MAP30苦瓜抗HIV蛋白对细胞内HBeAg表达抑制作用的定量分析

目的 :研究Mr 为 30 0 0 0的苦瓜抗HIV蛋白 (MAP30 )对 2 .2 .15细胞内HBV基因表达的抑制作用。方法 :将HBVDNA转染的人肝癌细胞株 2 .2 .15 ,在MAP30存在的情况下培养后 ,进行间接免疫荧光染色 ,用共聚焦技术定量分析细胞内HBeAg的表达。结果 :与对照组相比较 ,MAP30培养的细胞内HBeAg荧光量明显减少。结论 :MAP30对 2 .2 .15细胞内HBeAg的表达有明显的抑制作用。

苦瓜MAP30蛋白基因克隆、表达及其抗肿瘤活性研究

通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET 30a中,构建成带有N端6His tag的融合表达载体。表达载体用CaCl2 介导的化学转化法转化E .coliBL2 1 (DE3) ,然后利用PCR筛选阳性克隆。工程菌经1mmol/LIPTG诱导4h实现高效表达,而且在30℃时融合蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白5 6%。可溶性分析表明,该融合蛋白在大肠杆菌中主要以可溶的形式存在。重组蛋白通过Ni2 +鏊合亲和层析进行纯化,纯化蛋白占上清总蛋白37. 2 % ,发酵液产率为2 5 0mg/L。Westernblot分析表明,重组蛋白可与兔抗his tag多克隆抗体发生特异性反应。利用MTT法分析重组MAP30的细胞毒性,结果表明其对小鼠3T3和S 1 80肿瘤细胞株具有明显的抑制作用,ID50 分别约为5 0 μg/ml和3 0mg/ml,而对人正常胚肺二倍体WI 38细胞株的毒性极小。

新一代抗HIV植物蛋白-MAP30

当前,在逆转录酶及蛋白酶抑制剂抗HIV治疗中存在诸多缺陷,如不能完全抑制病毒复制,产生依赖药物剂量的毒性以及迅速出现耐药性等,寻求有效的抗HIV药物已迫在眉睫,而在丰富的植物资源中挖掘新的抗病毒制剂则成为令人瞩目的新领域.

苦瓜MAP30蛋白研究现状及应用前景分析

苦瓜MAP30蛋白属于Ⅰ型核糖体失活蛋白,具有广谱的抗病毒、抗肿瘤活性,并且具有良好的特异性,对正常细胞无毒副作用。总结了MAP30蛋白结构、抗病毒活性、抗肿瘤活性及相关机制,并对其应用前景进行了分析,为进一步深入研究MAP30蛋白抗病毒、抗肿瘤机制及开发相关药物提供科学依据和理论基础。

苦瓜籽蛋白的分离纯化及免疫原性分析

经过NaCl溶液匀浆抽提、硫酸铵分级分离、SP-SepharoseFastFlow层析、SephacrylS-100层析、Macro-Cap-SP层析,从苦瓜籽中同时分离纯化出大量的α-苦瓜素和苦瓜抗HIV蛋白30。经SDS-PAGE鉴定,二者均为单一条带,表观分子量为28kDa。用两种蛋白分别免疫Balb/c小鼠,双向免疫扩散表明,两种苦瓜籽蛋白无交叉反应。本实验为进一步探索PEG修饰MAP30免疫原性变化打下了基础。

重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30对BGC-823细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30(MAP30)对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法将BGC-823细胞分为对照组(A组)和MAP30 10、20、30、40、50、60μg/ml实验组(分别为B1、B2、B3、B4、B5、B6组)。MTT、集落形成和裸鼠致瘤实验观察细胞增殖的抑制作用,光镜、电镜、荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡。结果与A组相比,MAP30呈剂量依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,IC50为51.67μg/ml。B3组光镜下细胞变圆缩小,细胞膜发泡,可见凋亡小体;电镜下细胞表面微绒毛消失,细胞核和细胞质浓缩,核膜褶皱,染色质凝集。荧光染色和流式细胞术检测显示,B3组BGC-823细胞凋亡率较A组增加(P<0.05)。结论 MAP30可抑制BGC-823细胞增殖,并可诱导其凋亡。