苦龙胆酯苷对热消融不全的残存肝癌干细胞的影响及机制初探

目的探讨苦龙胆酯苷(Amarogentin)在热消融不全的残存肝癌细胞对肝癌干细胞的影响及其作用机制。方法水浴法建立HepG2肝癌细胞热消融不全的残存模型,流式细胞术检测细胞中CD133阳性细胞比例,qRT-PCR和Western blot法检测肝癌细胞中CD133的mRNA和蛋白的表达水平。分别用低、中和高剂量的苦龙胆酯苷处理上述HepG2细胞24 h后,流式细胞术分别检测细胞中CD133阳性肝癌细胞比例、肝癌细胞的增殖率和凋亡率,qRT-PCR和蛋白印记法检测肝癌细胞中CD133、TBC1D15和p53的mRNA和蛋白的表达水平。结果随培养时间的延长,热消融不全的残存肝癌细胞中CD133阳性细胞比例、CD133和TBC1D15 mRNA和蛋白的表达水平显著提高,而p53磷酸化水平显著下降。苦龙胆酯苷处理后,热消融不全的残存肝癌细胞中CD133阳性细胞比例、细胞增殖率以及肿瘤干细胞相关分子CD133和TBC1D15的mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);凋亡率和p53磷酸化水平提高(均P<0.05)。结论苦龙胆酯苷可降低热消融不全的残存肝癌干细胞的比例和肿瘤细胞的增殖,促进细胞的凋亡,这可能与其提高肝癌干细胞p53磷酸化和抑制TBC1D15蛋白相关。

苦龙胆酯苷拮抗高脂饮食所致的小鼠动脉粥样硬化

[目的]探究苦龙胆酯苷(MAG)对高脂饮食(HFD)所致动脉粥样硬化的拮抗作用及其机制。[方法]将30只ApoE-/-小鼠随机分为对照组(正常饮食)、HFD组、HFD+MAG组,每组10只小鼠,其中HFD+MAG组每日予50 mg/kg MAG灌胃,持续12周。生物化学检测仪测定血脂水平;油红O染色观察主动脉斑块沉积情况;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉血管病理形态表现;Mac-3免疫组织化学染色观察主动脉巨噬细胞聚集情况;免疫荧光定位染色观察NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达与分布;Western blot检测主动脉中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和Caspase-1亚基p20表达水平。[结果]HFD+MAG组血清甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平分别降低至HFD组的88.39%、74.85%和64.97%(均P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇水平升高至HFD组的142.18%(P<0.05),斑块面积减少至HFD组的45.16%(P<0.05),MAG能改善主动脉病理形态表现,使巨噬细胞沉积减少,斑块内NLRP3阳性巨噬细胞比例降低,主动脉中NLRP3、ASC和Caspase-1亚基p20表达分别降低至HFD组的45.58%、53.28%和42.35%(均P<0.05)。[结论]MAG对高脂饮食所致ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化有明显的拮抗作用,其机制可能与其抑制斑块内巨噬细胞NLRP3炎症小体的激活有关。

苦龙胆酯苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中苦龙胆酯苷质量浓度的HPLC方法,研究苦龙胆酯苷在大鼠体内的药代动力学过程。方法雄性SD大鼠,尾静脉注射苦龙胆酯苷6.25,12.5和25mg·kg^-1,于不同时间采集血液。色谱柱为Woburn Stamsil C18,流动相为甲醇-水（40∶60）,流速为1.0mL·min^-1,柱温为30℃,内标为胡黄连苷Ⅰ,检测波长为260nm,应用药代动力学软件DAS 2.0拟合房室模型,并进行药代动力学参数的计算和数据分析。结果在选定的条件下,苦龙胆酯苷和胡黄连苷Ⅰ峰形良好,二者峰面积比值与苦龙胆酯苷血药质量浓度在一定范围内线性关系良好（r=0.999 4）,线性范围在0.114-114μg·mL^-1,日内和日间精密度RSD均小于10%,提取回收率为101.1%-106.2%,稳定性的RSD均小于3%。大鼠尾静脉给药后,体内药代动力学过程符合二室模型,在6.25-25mg·kg^-1范围内,药物的最大血药质量浓度（Cmax）或进入体循环的药量（用AUC表示）的变化与给药剂量的改变不成正比。结论所建立的HPLC法简便、快捷、灵敏、准确,适用于苦龙胆酯苷的药代动力学研究。

