苦木不同部位生物碱含量的比较研究

试验旨在比较苦木不同部位的苦木碱丁、苦木碱己和总生物碱含量差异。试验采用高效液相色谱法检测苦木14个不同部位中的苦木碱己、苦木碱丁含量,利用紫外分光光度法测定总生物碱含量。结果显示,苦木茎心材、主根心材中总生物碱和2种生物碱单体含量均较高,叶中总生物碱含量高,但2种生物碱单体含量均较低;茎皮部、茎边材、主根皮部和主根边材中苦木碱丁含量较高,而苦木碱己含量低,枝皮部、枝木材中苦木碱己含量较高,而苦木碱丁含量较低。研究表明,苦木不同部位的苦木碱丁、苦木碱己和总生物碱含量差异较大,结果可为苦木不同部位资源在禽畜健康养殖中的合理利用提供参考。

苦木生物碱提取及其复方注射液的安全性研究

【目的】筛选出苦木中生物碱的最佳提取方法及研究复方苦木注射液的安全性,为优化苦木生物碱有效成分的提取工艺及开发出能有效治疗畜禽大肠杆菌病的复方中药注射液奠定基础。【方法】采用高效液相色谱法对乙醇回流提取法、乙醇渗漉提取法和酶解—乙醇渗漉提取法提取的苦木生物碱进行含量测定并比较,同时对昆明小鼠进行口服和腹腔注射复方苦木注射液的急性毒性试验,测定半数致死量(LD5)0。【结果】酶解—乙醇渗漉提取法提取的苦木总生物碱、苦木碱己和苦木碱丁含量分别为3.10±0.22、0.30±0.06和0.05±0.01mg/mL,均极显著高于乙醇回流提取法和乙醇渗漉提取法(P<0.01)。昆明小鼠口服复方苦木注射液的给药剂量为10000mg/kg时,小鼠仍健康存活;腹腔注射给药的LD50=2336mg/kg,安全性评价为基本无毒物质。【结论】酶解—乙醇渗漉可作为复方苦木注射液中苦木生物碱的规模化提取方法,复方苦木注射液具有毒性小、无传染、无残留、无耐药性等优点,可在畜禽业中代替抗生素对大肠杆菌等细菌性传染病进行防治。

苦木碱F通过miR-331-3p调控宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨苦木碱F调控miR-331-3p在宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡中的作用及机制。方法:MTT法检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响;RT-qPCR检测苦木碱F处理HeLa细胞后miR-331-3p的表达;miR-331-3p mimic或miR-331-3p inhibitor转染HeLa细胞,经苦木碱F处理后检测HeLa细胞的增殖及凋亡情况;使用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-331-3p与蛋白酶体活化复合物3(PSME3)的靶向关系;Western blot检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白表达情况。结果:苦木碱F能显著抑制HeLa细胞增殖,促进凋亡,且具有浓度依赖性(P<0.01);苦木碱F显著上调HeLa细胞中miR-331-3p的表达(P<0.01);miR-331-3p mimic能显著抑制HeLa细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-331-3p inhibitor能显著降低苦木碱F对HeLa细胞增殖的抑制以及凋亡的促进作用(P<0.05);生物信息学预测PSME3是miR-331-3p的靶基因之一,双荧光素酶报告基因结果显示miR-331-3p与PSME33’UTR靶向结合;与苦木碱F+NC inhibitor+NC-siRNA组比较,苦木碱F+miR-331-3p inhibitor+NC-siRNA组中细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和Bcl-2蛋白水平升高,Bax蛋白水平降低,而敲低PSME3能逆转这一结果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦木碱F通过介导miR-331-3p/PSME3轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进凋亡,发挥抗肿瘤作用。

