苦味酸-天狼星红偏振光法检测增生性瘢痕组织胶原

目的探讨增生性瘢痕组织胶原检测的简易方法。方法应用苦味酸-天狼星红偏振光法和图像分析技术对增生性瘢痕组织中胶原的含量及分布特点进行观察。结果偏振光显微镜下可见增生性瘢痕组织中含有大量的嗜酸性胶原蛋白纤维束,Ⅰ型胶原纤维为黄或红色,呈致密的条束状,显示很强的双折光性;Ⅲ型胶原纤维为绿色的细纤维,散布于Ⅰ型胶原周围,呈疏网状,显示弱的双折光。经图像分析,其中Ⅰ型胶原占(73.95±3.22)%、Ⅲ型胶原占(22.13±3.57)%。结论苦味酸-天狼猩红染色和偏振光是一种观察增生性瘢痕组织胶原类型、分布、排列与含量的较理想方法。

天狼星红苦味酸染色法和MASSON染色法在显示大鼠肾脏胶原纤维的比较应用

目的比较天狼星红苦味酸染色法和MASSON三色染色法用于大鼠肾脏标本胶原纤维染色的效果。方法建立大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化模型,取梗阻侧肾脏标本,行天狼星红染色和MASSON三色染色,图像分析软件测定肾间质胶原面积。结果天狼星红染色和MASSON三色染色都能显示出胶原纤维,两种方法测定胶原面积无显著差异。天狼星红染色标本在偏光显微镜观察能分辨胶原类型。结论天狼星红苦味酸染色法比MASSON三色染色法操作步骤简单,是显示胶原的优良方法。

苏木素-碱性复红-苦味酸染色法对诊断早期心肌缺血的意义

本文应用苏木素-碱性复红-苦味酸染色法(HBFP)对家兔实验性心肌缺血的早期改变及急死案倒的尸检材料进行了研究,实验性心肌缺血材料均作电镜观察,以保证取材准确,HBFP染色法可以显示缺血15min的心肌病变,不受常规组织学处理及死后自溶的影响,可用于临床病理及法医病理的诊断.

显示胶原及其类型的苦味酸天狼星红─偏振光方法

显示胶原及其类型的苦味酸天狼星红─偏振光方法许增禄（中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所，北京１００００５）原理：胶原分子多呈有序的平行排列，它有正常的双折光。由于其富含硷性氨基酸，常可与酸性染料起强烈的反应。天狼星红（ＳｉｒｉｕｓＲｅｄ）是...

心肌纤维化特殊染色方法比较与优化

目的 对目前已有心肌纤维化染色方法进行优化,弥补目前心肌纤维常用染色方法在定量分析中存在的胶原纤维漏读及误读等问题,为心肌纤维化半定量及诊断提供参考。方法 利用实验室前期构建的心肌组织特异性cTnT~(R141W)基因突变致扩张型心肌病转基因小鼠模型,制备心脏组织石蜡切片,分别进行马松三色(Masson’s trichrome, Masson)染色法、天狼星红(picric sirius red, PSR)染色法、天狼星红-品红(van Gieson, VG)染色法、天狼星红-固绿(sirius red/fast green staining, SR/FG)染色法染色,利用Image J 2.1.0软件对胶原纤维面积进行定量比较,并从染液浓度、染色时间、酸性溶液预染3个方面对SR/FG染色法进行优化,对后续的胶原纤维定量分析进行应用验证。结果 4种特染方法均可实现胶原纤维的分布观察,其中,优化后的SR/FG染色法,即0.1%天狼星红-苦味酸酸性溶液预染5 min,随后于0.1%天狼星红-苦味酸与0.04%固绿的混合液中染色1 h,在软件识别中具有更低的漏读率和遗失率。结论 本文优化后的SR/FG染色法较其他传统胶原纤维特染方法,胶原纤维与心肌组织着色鲜亮、颜色对比明显、稳定性佳、方便快捷,更适用于后续胶原纤维占比定量分析应用。

