苦瓜核糖体失活蛋白MAP30的原核表达与抗体制备

苦瓜核糖体失活蛋白MAP30(Momordica charantiaantiviral protein 30)是苦瓜中一种具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性的蛋白质.将含有重组表达质粒pET-28(a)-MAP30的大肠杆菌BL21进行诱导表达获得了重组蛋白MAP30,对IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导浓度、诱导时间表达条件的分析表明,工程菌经0.2mmol.L-1IPTG诱导6 h实现高效可溶性表达.利用镍离子鏊合亲和层析对重组蛋白纯化,当洗脱液中咪唑的浓度为100 mmol.L-1时,目的蛋白被洗脱的效果最好.将纯化后的重组蛋白免疫家兔,获得了特异性的多克隆抗血清.

聚乙二醇修饰对苦瓜核糖体失活蛋白的肝细胞毒性影响

目的探讨聚乙二醇(PEG)修饰对α型苦瓜核糖体失活蛋白(α-momorcharin,α-MMC)的大鼠肝细胞毒性的影响。方法将SD大鼠随机分为生理盐水阴性对照组,α-MMC高、中、低剂量组(蛋白含量分别为6.25、2.08、0.70mg/kg)和PEG修饰后的α-MMC-PEG高、中、低剂量组(蛋白含量相同),每组24只,隔日经尾静脉注射给药一次,连续28d,停药后恢复14d,观测动物的一般状况,并分别在给药期末和恢复期末进行肝功能和肝组织病理学检查。结果在给药第28d,与生理盐水阴性对照组比较,α-MMC高、中剂量组有明显的肝功能异常,如血清白蛋白(ALB)含量降低,血清球蛋白(GLB)增加,A/G比值降低,谷草转氨酶(AST)、总胆红素(BIL)和胆固醇(CHO)增加;HE染色可见弥散性肝细胞水肿、变性,炎性细胞浸润,甚至点状坏死。与α-MMC不同,经PEG修饰后的α-MMC-PEG各组的毒性则明显减轻,其高剂量组肝功损害指标及病理改变仅与α-MMC低剂量组接近,而中剂量和低剂量组与阴性对照组一致。结论 PEG修饰能够明显降低α-MMC对大鼠的肝细胞毒性。

苦瓜蛋白RIP的免疫毒性研究

目的分离纯化苦瓜籽核糖体失活蛋白(RIP),对RIP在动物体内急性毒性和免疫毒性进行研究。方法采用离子交换层析、凝胶过滤层析等方法提取苦瓜籽RIP,对其进行小鼠急性毒性实验,确定小鼠半数致死量(LD50),并通过豚鼠全身主动过敏试验和大鼠被动皮肤过敏试验,探讨苦瓜籽RIP的免疫毒性。结果苦瓜籽RIP对小鼠的LD50为25.2 mg/kg,全身主动过敏试验中,RIP高、低剂量组豚鼠出现明显过敏反应,多数迅速死亡,被动皮肤过敏试验中,RIP组大鼠皮肤出现明显蓝斑。结论苦瓜籽核糖体失活蛋白具有较强的免疫毒性。

苦瓜抗HIV活性蛋白及其聚乙二醇修饰研究进展

苦瓜籽含有许多具有抗HIV活性的核糖体失活蛋白,例如α-苦瓜素,β-苦瓜素和MAP30,它们还分别具有堕胎、抗肿瘤活性、抗乙肝病毒活性等。本文从结构、功能、抗HIV分子机制、与其它病毒作用、与其它药物相互作用等方面总结了MAP30蛋白的研究,并根据现有的聚乙二醇修饰方法对MAP30修饰研究提出了展望。

苦瓜MAP30基因克隆与鉴定

目的克隆苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白MAP30全长基因并构建其表达载体。方法提取苦瓜的基因组DNA,根据Genebank中已公开发表的MAP30序列,设计出一对特异性引物。采用PCR技术,从苦瓜的基因组DNA中获得MAP30全长序列共860bp,克隆入pET-28a(+)载体中,进行酶切及测序鉴定。结果克隆了MAP30全长基因,经测序证实与Genbank中收录的SEA基因序列同源性达100%。结论本研究成功地克隆了MAP30全长基因,为进一步研究MAP30基因的靶向抗肿瘤研究奠定了基础。