消化道酶连续水解制备苦荞球蛋白多肽及其抗氧化活性研究

采用胃蛋白酶、胰蛋白酶对苦荞球蛋白进行连续水解,以水解度(DH%)为指标,采用单因素分析底物浓度、酶底比、pH值、水解时间对苦荞球蛋白的酶解效果,并通过正交实验对胃-胰蛋白酶连续作用的酶解工艺进行优化;检测酶解产物的体外抗氧化活性。结果表明:苦荞球蛋白经胃蛋白酶酶解的最佳条件为:底物浓度30 g/L、酶底比为10%、pH值为2.0、反应时间为2.0 h;胰蛋白酶酶解的最佳条件为:底物浓度30 g/L、酶底比为5%、pH值为8、反应时间为2.5 h;胃-胰蛋白酶连续酶解最佳条件:经胃蛋白酶先水解1 h后再继续用胰蛋白酶水解1.5h,水解度为25.18%。和苦荞球蛋白相比,苦荞球蛋白酶解物的抗超氧阴离子能力及羟自由基清除能力均增强(p<0.05)。

苦荞球蛋白酶解液对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

研究苦荞球蛋白酶解液(EHBG)对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。苦荞球蛋白(BG)经胃-胰蛋白酶连续酶解后制备EHBG;采用oxLDL诱导HUVEC细胞氧化损伤模型,将EHBG作用于细胞,Vc为阳性对照;MTT法检测细胞存活率,测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Westernblot检测各组细胞中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX1)和核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果显示,与氧化损伤模型组比较,EHBG、BG和Vc均可提高oxLDL处理后HUVEC生存率,降低细胞培养液中MDA含量、LDH活性,升高SOD活性及NO含量;下调ox-LDL诱导的内皮细胞LOX1和NF-κB的表达,且与BG相比,EHBG的效果均较显著。表明EHBG具有抗HUVEC氧化损伤的作用,其机制可能与抑制oxLDL/LOX1/NF-κB信号通路有关。