苏木素碱性复红-苦味酸染色法的改进及在缺氧骨骼肌和平滑肌染色中的应用

目的 :显示止血带结扎后缺氧骨骼肌。方法 :改进显示缺氧心肌的碱性复红法 ,即延长苏木素染色时间并增加盐酸酒精分化的步骤。结果 :缺氧骨骼肌纤维呈艳红色 ,正常骨骼肌纤维呈黄色 ,细胞核呈蓝黑色 ;平滑肌着色不规律 ;实验各组均见艳红色肌纤维 ,且 2h组较 1h组明显 ,老式止血带组较卡式止血带组明显。结论 :改进后的方法各种着色清晰度增加 ,色彩对比明显 ,染色效果更佳。此法不仅应用于传统的心肌缺氧染色 ,而且还可应用于缺氧骨骼肌的染色 。

人、猪、大鼠来源网状层真皮组织学及材料学表征的比较

背景:课题组以往研究证实,猪边腹部网状层真皮质地柔软,伸展性也较其他部位好,适合作为异种脱细胞真皮的制作材料,但将其与人网状层真皮和大鼠网状层真皮进行组织形态学和材料学表征的系统对比未见相关报道。目的:研究猪边腹部、大鼠背部与人网状层真皮在组织学、生物力学、分子结构和热稳定性等方面的差异。方法:取人、猪边腹部、Wistar大鼠背部网状层真皮标本并大体观察,石蜡切片后行苏木精-伊红染色、苦味酸-天狼星红染色,显微照相后用图像分析软件测量分析;样本真空干燥并复水后用电子拉伸机测量其力学性能并计算杨氏模量;真空干燥后的样品研碎后用傅里叶红外光谱仪及同步热分析仪分析测量。结果与结论:猪边腹部网状层真皮胶原纤维束直径与人网状层真皮无差异,大鼠背部胶原纤维束较人网状层真皮细(P<0.01);猪边腹部网状层真皮间隙率较人网状层真皮低(P<0.01),大鼠网状层真皮间隙率与人网状层真皮相似(P=0.17)。猪网状层真皮胶原纤维排列紧密杂乱,Ⅰ型胶原蛋白含量及Ⅰ型、Ⅲ胶原蛋白比值高于人网状层真皮(P<0.05),Ⅲ胶原蛋白含量低于人网状层真皮(P<0.05);大鼠网状层真皮Ⅰ型和Ⅲ胶原蛋白含量及其比值与人网状层真皮相近(P>0.05)。3种网状层真皮杨氏模量差异无显著性意义。大鼠网状层真皮胶原蛋白分子有较多的氢键参与,人较少,猪介于两者之间;大鼠网状层真皮热稳定性较好,人和猪次之。

骨折愈合过程中胶原纤维类型分布的动态变化

目的 :寻找一种简便、快捷、灵敏的观察骨折愈合过程中胶原类型、分布动态变化的方法。方法 :在健康中国绵羊左跖骨中段制造一个 1cm长的骨缺损。分别在术后 1、 3、 6个月取材 ,苦味酸天狼星红染色 ,偏振光显微镜观察。结果 :术后 1个月 ,骨折局部Ⅲ型胶原纤维占大多数 ;术后 3个月 ,骨折处Ⅰ型胶原纤维明显增加 ,但排列尚未有序 ;术后 6个月 ,Ⅰ型胶原纤维增粗、增多 ,呈斜行螺旋状交叉排列。结论 :苦味酸天狼星红偏振光不仅能区分Ⅰ、Ⅲ型胶原的类型还能清晰地显示Ⅰ、Ⅲ型胶原的形态、分布和比例关系 ,具有操作简单、省时、花费少 ,而且特异性强、灵敏度高。

双氢青蒿素对实验性小鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨双氢青蒿素对胆总管结扎引起的小鼠肝纤维化的抑制作用及其作用机制。方法 50只C57BL-6小鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=20)和治疗组(n=20)。模型组:采用胆总管结扎的方法建立小鼠肝纤维化模型;治疗组:在胆总管结扎术后第3周开始以20μg/g的双氢青蒿素灌胃,1次/d,共12次。假手术组:只是分离出胆总管,置线不结扎并缝合腹腔后第3周开始以等剂量的DMSO 0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,共12次。3组的肝组织切片经HE和天狼猩红染色法观察其组织学病理变化;Western blot方法检测Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达水平。结果经HE和天狼星红染色法结果证实小鼠肝纤维化动物模型的成功建立。模型组小鼠肝内出现灶状坏死,汇管区纤维组织和胆总管明显增生,肝组织中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA含量增加,与假手术组相比其差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组经过双氢青蒿素治疗后,小鼠肝内纤维组织增生降低,肝组织中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA含量降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论双氢青蒿素具有抗肝组织纤维化作用,提示可作为一种新型抗肝组织纤维化药物。

