苦味酸-天狼星红偏振光法检测增生性瘢痕组织胶原

目的探讨增生性瘢痕组织胶原检测的简易方法。方法应用苦味酸-天狼星红偏振光法和图像分析技术对增生性瘢痕组织中胶原的含量及分布特点进行观察。结果偏振光显微镜下可见增生性瘢痕组织中含有大量的嗜酸性胶原蛋白纤维束,Ⅰ型胶原纤维为黄或红色,呈致密的条束状,显示很强的双折光性;Ⅲ型胶原纤维为绿色的细纤维,散布于Ⅰ型胶原周围,呈疏网状,显示弱的双折光。经图像分析,其中Ⅰ型胶原占(73.95±3.22)%、Ⅲ型胶原占(22.13±3.57)%。结论苦味酸-天狼猩红染色和偏振光是一种观察增生性瘢痕组织胶原类型、分布、排列与含量的较理想方法。

骨延长区组织愈合过程中胶原变化的偏光显微镜观察

目的观察骨延长区骨组织修复过程中胶原变化特点及规律。方法健康新西兰白兔27只,制成左胫骨中段骨延长模型,于术后第5天以1.5mm/d延长,共延长14d。于延长结束时,延长结束后7、14、21、30、40、50、60和70d分批处死动物,取材(n=3)。石蜡包埋切片,饱和苦味酸天狼星红染色,偏光显微镜观察新骨组织的胶原变化。结果延长区胶原变化主要有以下特点:1在延长结束时及延长结束后的早期纤维组织中,除型胶原外,还含有大量型胶原;2在软骨组织中有、和型胶原;3假性生长板中存在、和型胶原;4骨延长区新骨再生与修复的后期型胶原占绝对优势。结论骨延长区的骨组织修复是在牵张应力下进行的,其胶原变化显示出与骨折愈合不同的特点;饱和苦味酸天狼星红染色后,在偏光显微镜下可清晰地区分、和型胶原,为研究骨组织修复过程中胶原变化的分型提供了新的方法。

偏光图像法分析高血压大鼠的心肌胶原重构

目的 通过改进苦味酸-天狼猩红染色心肌胶原偏光图像的分析方法,对高血压大鼠心肌胶原重构程度和药物对重构的改善效果进行评估。方法 建立高血压模型大鼠,取心肌进行特异性的苦味酸-天狼猩红胶原染色,在正交偏光下采用不同角度观察I、III型胶原的染色情况,分析偏光显微镜观察方式对胶原成像影响的物理机制并提出图像采集方式上的改进。采集图像后,用迭代阈值法获取阈值对胶原图像进行自动分割,对分割出的不同胶原成分计算形态学指标。同时考察正常组与治疗组的相应指标。结果 胶原面积和容积分数等指标表明高血压大鼠心肌胶原含量明显高于正常组,I、III型胶原成分也明显和正常组不同。治疗组较高血压组与正常组接近。结论 通过对心肌胶原进行苦味酸-天狼猩红染色,利用偏光显微镜,结合图像分析技术,选择合适的指标,能够对高血压引发的心肌胶原重构进行较为有效的量化评估。

偏光镜在观察胶原纤维类型中的应用

介绍偏光镜在观察两种胶原纤维类型中的应用，为探讨组织中两型胶原纤维的分布和改变提供方便。

不同月龄Wistar大鼠肝组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原分布的计量形态学研究

目的 研究不同月龄Wistar大鼠肝Ⅰ、Ⅲ型胶原的形态计量的差异。方法 以苦味酸天狼星红———偏光显微镜及Mias 2 0 0 0真彩色图像分析仪对各鼠龄组 ( 3、13、2 5、33月 )肝门管区及窦周隙Ⅰ、Ⅲ型胶原之灰度、面积比及体密度进行了形态计量学测定。结果 窦周隙Ⅰ型胶原之面积比、体密度在 33月龄组分别大于 3、13、2 5月龄组 (P <0 0 5 ) ,其平均灰度 2 5月龄组明显深于 3月龄组 (P <0 0 1) ,窦周隙Ⅲ型胶原之平均灰度 2 5月龄组分别深于 3月龄组 (P <0 0 1)及 13月龄组 (P <0 0 5 )。结论 33月龄组窦周隙Ⅰ型胶原数量分别多于 3、13、2 5月龄组 ,2 5月龄组窦周隙Ⅰ型胶原平均含量明显高于 3月龄组 ,2 5月龄组窦周隙Ⅲ型胶原平均含量分别高于 3、13月龄组。