固相萃取-HPLC/MS/MS法测定血浆中苦木碱丁的浓度

目的:建立测定血浆中苦木碱丁浓度的高效液相色谱/质谱/质谱分析方法。方法:液相色谱:流动相为甲醇-0.01 mol·L^(-1)乙酸铵水溶液(80:20),流速0.2 mL·min^(-1);色谱柱为 SYMMETRY C_(18)(2.1 mm×50 mm,3.5 μm),柱温30℃。质谱:电喷雾电离源(ESI),采用多反应监测(MRM)方式进行检测,m/z 281.4→237.1。血浆样本经固相萃取小柱提取处理后进样分析。结果:苦木碱丁在5～100 ng·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好。萃取回收率98.3%～107%。日内误差(RSD)小于4.7%,日间误差(RSD)小于5.1%。结论:本方法具有特异性高、灵敏度好、测定快速等优点,适用于血浆中的苦木碱丁的含量测定。

苦木主要生物碱成分的分离及肠道微生物的转化研究

用乙醇室温浸泡提取苦木,浓缩乙醇后得到提取物,提取物经酸溶碱沉后,用乙酸乙酯萃取碱水液,浓缩乙酸乙酯得到总生物碱。总碱通过硅胶柱层析分离纯化,得到一化合物,经核磁鉴定为苦木酮。对苦木中苦木酮的含量进行了测定,并对苦木酮进行了人源肠内菌转化研究,结果显示苦木酮在人源肠道微生物及微生物分泌的酶作用下发生结构变化,转化成活性增强的苦木碱丁。

苦木碱F对宫颈癌细胞体外生长、凋亡的影响及其机制研究

探究苦木碱F对宫颈癌细胞体外生长、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:方法取对数生长期的Hela细胞,分别加入2.5、5、10μmol/L苦木碱F培养。采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力和细胞迁移能力。结果:对照组细胞体外生长状态较好,相比对照组,苦木碱F组细胞增殖抑制率、早期凋亡率、晚期凋亡率较高,侵袭实验和迁移实验的穿膜细胞数较低(P<0.05);与24h 相比,48h时细胞增殖抑制率较高;与24、48h相比,作用72h时细胞增殖抑制率较高(P <0.01);与5、2.5μmol/L苦木碱F相比,10μmol/L浓度下细胞增殖抑制率、细胞凋亡率较高,穿膜细胞数较低;与2.5μmol/L苦木碱F相比,5μmol/L浓度细胞增殖抑制率、细胞凋亡率较高,穿膜细胞数较低(P <0.01)。结论:苦木碱F可显著抑制Hela细胞的增殖、诱导细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移,对开发新型抗肿瘤药物具有重要意义。

酸性染料比色法测定苦木注射液总生物碱含量

本研究旨在建立一种适用于测定苦木注射液中总生物碱舍量的酸性染料比色法,以替代现行部颁标准的重量法.以苦木注射液中含量最高的铁屎米酮型生物碱苦木酮碱(4-甲氧基-5羟基铁屎米酮,C_(15)H_(10)N_2O_3)为对照,以溴甲酚绿为酸性染料,在pH值为5.0的缓冲液中与生物碱生成有色离子对,以氯仿萃取,在420 nm处测定吸光度,根据供试与对照的吸光度比值计算供试品的总生物碱含量.苦木酮碱在10.0~49.8μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程为A=0.011 7C+0.169 2(r=0.993 3),平均回收率99.1%,相对标准偏差(RSD)1.4%(n=9);该方法对10批苦木注射液总生物碱含量测定的结果与重量法无显著性差异(P=0.82).该方法具有灵敏度高、选择性好、易于重现的优点,适于替代现行重量法应用于苦木注射液的总生物碱含量测定.