Ⅲ型/Ⅰ型胶原比值在动脉粥样硬化斑块稳定性评价中的意义

目的探讨Ⅲ型/Ⅰ型胶原比值在动脉粥样硬化斑块稳定性评价中的意义。方法6-8周龄载脂蛋白E基因缺陷小鼠（Apolipoprotein E,ApoE小鼠）,随机分为模型组及药物干预1组（辛伐他汀）、2组（中药1号）、3组（中药2号）、4组（中药3号）,每组20只。全部高脂饲养13周。（由于本实验是探讨AS稳定性斑块和易损斑块的中药干预研究比较。因此就没有采用无斑块的正常小鼠对照组）。高脂饲养结束后测血脂、总胆固醇（Total Cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（Lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C）。每只小鼠主动脉选取以下4个切面进行石蜡切片：升主动脉根部横切面、主动脉瓣附着部、主动脉瓣起始部和主动脉瓣融合部切面。进行苦味酸-天狼星红染色（picro-sirius red）,用偏振光显微镜观察并定量分析斑块内胶原纤维的类型和分布。使用IPP 5.0图像分析软件测定斑块内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原含量分布变化,SPSS11.5软件包进行统计分析。结果ApoE模型组血清TC水平较高,各药物组血清TC等有不同程度的下降,与模型组相比均有显著差异; 偏振光显微镜下Ⅰ型胶原呈红、黄色,Ⅲ型胶原呈绿色,图像定量分析各药物干预组斑块内Ⅰ型/Ⅲ型胶原含量比值均明显高于模型组。结论天狼星红-苦味酸偏振光法结合图像定量分析法可用于测定Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值,并反映动脉粥样硬化斑块稳定状态。

不同月龄Wistar大鼠肝组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原分布的计量形态学研究

目的 研究不同月龄Wistar大鼠肝Ⅰ、Ⅲ型胶原的形态计量的差异。方法 以苦味酸天狼星红———偏光显微镜及Mias 2 0 0 0真彩色图像分析仪对各鼠龄组 ( 3、13、2 5、33月 )肝门管区及窦周隙Ⅰ、Ⅲ型胶原之灰度、面积比及体密度进行了形态计量学测定。结果 窦周隙Ⅰ型胶原之面积比、体密度在 33月龄组分别大于 3、13、2 5月龄组 (P <0 0 5 ) ,其平均灰度 2 5月龄组明显深于 3月龄组 (P <0 0 1) ,窦周隙Ⅲ型胶原之平均灰度 2 5月龄组分别深于 3月龄组 (P <0 0 1)及 13月龄组 (P <0 0 5 )。结论 33月龄组窦周隙Ⅰ型胶原数量分别多于 3、13、2 5月龄组 ,2 5月龄组窦周隙Ⅰ型胶原平均含量明显高于 3月龄组 ,2 5月龄组窦周隙Ⅲ型胶原平均含量分别高于 3、13月龄组。

6种活血中药及芎芍胶囊对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块胶原沉积及其代谢的影响

目的:探讨6种常用活血中药及芎芍胶囊对于ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样斑块胶原沉积及其代谢的影响. 方法:6-8周龄ApoE基因缺陷鼠100只,雌雄各半,体重18-20g.基础饲料喂养6-8周后,改为"西方膳食类"饲料(含脂肪21%(wt/wt)、胆固醇0.15%(wt/wt))继续喂养13周,随机分成9组:模型组、对照组(辛伐他汀)、丹参组、赤芍组、川芎组、三七组、酒大黄组、桃仁组、和芎芍胶囊组,灌胃给药13周.无菌条件下取出心脏和主动脉,10%甲醛固定,脱水,常规石蜡包埋切片.苦味酸-天狼星红染色,在偏振光下,观察Ⅰ、Ⅲ型胶原;免疫组化染色检测主动脉根部动脉粥样斑块及周围血管壁MMP-1、TIMP-1,利用IPP图像分析软件计算Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化.IPP图像分析软件计算表达阳性面积及阳性面积占总面积比.