苦龙胆酯苷在疾病发展及治疗中的研究进展

苦龙胆酯苷(AG)在传统医药学中的应用已经有数千年的历史,随着对传统医学研究的重视,苦龙胆酯苷在保肝、阻断癌症发展、改善糖尿病和动脉粥样硬化病理过程以及治疗黑热病等方面效果显著,本文就近年来国内外关于苦龙胆酯苷理化性质、药理活性及部分机制的研究进展进行综述。

苦龙胆酯苷的研究进展

苦龙胆酯苷是一种裂环烯醚萜苷类化合物,又称为苦龙苷或龙胆苦酯苷。其分子式为:C27H28O14,分子量为576.52,是已知最苦的裂环烯醚萜苷类化合物。目前已证明可从川东獐牙菜、印度獐牙菜、龙胆草以及辐花肋柱花中提取。辐花肋柱花是最新证明的可提取苦龙胆酯苷的植物。苦龙胆酯苷具有助消化,保肝,抗皮肤肿瘤,抗黑热病等药理活性。在古代印度传统医药以及中药藏药中,苦龙胆酯苷的来源植物是治疗消化系统相关疾病的一味常见的草药,如保肝、抗糖尿病等。在体内药代动力学研究中,兔静脉注射苦龙胆酯苷,在血中有较快的清除率(2.62±0.41 L/h/kg)和广泛的体内组织分布(1.08±0.44 L/kg);采用游离、脂质体和囊泡体形式给仓鼠用药具有明显保护肝肾功能且未发现明显不良反应。

川东獐牙菜化学成分的研究

目的 研究川东獐牙菜的活性成分。方法 采用硅胶、SephadexLH 2 0柱层析和UV ,IR ,1 H NMR ,1 3 C NMR ,MS等光谱分析方法。结果 鉴定 4个化合物 ,分别为苦龙胆酯苷 (amarogentin ,Ⅰ )、雏菊叶龙胆苷 (swertianolin ,Ⅱ )、去甲基雏菊叶龙胆酮(demethylbellidifolin ,Ⅲ )和雏菊叶龙胆酮 (bellidifolin ,Ⅳ )。结论 Ⅱ ,Ⅲ均为首次从本植物中分离得到 ,首次利用 2D

3种龙胆属药用植物叶中主要有效成分的积累

采用高效液相色谱法测定同一产地的坚龙胆、头花龙胆和微籽龙胆叶中的龙胆苦苷(1)、獐芽菜苦苷(2)、獐芽菜苷(3)和苦龙胆酯苷(4),并将其叶的HPLC指纹图谱与坚龙胆根及根茎的指纹图谱进行对比,以单因素方差分析法分析其叶中主要有效成分的积累。结果表明坚龙胆和头花龙胆叶中的1、2含量极显著高于微籽龙胆(P<0.01),微籽龙胆叶中3、4含量极显著高于坚龙胆和头花龙胆(P<0.01)。坚龙胆根及根茎与坚龙胆、头花龙胆叶的指纹图谱相似度较高(0.999和0.991),成分差异较小;而与微籽龙胆叶指纹图谱相似度极低,成分差异较大。

藏药抱茎獐牙菜HPLC指纹图谱及10个成分含量测定研究

目的:建立抱茎獐牙菜指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为其质量控制及评价提供参考。方法:采用Waters Sun Fir ODS C18色谱柱,甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为1.0 m L·min^(-1),检测波长为254 nm,柱温为30℃;建立高效液相色谱(HPLC)图谱,采用Chempattern化学计量学软件进行相似度分析。进一步通过HPLC法,测定样品中10个指标成分的含量,以寻找样品间的质量差异成分。结果:建立了抱茎獐牙菜HPLC指纹图谱,相似度均>0.904,并确认29个共有峰,指认出马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、当药苷、芒果苷、异荭草素、苦龙胆酯苷、当药醇苷、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基[口山]酮、雏菊叶龙胆酮10个色谱峰。含量测定显示,10个成分线性关系良好(r≥0.9993),加样回收率均在96.8%~99.3%,RSD<2.1%,平均含量分别为0.16%、3.63%、0.23%、0.38%、0.24%、0.26%、0.07%、1.13%、0.08%、0.25%。测定结果表明獐牙菜苦苷、当药醇苷等成分含量较高。结论:HPLC指纹图谱结合多指标成分含量测定方法适用于抱茎獐牙菜的质量控制与评价,该方法快捷简便、稳定可靠,可为建立藏药抱茎獐牙菜质量标准提供依据。