酸浆苦味素B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用

目的观察酸浆苦味素B(physalin B,PB)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制及促凋亡作用。方法四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测PB对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用,荧光显微镜观察吖啶橙(AO)染色细胞的变化,流式细胞术检测6,6'-四氯-1,1',3,3'-四甲基咪唑并羰花青碘化物(JC-1)染色细胞凋亡;采用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)含有量的变化;免疫印迹法(Western blot)检测PB对MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白表达。结果 PB可显著抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性;随着PB浓度的增加,AO染色细胞形态与对照组相比,呈现凋亡特征;PB作用于MDA-MB-231细胞后,与对照组比较,细胞线粒体膜电位明显下降;细胞内ROS水平上升,具有显著性差异(P<0.05);PB作用人MDA-MB-231细胞24 h后,能促进促细胞凋亡蛋白Bax的表达,提高激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)的表达,降低抗细胞凋亡蛋白Bcl-2、pro-Caspase-3(半胱氨酸蛋白酶-3前体)蛋白表达水平(P<0.05)。结论 PB能降低细胞线粒体的膜电位,提升细胞ROS水平,促进细胞凋亡,具有良好的抗肿瘤作用。

酸浆苦味素B在大鼠体内的药代动力学参数及组织分布研究

建立大鼠血浆和组织中酸浆苦味素B的含量测定方法,研究酸浆苦味素B在大鼠体内的药代动力学过程及组织分布。以4.968、9.935、19.87 mg/kg 3个剂量酸浆苦味素B灌胃大鼠,采集血浆和组织样品,然后采用UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆和组织中的酸浆苦味素B浓度,研究酸浆苦味素B药代动力学参数及组织分布情况。结果显示,在大鼠血浆和组织中,酸浆苦味素B在1.3 ng/mL~1300 ng/mL和1.3 ng/mL~6500 ng/mL范围内线性关系良好,日内、日间精密度均小于15%,提取回收率为94.17%~118.77%。酸浆苦味素B低、中、高3个剂量组在体内的主要药代动力学参数:达峰时间tmax均为0.667 h,达峰浓度Cmax分别为(169.0866.641)μg/L、(247.51323.434)μg/L和(619.56728.201)μg/L,半衰期t1/2z分别为(8.9752.966)h、(10.0223.196)h和(5.9122.271)h,药时曲线下面积AUC(0-t)分别为(748.73547.13)μg/L·h、(1189.897100.436)μg/L·h和(2963.312176.7)μg/L·h,说明酸浆苦味素B在体内吸收快,消除较慢,曲线下面积(AUC)与剂量之间呈线性关系。大鼠灌胃给药19.87 mg/kg后,20 min的组织分布顺序为胃>十二指肠>肺>卵巢>脂肪>肾>肝>小肠>直肠>大肠>脾>心>肌肉>脑;50 min的组织分布顺序为胃>十二指肠>小肠>肾>脂肪>卵巢>肝>脾>直肠>心>肺>大肠>肌肉>脑;180 min的组织分布顺序为十二指肠>胃>肝>小肠>脂肪>大肠>直肠>肺>心>卵巢>肌肉>肾>脾>脑。说明酸浆苦味素B在大鼠体内组织分布广泛,不同时间点药物浓度以胃中相对较高,推测其可能对胃有一定的靶向性。试验建立的UPLC-MS/MS检测方法操作简便、精密度高,适用于酸浆苦味素B在大鼠体内的药代动力学和组织分布研究,为酸浆苦味素B作用机制研究及药物开发提供一定的参考。

酸浆化学成分及抗胃溃疡活性研究

目的明确酸浆中哪些成分具有抗胃溃疡活性。方法本课题组对酸浆乙酸乙酯萃取部位进行系统化学成分分离。酸浆乙酸乙酯部位在大孔吸附树脂富集后经过反复硅胶柱色谱进行分离,再根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。采用乙醇诱导胃溃疡模型测定粗分片段和目标化合物抗胃溃疡活性。结果从酸浆活性部位分离获得30个化合物,化合物3、4、12、24和30为首次从酸浆中分离得到。9组粗分片段中,Fr G、Fr K和Fr OPQR三组表现出显著的抗胃溃疡活性(P<0.05,P<0.01),抑制率分别为55.3%、74.5%和93.8%,与之相比较,法莫替丁组的抑制率为89.3%;灌胃剂量为6.25、12.5和25 mg·kg^(-1)时,酸浆苦味素B的抑制率分别为27.8%、67.3%和74.6%;灌胃剂量为10、20和40 mg·kg^(-1)时,木犀草苷的抑制率分别为29.7%、45.6%和64.2%。结论酸浆苦味素B和木犀草苷可能是酸浆抗胃溃疡活性的主要成分。

应用Fura-Ⅱ/AM检测大鼠多形核中性粒细胞内游离钙浓度

应用ＦｕｒａⅡ技术，检测大鼠无菌性炎症时腹腔多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）及中药锦灯笼苦味素Ｂ对其影响。结果：在静息状态下，ＰＭＮ内［Ｃａ２＋］ｉ为（３１９４３±１８９０５）ｎｍｏｌ／Ｌ，酵母多糖激活可使［Ｃａ２＋］ｉ成倍增加，两者相比Ｐ＜００５。中药可抑制［Ｃａ２＋］ｉ增加。各组之间差异显著（Ｐ＜００５）。并探讨了ＦｕｒａⅡ检测ＰＭＮ内［Ｃａ２＋］ｉ的可行性及证明中药可抑制［Ｃａ２＋］ｉ。