尾静脉注射给药,联苯双酯组按150mg/kg灌胃,每天1次,连续3天,末次给药后4小时,再次静脉注射ConA 20mg/kg,8小时后检测血浆谷丙转氨酶(ALT)活性和肝组织超氧化物歧化酶(SOD)含量,观察肝组织病理学变化。结果:苦参碱脂质体毫微粒大、小剂量组血浆ALT活性明显低于模型组(P<0.01);苦参碱脂质体毫微粒大剂量组ALT活性明显低于苦参碱组(P<0.01),苦参碱毫微粒小剂量组ALT活性与苦参碱组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。苦参碱脂质体毫微粒大、小剂量组肝组织SOD含量明显高于模型组(P<0.01)。结论:苦参碱脂质体毫微粒对ConA所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,其作用效果优于等剂量的苦参碱,作用机理与抗自由基损伤密切相关。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸对氧化苦参碱脂质体减轻肝纤维化的增强作用研究

目的探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arginine-Glycin-Aspartic acid,RGD)三肽序列对氧化苦参碱脂质体(oxymatrine liposomes,OXYL)治疗四氯化碳诱导的肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)作用的影响。方法建立四氯化碳诱导的大鼠HF模型,制备RGD-OXYL和OXYL。动物分组为:正常对照组;肝纤维化模型组;OXYL治疗组;RGD-OXYL治疗组;RGD脂质体组。检测各组大鼠血清ALP,利用HE染色和Masson染色评价肝脏病理损伤及细胞外基质沉积情况。分离各组大鼠的肝脏组织,利用半定量PCR检测纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达。结果成功合成OX-YL及RGD-OXYL。与肝纤维化组比较,OXYL治疗组大鼠的ALP水平下降(344.47±27.52vs550.69±43.78,P<0.05)、肝损伤减轻、细胞外基质沉积面积显著减少(2.36%±0.09%vs7.70%±0.60%,P<0.05)、纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达下调;与OXYL治疗组大鼠相比,RGD-OX-YL治疗组大鼠ALP水平(272.51±19.55vs344.47±27.52,P<0.05)和肝损伤及细胞外基质沉积面积(0.26%±0.09%vs2.36%±0.09%,P<0.05)及纤维化相关基因(TIMP-1,MMP-2)表达等指标均有均有进一步改善。结论氧化苦参碱脂质体可减轻四氯化碳诱导的肝纤维化,抑制纤维化相关基因表达。RGD偶联的OXYL治疗效果优于OXYL。

苦参碱脂质体的稳定性及体外释放度研究

目的:考察苦参碱脂质体的稳定性及体外释放度。方法:用硫酸铵梯度法制备苦参碱脂质体,考察其粒径、形态和包封率;以渗漏率为指标考察苦参碱脂质体在4℃和室温放置9个月内的稳定性;同时采用桨碟法考察苦参碱脂质体的体外释放情况。结果:制备的苦参碱脂质体的平均粒径为220 nm,包封率为63.37%,4℃放置9个月的渗漏率为(10.7±0.1)%。脂质体的体外释放规律符合Higuchi方程。结论:苦参碱脂质体应在冷藏条件下贮存,其在体外具有良好的缓释作用。

苦参碱磁性脂质体的制备和表征的实验研究

目的:制备苦参碱药物磁性脂质体。方法:用正交实验确定适宜的工艺条件,采用逆相蒸发法制备苦参碱药物磁性脂质体;应用透射电镜、振动样品磁强计、高效液相色谱法等考察脂质体形态、磁性和包封率等。结果:制得苦参碱磁性脂质体外观形态、粒度分布良好,包封率高,磁场响应性和稳定性良好。结论:本工艺可靠易行,可制备性能优良的苦参碱。

苦参碱隐形脂质体的药代动力学和组织分布研究

目的:测定大鼠血浆及组织中苦参碱的浓度,研究大鼠静脉给药后苦参碱溶液(MS)、苦参碱脂质体(ML)和苦参碱隐形脂质体(LML)的药代动力学规律及组织分布特征。方法:采用反相高效液相色谱法测定大鼠血浆和组织中的苦参碱浓度。结果:MS、ML和LML的药代动力学行为符合二房室模型;LML的半衰期是MS的2.7倍,是ML的2倍;LML的药时曲线下面积(AUC)是MS的63倍,是ML的2.3倍;LML在血浆中的AUC值相对于ML和MS具有显著性差异(P<0.05);LML在肝脏、脾脏中的AUC值相对于ML具有显著性差异(P<0.05);LML的Blood/RES是ML的5.4倍。结论:LML明显改变苦参碱在大鼠血浆中的药代动力学特征和组织中的靶向定位特征。

苦参碱隐形脂质体的包封率测定和体外释放度研究

目的:研究苦参碱隐形脂质体的包封率测定方法,考察其体外释放度。方法:采用硫酸铵梯度法制备苦参碱隐形脂质体;用葡聚糖凝胶G-100柱分离脂质体和游离药物,并用反相高效液相色谱法测定脂质体的包封率;用《中国药典》中溶出度第二法测定其体外释放度。结果:制得脂质体的包封率为52.40%;苦参碱检测浓度的线性范围为0.005～0.200mg·mL-1(r=0.999 9);平均回收率为98.36%(RSD=0.95%);脂质体的体外释放规律符合Higuchi方程。结论:本方法简单、快速、准确、重现性好,可用于该脂质体的包封率和体外释放度的测定。