苦味酸-天狼猩红偏振光法在肝纤维化研究中的应用

目的探讨苦味酸-天狼猩红偏振光法在肝纤维化研究中的应用。方法取肝穿组织石蜡切片分别进行苦味酸-天狼猩红染色和Masson三色染色,检测肝组织中的胶原纤维,比较二者的差异性。结果苦味酸-天狼猩红染色的切片其纤维化部位颜色鲜明,四型胶原呈不同色彩;苦味酸-天狼猩红染色和Masson三色染色对纤维化部位的定位一致,对纤维化面积的检测无显著差异性(P<0.05)。结论应用苦味酸-天狼猩红染色处理的切片能区分四种类型的胶原纤维,且可结合图像分析系统测定肝纤维化面积,评估肝纤维化组织的修复程度,为临床诊断及治疗提供帮助。

天狼猩红饱和苦味酸染色在大鼠胰腺纤维化评价中的应用

目的:应用苦味酸天狼猩红-偏振光法评价长期高脂饮食导致的胰腺纤维化。方法:建立18周高脂饮食大鼠模型,HE染色观察胰腺形态变化,苦味酸天狼猩红-偏振光法对胰腺纤维化特点进行评价。结果:长期高脂饮食可以导致大鼠胰腺纤维化改变,对苦味酸天狼猩红染色结果进行图像分析显示胶原纤维含量较对照组明显增加(P<0.01),偏光镜下观察示以Ⅰ、Ⅲ胶原为主要成分。结论:苦味酸天狼猩红-偏振光法是评价胰腺纤维化胶原沉积的有效方法。

天狼猩红偏振光法在病理性瘢痕纤维化研究中的应用

目的:探讨检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中胶原的方法。方法:应用天狼猩红偏振光法和图像分析技术对正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中胶原的类型、含量及分布特点进行研究。结果:正常皮肤组织中以Ⅲ型胶原为主;增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中均以Ⅰ型胶原纤维为主,其含量随病程发展而增加。结论:天狼猩红偏振光法是检测增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织纤维化程度的理想方法,可以明确纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化规律。

苦味酸-天狼猩红染色法检测PHEMA人工角膜植入碱烧伤兔角膜中胶原的动态变化

目的观察新型软性一体式PHEMA人工角膜对碱烧伤兔角膜孔隙内新生组织中胶原成分及分布的影响。方法制备兔角膜碱烧伤模型后,植入软性一体式PHEMA人工角膜材料。分别于术后2、8、16、22周取裙边组织进行苦味酸-天狼猩红染色,偏振光下进行观察。结果这种PHEMA材料中允许角膜及周围组织迁入并生长,多部位形成纤维连接。染色后偏振光下提示孔隙内新生组织主要为Ⅰ型胶原,其生长过程表现为黄绿色的Ⅲ型胶原慢慢变成成熟的、红色的Ⅰ型胶原,并且角膜缘处细胞活跃。结论 PHEMA材料孔隙的胶原和角膜组织的胶原变化与植入正常兔角膜的愈合结果一致。

苦味酸-天狼猩红染色和MASSON染色评价心脏纤维化的比较

目的比较苦味酸-天狼猩红染色法和MASSON染色法在评价小鼠心脏纤维化中的异同。方法 10周龄BALB/c雄性小鼠给予皮下注射异丙肾上腺素(5mg/kg/d)共14天,诱导小鼠心脏纤维化模型,取心脏标本制备石蜡切片,分别行苦味酸-天狼猩红染色和MASSON染色,观察胶原纤维的沉积。结果苦味酸-天狼猩红染色法和MASSON染色法都能清楚地显示出胶原纤维,且其定位是一致的。两种染色方法显示出的纤维化面积,在统计学上无显著性差异(P>0.05)。但苦味酸-天狼猩红染色法处理的切片能够在偏振光显微镜下清楚地区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维,而MASSON染色法却不能。结论苦味酸-天狼猩红染色法较MASSON染色法相比能够更好地评价心脏纤维化。

