苦瓜几丁质酶基因-益母草抗菌肽基因遗传转化黑麦草

为建立农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导CHI-AFP双价基因遗传转化黑麦草的转基因技术体系,以来自黑麦草卓越品种的成熟胚性愈伤组织为受体材料,研究了遗传转化中4个因素的影响效果以及转基因植株的抗病效果。结果显示,4个因素中最关键的因素是乙酰丁香酮浓度。当乙酰丁香酮浓度达到200mol/L时,转基因植株的比率最高,可达到1.17%,转基因植株对立枯丝核菌的抗性比对照植株明显增强。

苦瓜几丁质酶的分离及生物学特征分析

为了探究苦瓜几丁质酶在生物防治和植物抗真菌病害中的潜势作用,以青皮苦瓜为试验材料,采用0~60%（NH4）2SO4分级分离苦瓜蛋白质,通过几丁质亲和柱层析色谱工作站,分步聚集纯化出几丁质酶。SDS-PAGE凝胶电泳显示单一条蛋白带;经生化分析鉴定,苦瓜几丁质酶的分子量为35.4 k Da,等电点p I=6.2;酶活力为24 U,比活力为32 U/mg。理化性检测表明,苦瓜几丁质酶的最适温度和p H值分别为50℃、6.0;氧化剂、还原剂和金属离子影响酶活力;其清除羟自由基能力和总抗氧化能力均有上升的趋势。抑菌试验显示,苦瓜几丁质酶对霉菌有一定的抑制效力,对植物致病真菌有不同程度的抑制作用,提示偏酸性几丁质酶具有明显的抗菌活性及抗氧化能力,利用区隔性分级提纯苦瓜几丁质酶,将能开发出有发展潜力的新型抗真菌病虫害药物。