苦瓜皂苷L调控PI3K/AKT通路促进内皮祖细胞增殖能力和内皮功能的实验研究

目的:探讨苦瓜皂苷L对内皮祖细胞(EPC)增殖能力和内皮功能的作用及机制。方法:体外分离、培养、鉴定外周血EPC。使用不同浓度苦瓜皂苷L处理EPC 24 h后,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞活力。使用AutoDock Tools 5.6软件,分别以磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)为受体,以药物分子苦瓜皂苷L为配体采用盲对接法进行分子对接。使用PI3K/AKT抑制剂LY294002和最佳使用浓度的苦瓜皂苷L单独或同时处理EPC 24 h后检测各组细胞活力和磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)及磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)表达水平。结果:与对照组比较,苦瓜皂苷L呈剂量依赖性地促进EPC增殖,且40μmol/L的苦瓜皂苷L是最佳药物浓度。与对照组比较,LY294002可下调EPC细胞活力,苦瓜皂苷L可上调细胞活力。与苦瓜皂苷L组比较,共同使用苦瓜皂苷L和LY294002可降低细胞活力。分子对接结果显示,苦瓜皂苷L与PI3K和AKT均存在直接作用,形成稳定的锁钥结构。与对照组比较,LY294002可显著下调p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白水平;苦瓜皂苷L可上调p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白水平。与苦瓜皂苷L组比较,使用苦瓜皂苷L和LY294002可降低p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白水平。结论:苦瓜皂苷L通过PI3K/AKT信号通路靶向调节EPC的增殖能力,进而上调内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活化水平以促进EPC内皮功能。

苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用研究

目的探究苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 (1)体外培养大鼠H9c2心肌细胞,采用MTT法评价不同浓度的异丙肾上腺素(0.625、1.25、2.5、5、10μmol·L-1)和不同浓度的苦瓜皂苷L(1.625、3.125、6.25、12.5、25.0μg·mL^(-1))对心肌细胞活力的影响。(2)采用异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大模型。实验分为正常组、模型组、苦瓜皂苷L干预组和苦瓜皂苷L单独组。分别通过细胞拍照结合ImageJ软件测量、荧光定量PCR法考察苦瓜皂苷L 12.5μg·mL^(-1)对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC及α-SKA表达的影响。在此基础上,选择参与甘油磷脂代谢的酶VI组磷脂酶A2(PLA2G6)、二酰甘油激酶ζ(DGKZ)、甘油磷酸胆碱磷酸二酯酶1(GPCPD1)为指标,评价苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞上述3种酶基因表达的影响;进一步以PLA2G6和DGKZ蛋白为指标,采用Western Blot法考察苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞PLA2G6和DGKZ蛋白表达的影响。结果 (1)与正常组比较,异丙肾上腺素(0.625~10μmol·L-1)和苦瓜皂苷L(1.625~25μg·mL^(-1))对心肌细胞活力没有明显影响(P>0.05)。本研究选用异丙肾上腺素10μmol·L^(-1)和苦瓜皂苷L 12.5μg·mL^(-1)进行实验。(2)与正常组比较,模型组心肌细胞表面积增加(P<0.05),心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC、α-SKA表达上调(P<0.05),PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA表达上调(P<0.05),PLA2G6和DGKZ蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,苦瓜皂苷L干预组能够降低心肌细胞表面积(P<0.05),下调心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC、α-SKA表达(P<0.05),下调PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA表达(P<0.05),降低PLA2G6和DGKZ蛋白表达(P<0.05)。结论苦瓜皂苷L可缓解异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,可能与其抑制甘油磷脂代谢酶PLA2G6和DGKZ的表达有关。