胶原纤维特殊染色法在心肌纤维化诊断中的应用比较

目的观察对比Masson三色染色、VG染色和苦味酸-天狼猩红染色法在评价心肌纤维化中的阳性表达及分布特征。方法取10例心脏移植受者纤维化心肌标本分别进行Masson三色染色、VG染色和苦味酸-天狼猩红染色,镜下观察对比胶原纤维的沉积特点。结果 Masson三色染色、VG染色和苦味酸-天狼猩红染色均能清楚地标记出胶原纤维的分布及排列特点;3种染色方法显示出的心肌纤维化面积及胶原纤维总量,在统计学上无显著性差异(P>0.05);但苦味酸-天狼猩红染色法能够在偏振光显微镜下明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维,Masson及VG染色法则不能区分。结论苦味酸-天狼猩红染色较Masson三色染色和VG染色法,能够更好的评价心肌纤维化程度及其类型。

偏光图像法分析高血压大鼠的心肌胶原重构

目的 通过改进苦味酸-天狼猩红染色心肌胶原偏光图像的分析方法,对高血压大鼠心肌胶原重构程度和药物对重构的改善效果进行评估。方法 建立高血压模型大鼠,取心肌进行特异性的苦味酸-天狼猩红胶原染色,在正交偏光下采用不同角度观察I、III型胶原的染色情况,分析偏光显微镜观察方式对胶原成像影响的物理机制并提出图像采集方式上的改进。采集图像后,用迭代阈值法获取阈值对胶原图像进行自动分割,对分割出的不同胶原成分计算形态学指标。同时考察正常组与治疗组的相应指标。结果 胶原面积和容积分数等指标表明高血压大鼠心肌胶原含量明显高于正常组,I、III型胶原成分也明显和正常组不同。治疗组较高血压组与正常组接近。结论 通过对心肌胶原进行苦味酸-天狼猩红染色,利用偏光显微镜,结合图像分析技术,选择合适的指标,能够对高血压引发的心肌胶原重构进行较为有效的量化评估。

腺苷A2A受体基因敲除小鼠瘢痕胶原亚型的变化

背景:作者前期研究发现腺苷受体激动剂可以刺激胶原合成,腺苷受体拮抗剂可以抑制胶原合成,并且可以减轻皮肤胶原纤维增生。腺苷A2A受体基因敲除小鼠瘢痕转化生长因子β表达降低。目的:利用苦味酸-天狼星红偏振光法观察腺苷A2A受体基因敲除小鼠瘢痕胶原亚型的变化并探讨其机制。方法:腺苷A2A受体基因敲除小鼠和野生型小鼠制作瘢痕模型,采用苦味酸-天狼星红偏振光法对瘢痕组织中胶原的性质及分布特点进行观察、确定瘢痕组织胶原类型、分布、排列与水平。结果与结论:偏振光显微镜下可见野生型组小鼠增生性瘢痕组织中含有大量的嗜酸性胶原蛋白纤维束,Ⅰ型胶原纤维为红色,呈致密的条束状,显示很强的双折光性,腺苷A2A受体基因敲除小鼠瘢痕缺乏粗大胶原束,呈稀疏的条束状,排列相对整齐、密度较为均匀,Ⅰ型胶原纤维水平减少(P<0.01),瘢痕增生显著减轻。提示腺苷A2A受体参与瘢痕增生,对预防瘢痕增生有积极意义。