骨折愈合过程中胶原纤维类型分布的动态变化

目的 :寻找一种简便、快捷、灵敏的观察骨折愈合过程中胶原类型、分布动态变化的方法。方法 :在健康中国绵羊左跖骨中段制造一个 1cm长的骨缺损。分别在术后 1、 3、 6个月取材 ,苦味酸天狼星红染色 ,偏振光显微镜观察。结果 :术后 1个月 ,骨折局部Ⅲ型胶原纤维占大多数 ;术后 3个月 ,骨折处Ⅰ型胶原纤维明显增加 ,但排列尚未有序 ;术后 6个月 ,Ⅰ型胶原纤维增粗、增多 ,呈斜行螺旋状交叉排列。结论 :苦味酸天狼星红偏振光不仅能区分Ⅰ、Ⅲ型胶原的类型还能清晰地显示Ⅰ、Ⅲ型胶原的形态、分布和比例关系 ,具有操作简单、省时、花费少 ,而且特异性强、灵敏度高。

6种活血中药及芎芍胶囊对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块胶原沉积及其代谢的影响

目的:探讨6种常用活血中药及芎芍胶囊对于ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样斑块胶原沉积及其代谢的影响. 方法:6-8周龄ApoE基因缺陷鼠100只,雌雄各半,体重18-20g.基础饲料喂养6-8周后,改为"西方膳食类"饲料(含脂肪21%(wt/wt)、胆固醇0.15%(wt/wt))继续喂养13周,随机分成9组:模型组、对照组(辛伐他汀)、丹参组、赤芍组、川芎组、三七组、酒大黄组、桃仁组、和芎芍胶囊组,灌胃给药13周.无菌条件下取出心脏和主动脉,10%甲醛固定,脱水,常规石蜡包埋切片.苦味酸-天狼星红染色,在偏振光下,观察Ⅰ、Ⅲ型胶原;免疫组化染色检测主动脉根部动脉粥样斑块及周围血管壁MMP-1、TIMP-1,利用IPP图像分析软件计算Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化.IPP图像分析软件计算表达阳性面积及阳性面积占总面积比.

人、猪、大鼠来源网状层真皮组织学及材料学表征的比较

背景:课题组以往研究证实,猪边腹部网状层真皮质地柔软,伸展性也较其他部位好,适合作为异种脱细胞真皮的制作材料,但将其与人网状层真皮和大鼠网状层真皮进行组织形态学和材料学表征的系统对比未见相关报道。目的:研究猪边腹部、大鼠背部与人网状层真皮在组织学、生物力学、分子结构和热稳定性等方面的差异。方法:取人、猪边腹部、Wistar大鼠背部网状层真皮标本并大体观察,石蜡切片后行苏木精-伊红染色、苦味酸-天狼星红染色,显微照相后用图像分析软件测量分析;样本真空干燥并复水后用电子拉伸机测量其力学性能并计算杨氏模量;真空干燥后的样品研碎后用傅里叶红外光谱仪及同步热分析仪分析测量。结果与结论:猪边腹部网状层真皮胶原纤维束直径与人网状层真皮无差异,大鼠背部胶原纤维束较人网状层真皮细(P<0.01);猪边腹部网状层真皮间隙率较人网状层真皮低(P<0.01),大鼠网状层真皮间隙率与人网状层真皮相似(P=0.17)。猪网状层真皮胶原纤维排列紧密杂乱,Ⅰ型胶原蛋白含量及Ⅰ型、Ⅲ胶原蛋白比值高于人网状层真皮(P<0.05),Ⅲ胶原蛋白含量低于人网状层真皮(P<0.05);大鼠网状层真皮Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白含量及其比值与人网状层真皮相近(P>0.05)。3种网状层真皮杨氏模量差异无显著性意义。大鼠网状层真皮胶原蛋白分子有较多的氢键参与,人较少,猪介于两者之间;大鼠网状层真皮热稳定性较好,人和猪次之。

CTGF表达在大鼠放射性肺纤维化中的作用

目的本研究结合体内外实验探讨CTGF在放射性肺纤维化(RPF)发生过程中的作用及与α-SMA之间的相互关系。方法应用MTT比色法检测60Coγ射线照射对人肺成纤维细胞(HLF)的促增殖作用,用Westernblot法观察CTGF和α-SMA在HLF中的表达,苦味酸天狼星红偏振光显微镜法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的增减变化,免疫组织化学图像分析观察CTGF和α-SMA在RPF过程中的表达变化。结果体外实验显示,5Gy60Coγ射线照射能促进HLF增殖,并转化成肌成纤维细胞(MFb);CTGF蛋白合成增加,12h达高峰;α-SMA蛋白合成增加,48h处于高峰状态。体内实验显示,照射后1～3个月大鼠肺组织有少量胶原产生,以Ⅲ型胶原为主;6个月肺组织大量胶原产生,以Ⅰ型胶原为主;CTGF于照后1周在增生的大鼠肺Fb中开始合成,随照后时间延长而逐渐增强,3个月时最明显。照后1周可见增生的MFb中有α-SMA表达,随照后时间延长逐渐增多,3个月时达高峰。结论照射能诱导CTGF表达增高,后者能促进肺Fb向MFb转化,增强合成和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原的能力,参与了放射性肺纤维化的发生发展。