苦龙胆脂苷促进肝癌细胞系Huh-7细胞凋亡的PKA/C调节机制

目的本实验分析苦龙胆脂苷对肝癌细胞系Huh-7细胞凋亡的促进作用及PKA/C的调节机制,为相关的新药开发提供参考。方法将生长状态良好的肝癌细胞系Huh-7细胞随机分为4组:对照组、苦龙胆脂苷组、苦龙胆脂苷+蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89组和苦龙胆脂苷+PKC的抑制剂H7组(n=8)。除对照组肝癌细胞外,其余各组细胞给予苦龙胆脂苷共培养6 h(30 mmol·L^(-1)),H89组和H7组细胞于培养的最后3 h加入H89(10 mmol·L^(-1))和H7(10 mmol·L^(-1))共培养。Western Blotting和免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白及MEK/ERK通路蛋白的表达,DAPI染色分析细胞凋亡小体情况。结果与对照组相比,苦龙胆脂苷能够显著的提高Bax、Caspase 3和Caspase 9(P>0.05)而降低Bcl2蛋白的表达(P>0.05),同时促进凋亡小体形成和提高Ras/Raf/MEK/ERK1/2蛋白表达(P>0.05);PKA抑制剂H89能显著的恢复上述蛋白的异常表达(P>0.05)而PKC抑制剂H7无明显效果(P>0.05)。结论苦龙胆脂苷能有效促进肝癌细胞系Huh-7细胞凋亡及MEK/ERK信号通路的激活,且此过程与PKA的调控作用密切相关。

高效液相色谱法测定辐状肋柱花中10种成分的含量

目的 建立高效液相色谱法同时测定辐状肋柱花中马钱苷酸、獐芽菜苦苷、当药苷、芦丁、当药黄素、木犀草素、苦龙胆脂苷、当药醇苷、槲皮素、8-羟基-1,3,5-三甲氧基[口山]酮的含量。方法 采用Waters SunFirODS C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长 254 nm,柱温 30℃。结果 10种成分马钱苷酸、獐芽菜苦苷、当药苷、芦丁、当药黄素、木犀草素、苦龙胆脂苷、当药醇苷、槲皮素、8-羟基-1,3,5-三甲氧基[口山]酮均得到良好分离,线性关系良好(r≥0.9993),加样回收率均在 96.20%~100.68%,RSD<2.9%。结论 该方法快捷简便、稳定可靠,可应用于辐状肋柱花及其制剂的质量控制,为建立藏药辐状肋柱花质量标准提供依据。