HPLC法测定苦木中3种活性成分的含量

[目的]建立苦木药材中3种活性成分苦木碱乙（1-甲氧甲酰-β-咔巴啉），苦木碱己（4-甲氧基-5-羟基-铁屎米酮）和苦木碱丁（4，5-二甲氧基-铁屎米酮）的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法。[方法]采用HPLC，色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm，5μm），以乙腈-0.2%磷酸为流动相梯度洗脱，流速1 mL/min，检测波长为210 nm。[结果]苦木药材中苦木碱乙，苦木碱己和苦木碱丁线性范围分别为0.012~0.365μg（r=0.9999），0.031~0.936μg （r=0.9999），0.021~0.629μg（r=0.9999）；平均加样回收率（n=6）分别为99.30%，99.07%，100.17%。[结论]该方法简单快捷，稳定可靠，可作为苦木药材的质量控制方法。

高效液相-质谱法研究犬体内香贝注射液的药代动力学

目的以苦木碱丁为检定物,测定杂种犬血浆中苦木碱丁的含量,研究香贝注射液的药代动力学过程。方法两组杂种犬分别经股静脉注射香贝注射液0.8,1.6mL·kg-1,然后采集血样,用高效液相-质谱联用(HPLC-MS)方法测定各时间点血浆中的药物浓度,应用实用药代动力学软件3p97拟合计算药代动力学参数。结果犬股静脉给药后的血药浓度-时间曲线符合二室开放模型,0.8,1.6mL·kg-1两个剂量对应的主要药代动力学参数分别为:分布半衰期(t1/2α)为1.15min和1.24min,消除半衰期(t1/2β)分别为8.69min和9.85min,曲线下面积(AUC)为124.27ng·mL-1·min-1和234.78ng·mL-1·min-1;血浆清除率(CL)为450.64mL·min-1和477.04mL·min-1。结论香贝注射液静脉给药后,在犬体内具有分布快,消除迅速的特点。

苦木茎中1个新的β-咔巴啉型生物碱

目的研究苦木Picrasma quassioidies茎的生物碱类化学成分。方法采用CG161M、硅胶、ODS、Sephadex LH-20等多种柱色谱分离技术进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果从苦木茎的85%乙醇提取液中分离得到16个生物碱类化合物,其中包括12个β-咔巴啉型生物碱,分别鉴定为1-(1-羟基)-乙基-6-羟基-β-咔巴啉(1)、6-hydroxy-β-carboline-1-carboxylic(2)、β-carboline-1-carboxylic acid(3)、β-carboline-1-propanoic acid(4)、3-hydroxy-β-carboline(5)、1-acetyl-β-carboline(6)、1-乙氧甲酰基-β-咔巴啉(7)、1-(9H-β-carbolin-1-yl)-ethanol(8)、picrasidineX(9)、1-羟甲基-β-咔巴啉(10)、9H-pyrido[3,4-b]indole(11)、6-hydroxy-2-methyl-9H-β-carbolin-2-ium(12);4个铁屎米酮型生物碱,分别鉴定为4,5-dimethoxycanthin-6-one(13)、3-methylcanthin-5,6-dione(14)、5-hydroxy-4-methoxylcanthin-6-one(15)、picrasidine O(16)。结论化合物1为1个新的β-咔巴啉型生物碱,命名为苦木碱Z;化合物12为新天然产物。

苦木化学成分研究

目的对苦木Picrasmaquassioides的化学成分进行研究。方法采用柱色谱等多种方法进行分离纯化,并通过理化常数和各种波谱技术对化合物的结构进行鉴定。结果从苦木的80%乙醇提取物中共分离得到了16个化合物,其中包括12个生物碱和4个苦味素成分,分别鉴定为1-羟甲基-4-甲氧基-β-咔巴啉(1)、苦木碱B(2)、1-甲氧甲酰基-4-甲氧基-β-咔巴啉(3)、1-甲氧甲酰基-4,8-二甲氧基-β-咔巴啉(4)、1-乙基-4-甲氧基-β-咔巴啉(5)、1-乙基-4,8-二甲氧基-β-咔巴啉(6)、苦木西碱I(7)、铁屎米-6-酮(8)、5-甲氧基-铁屎米-6-酮(9)、苦木碱F(10)、苦木碱D(11)、quassidine B(12)、quassin(13)、苦木内酯B(14)、苦木内酯E(15)、norquassin(16)。结论化合物1为新的β-咔巴啉型生物碱,命名为苦木西碱丁(kumujantine D),化合物4为首次从苦木中分离得到。