偏光显微镜观察发育性髋关节脱位圆韧带组织的病理变化

背景:发育性髋关节脱位与关节囊、韧带等致密结缔组织细胞外基质中的胶原蛋白有密切关系。目的:观察发育性髋关节脱位与正常儿的髋关节圆韧带的形态学特点,分析Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及二者比例(Ⅰ/Ⅲ)变化规律。设计、时间及地点:分组对照观察,于2006-10/2007-03卫生部先天畸形实验室完成。对象:选择2005-06/2006-08在中国医科大学附属盛京医院儿童骨科住院并第1次手术发育性髋关节脱位患儿21例。根据术前X射线片按T?nnis标准分3组,髋臼发育不良组3例、髋关节半脱位组12例、髋关节脱位组6例。选择因其他疾病第1次行髋关节手术及尸检患儿13例为对照组。标本取自患者股骨头相连接部位圆韧带。方法:将各组标本行苦味酸-天狼猩红染色。主要观察指标:分别在普通显微镜和偏振光显微镜下并测量Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量及计算比例(Ⅰ/Ⅲ)。结果:Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量随年龄增加而增加;对照组Ⅰ型胶原明显高于各病例组(P<0.01),Ⅲ型胶原稍低于病例组(P<0.05)。胶原含量比例(Ⅰ/Ⅲ)随着年龄增加没有明显变化(P>0.05);各病例组胶原含量比例明显低于对照组(P<0.05)。结论:发育性髋关节脱位患儿和对照组间圆韧带Ⅰ和Ⅲ型胶原含量及比例(Ⅰ/Ⅲ)有较大差别,发育性髋关节脱位发生可能与关节囊中胶原紊乱有关。

膝骨关节炎前交叉韧带Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维定量分析及组织学相关研究

目的探讨老年膝骨关节炎(OA)前交叉韧带(ACL)退变时Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布、含量与组织学改变特点。方法选择膝关节OA患者全膝关节置换术中切取的ACL27例(29膝)和正常膝关节新鲜ACL标本5例,采用苦味酸-天狼猩红染色观察并分析ACL中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布、含量和比例改变。HE染色观察ACL的组织学变化。结果苦味酸-天狼猩红染色发现,正常ACL胶原排列整齐,偏振光下呈横纹肌样排列,主要由Ⅰ、Ⅲ型胶原构成,Ⅰ型胶原粗大,含量较多,在韧带内呈弥漫性分布;Ⅲ型较少,多分布在各束韧带的内部。OA患者的ACL胶原排列紊乱,Ⅲ型胶原含量增多,Ⅰ型胶原明显减少。HE染色组织学观察到OA患者ACL松散,有不同程度的纤维结缔组织变性,表现为不均匀的纤维细胞数目增多或减少,可见黏液变性、软骨样化生、囊性变及玻璃样变性,并有淋巴细胞浸润。结论苦味酸-天狼猩红染色可以应用于观察并计算ACL中Ⅰ、Ⅲ型胶原的分布与含量的变化。膝关节OA伴有ACL退变时Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分布与含量有改变,ACL退变与OA具有相关性。

人眼直肌Pulley系统胶原成分的实验研究

目的研究人眼直肌Pulley系统胶原的组成成分及分布特点。方法选取5个新鲜尸体眼眶,整体固定包埋,进行全眼眶连续冠状切片(4μm)。相邻层面经苦味酸-天狼星红染色后,在偏振光显微镜下观察4条直肌Pulley及Pulley连接带(Pulleyband,PB)的胶原组成及分布特点,并用MIAS-2000显微图像分析系统定量分析。结果偏振光显微镜下可见4条直肌Pulley及PB中含有大量黄红色的Ⅰ型胶原纤维及少量绿色的Ⅲ型胶原纤维。经图像分析,内直肌组Pulley中Ⅰ型胶原含量最高,内直肌-下直肌组PBⅢ型胶原含量最高,明显高于其他组,各组间差别有显著性(P<0.05)。结论与力学特性密切相关的Ⅰ型胶原纤维及Ⅲ型胶原纤维作为眼直肌Pulley及PB胶原的主要组织成分,对眼球在功能眼位维持双眼视功能意义重大。

染矽尘大鼠早期肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达

目的探讨染矽尘大鼠早期肺组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原形成的时间规律。方法采用气管暴露法建立矽肺动物模型。取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红法染色,偏振光显微镜观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,用图像分析系统对Ⅰ、Ⅲ型胶原进行定量分析。结果染矽尘后第3天,Ⅲ型胶原开始增生,染矽尘后第7天,Ⅰ型胶原开始增生,直至染矽尘后第28天。这2种胶原进行性增加。Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性面积百分比在染矽尘后均有不同程度的增加。染矽尘后第7天、第14天、第21天、第28天,Ⅰ型胶原阳性面积百分比分别增加27.12(P<0.01),24.73(P<0.01),16.01(P<0.05),52.45(P<0.01)。染矽尘后第3天、第28天,Ⅲ型胶原阳性面积百分比分别增加2.20(P<0.01)、24.13(P<0.01)。结论染矽尘大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原明显增加。Ⅰ、Ⅲ型胶原增生出现的时相有所不同,染矽尘后第3天,Ⅲ型胶原开始出现,染矽尘后第7天,Ⅰ型胶原开始形成,此后,Ⅰ、Ⅲ型胶原呈进行性增多的趋势。天狼猩红-偏振光显微镜法是一种定量检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的更加准确的方法。