Ⅰ型、Ⅲ型胶原在老年传输功能障碍性结肠便秘患者检测中的临床意义

目的Ⅰ型、Ⅲ型胶原在老年传输功能障碍性结肠便秘患者检测中的临床意义。方法选择2014年1月至2016年12月手术切除结肠的老年传输功能障碍性便秘30例为观察组。选择同期行结肠手术治疗,非便秘性老年患者30例为对照组。观察2组结肠组织HE染色,2组黏Ⅰ型、Ⅲ型胶原免疫组织化学和天狼星红染色观察表达情况进行比较。结果对照组未见明显的炎性反应,未发现黏膜下层和肌间神经丛病变的发生。观察组可见黏膜层明显的慢性炎性反应,见大量的嗜酸性粒细胞浸润,主要集中在固有膜中,黏膜下肌层明显增厚,胶原纤维化;肌层胶原纤维明显增生,肌间神经丛细胞空泡变性和减少。免疫组织化学结果显示观察组Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的IOD值明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 01)。苦味酸天狼星红染色结果显示观察组的Ⅰ型胶原纤维明显较对照组明显降低(P <0. 01),而Ⅲ型胶原表达面积百分比明显高于对照组(P <0. 01)。结论老年传输功能障碍性结肠便秘患者结肠壁I型、Ⅲ型胶原出现明显增多,其中以Ⅲ型胶原增加更为明显,对该疾病的诊断和治疗提供重要的参考。

3种特殊染色在急性心肌梗死死后诊断中的应用比较

目的对比观察苏木素-碱性复红-苦味酸染色(HBFP染色)、变色酸2R-亮绿染色和Heidenhain染色在急性心肌梗死死后诊断中的应用价值。方法以大鼠急性心肌梗死模型、法医检案急性心肌梗死心脏标本作为研究对象,采用HBFP染色、变色酸2R-亮绿染色和Heidenhain染色进行对比观察。结果①3种特染方法在大鼠心肌缺血15min时均可观察到阳性染色,且阳性染色面积随缺血时间的延长而扩大;②大鼠急性心肌缺血4h心脏标本在-20℃、4℃及室温条件下保存至14d,3种特染方法仍可见阳性着色,但变色酸2R-亮绿染色和HBFP染色随保存时间的延长而出现着色能力下降,阳性区域变小的趋势,Heidenhain染色效果最为稳定;③急性心肌梗死检案标本中,3种特染方法均可显示缺血心肌纤维,发病1h内死亡者Heidenhain染色优于另外两种染色。结论 3种特染均可客观的显示出急性心肌梗死早期病理改变,其中Heidenhain染色更具稳定性和可操作性。

CTGF表达在大鼠放射性肺纤维化中的作用

目的本研究结合体内外实验探讨CTGF在放射性肺纤维化(RPF)发生过程中的作用及与α-SMA之间的相互关系。方法应用MTT比色法检测60Coγ射线照射对人肺成纤维细胞(HLF)的促增殖作用,用Westernblot法观察CTGF和α-SMA在HLF中的表达,苦味酸天狼星红偏振光显微镜法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的增减变化,免疫组织化学图像分析观察CTGF和α-SMA在RPF过程中的表达变化。结果体外实验显示,5Gy60Coγ射线照射能促进HLF增殖,并转化成肌成纤维细胞(MFb);CTGF蛋白合成增加,12h达高峰;α-SMA蛋白合成增加,48h处于高峰状态。体内实验显示,照射后1～3个月大鼠肺组织有少量胶原产生,以Ⅲ型胶原为主;6个月肺组织大量胶原产生,以Ⅰ型胶原为主;CTGF于照后1周在增生的大鼠肺Fb中开始合成,随照后时间延长而逐渐增强,3个月时最明显。照后1周可见增生的MFb中有α-SMA表达,随照后时间延长逐渐增多,3个月时达高峰。结论照射能诱导CTGF表达增高,后者能促进肺Fb向MFb转化,增强合成和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原的能力,参与了放射性肺纤维化的发生发展。