激动素对肝纤维化大鼠肝脏胶原变化的作用研究

目的:观察激动素(kinetin)对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的作用。方法:将实验大鼠随机分为3组,模型组用CCl4诱导形成肝纤维化模型;激动素组造模同时给予0.1%激动素溶液5ml·kg-1·d-1;对照组仅给予生理盐水皮下注射,均治疗12周。应用苦味酸天狼猩红偏振光法和图像分析技术对3组中的胶原含量及分布特点进行观察。结果:激动素组Ⅰ型胶原与Ⅲ型胶原含量分别为(2.107±0.833)%和(1.114±0.413)%,分别较模型组(4.473±2.311)%和(1.964±0.854)%显著降低(P<0.01)。结论:激动素能使肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原含量显著降低。

利用偏光影像技术定量观察大鼠胸主动脉中纤维结构

目的:本实验选取大鼠胸主动脉为研究对象,探讨定量偏光影像技术对双折光性物质的成像特点与适用研究领域。方法:采用Abrio液晶偏光影像系统在未经染色条件下对青年和衰老大鼠胸主动脉纤维结构进行观察,然后对主动脉切片进行苦味酸天狼猩红染色,对比Abrio和传统偏振光技术成像的差别。结果:较传统偏振光显微镜不同,Abrio可以对纤维双折射的方位角和光程差进行定量分析。在未经染色的条件下,Abrio可对大鼠胸主动脉中具有双折光性的纤维结构清晰成像,而传统偏光显微镜在未经染色条件下不能给出有意义的信息。经苦味酸天狼猩红染色后,对比传统偏振光技术,Abrio使成像不受纤维排列方向和人为因素的影响,较为完整地反映主动脉中纤维的结构及分布情况。结论:Abrio液晶偏光影像技术能够实现对样本双折光的强弱及方向的定性和定量分析,在未经染色的条件下给出微观结构信息,适合于心血管疾病的检测与评估,可拓展应用面宽,将在未来生物医药领域中体现更大的价值。

我的博士学位论文(下)

为了研究心肌中胶原蛋白种类和结构变化,我去中国医学科学院基础所组胚教研室找到了著名专家许增禄。我在许老师那里第一次听说苦味酸天狼猩红染色和偏振光显微镜可观察组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原。许老师帮我制作了病理切片,并亲自带我用偏振光显微镜观察实验标本。

瘢痕疙瘩组织中胶原的形态学分析

目的 研究瘢痕疙瘩组织中胶原的类型、含量及分布。方法 应用苦味酸 天狼猩红染色偏振光法、免疫组织化学法 ,结合图像分析技术 ,观察分析瘢痕疙瘩组织中胶原的含量及分布特点 ,并比较上述两种方法的优缺点。结果 瘢痕疙瘩由大量的胶原纤维结合在一起 ,组成厚实的嗜酸性胶原蛋白纤维束。Ⅰ型胶原纤维为黄色或红色 ,紧密排列 ,呈致密的条束状 ,纵横交错 ,排列紊乱 ,显示很强的双折光性。Ⅲ型胶原纤维 ,呈疏网状 ,显示弱的双折光 ,为绿色的细纤维 ,散布于Ⅰ型胶原周围。瘢痕疙瘩组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原分别占 (6 4 .5± 2 .7) %和 (30 .7± 2 .6 ) %。苦味酸 天狼猩红染色和免疫组织化学法检测胶原具有良好的一致性 (P >0 .0 5 )。结论 瘢痕疙瘩组织中主要含有Ⅰ、Ⅲ型胶原 ,胶原的排列分布及含量与普通瘢痕有明显差别。苦味酸