苯丁酸甘油酯治疗儿童鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症1例

苯丁酸甘油酯(glyceryl phenylbutyrate,GPB)是治疗鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症(ornithine transcarbamylase deficiency,OTCD)的长期管理药物,可有效控制高氨血症,但国内使用该药的经验匮乏。该文回顾性分析上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心1例诊断为OTCD的患儿资料,并进行相关文献复习。该患儿确诊后使用GPB治疗,随后进行疗效随访和药学监测。患儿,男,6岁6个月,语言发育差,不听指令,脾气暴躁并伴有攻击性行为。监测血氨最高327μmol/L;尿有机酸分析提示尿嘧啶水平升高;头颅磁共振成像示双侧大脑半球广泛异常信号;基因检测发现OTC基因新生突变(c.241T>C,p.S81P)。予以GPB治疗后1、2、3个月左右的血氨分别为43、80、56μmol/L。患儿治疗期间血氨控制良好,未见与药物相关的不良反应,发育落后情况较前改善,可听指令,脾气好转,无攻击性行为。

苯丁酸氮芥联合伊布替尼对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的作用及相关机制

目的:探讨苯丁酸氮芥联合伊布替尼对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的抑制作用及相关机制。方法:分别将不同浓度的苯丁酸氮芥、伊布替尼单药及两药联合作用于Jeko-1细胞株,采用CCK-8检测细胞增殖情况,同时采用Western blot检测细胞中BCL-2、caspase-3、PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达的变化。结果:分别用苯丁酸氮芥(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)及伊布替尼(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)单药处理Jeko-1细胞株24、48和72 h后,细胞增殖均受到抑制,且抑制作用呈时间及剂量依赖性,两药联合时抑制作用更明显(均P<0.05)。与对照组相比,苯丁酸氮芥(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)及伊布替尼(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)单药组细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性;与相应剂量(3.125、6.25、12.5μmol/L)单药组比较,两药联合应用组Jeko-1细胞株的凋亡率明显增加(均P<0.05)。与单药组相比,两药联合时可产生协同作用,Jeko-1细胞的caspase-3表达明显增强,BCL-2、PI3K、p-AKT/AKT表达明显减弱(均P<0.05)。结论:苯丁酸氮芥及伊布替尼能够促进套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的凋亡,两药联合应用可以产生协同作用,其主要是通过AKT相关信号通路发挥作用。

苯丁酸氮芥联合美罗华维持治疗老年人国际预后指数(IPI)≥3分的弥漫大B细胞淋巴瘤疗效观察

探讨苯丁酸氮芥联合美罗华维持治疗老年人国际预后指数(IPI)≥3分的弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效。方法 回顾性分析医院确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤,国际预后指数(IPI)≥3分经治疗完全缓解的56例老年患者的一般资料,随机分为治疗组和对照组,治疗组接受苯丁酸氮芥联合美罗华维持治疗,对照组完全缓解后未再使用药物治疗,对比分析两种方法的疗效,并随访无病生存期(PFS)及总生存率(OS)。结果 3年后治疗组完全缓解率32.1%(9/28),高于对照组3.6%(1/28),P<0.05。治疗组PFS率6月、12月、24月、36月为100%、85.7%、50%、32.1%,高于对照组6月、12月、24月、36月为78.6%、35.7%、14.3%、3.6%,P<0.05。治疗组OS率为100%,与对照组96.4%无差异,P>0.05。治疗组12月、24月、36月OS率分别为96.4%、78.6%、46.4%,高于对照组78.6%、53.5%、28.6%,P<0.05。结论 苯丁酸氮芥联合美罗华维持治疗老年IPI≥3(中高危、极高危组)的弥漫大B细胞淋巴瘤,可延长PFS,提高总生存期,减少复发风险。 。

手性合成(R)-2-羟基苯丁酸乙酯的研究

(R)-2-羟基苯丁酸乙酯是合成普利类抗高血压药物的重要手性中间体。通过正交实验优化了(R)-2-羟基苯丁酸乙酯中间体2-氧代苯丁酸乙酯的合成,利用亚硫酸氢钠提纯,得到了纯度为98%的2-氧代苯丁酸乙酯;添加8-羟基喹啉来提高不对称氢化的选择性,可以提高产品e.e.值。

(R,S)-α-羟基苯丁酸乙酯的HPLC手性分离

建立了手性柱HPLC法测定盐酸贝那普利的中间体(R)_α_羟基苯丁酸乙酯中的(S)_α_羟基苯丁酸乙酯。采用ChiralcelOD -H色谱柱 ,流动相正己烷 -异丙醇(体积比90∶10) ,流速1.0mL/min ,检测波长254nm ,进样体积20μL ,按外标法以峰面积计算(R)_α_羟基苯丁酸乙酯中的(S)_α_羟基苯丁酸乙酯的含量。(S)体的线性范围5.5～23.8μg/mL ,检出限0.47μg/mL(S/N=3) ,回收率为96 %～103 % ,精密度RSD为2.1%(n=6)。

苯丁酸钠对多烯紫杉醇耐药前列腺癌细胞株的增值抑制和凋亡诱导作用

目的研究苯丁酸钠对前列腺癌多烯紫杉醇耐药细胞株的增值抑制与凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法构建多烯紫杉醇耐药前列腺癌PC3细胞株(PC3/DTX),采用0、1、2、4 mmol/L的苯丁酸钠处理PC3/DTX,MTT检测细胞增殖、细胞活力以及抑制率,计算不同浓度苯丁酸钠处理后各组多烯紫杉醇对PC3/DTX细胞的半致死浓度(IC50);流式细胞仪检测不同处理组细胞凋亡水平;Western blot检测p21、Cyclin D1与Survivin的表达水平。结果 0、1、2、4 mmol/L的苯丁酸钠处理PC3/DTX细胞48 h后,细胞存活率分别是(99.85±2.69)%,(84.68±3.87)%,(68.65±4.54)%和(43.54±5.69)%(P<0.05);抑制率分别是(10.69±3.65)%,(5.78±4.58)2%,(54.68±3.98)%和(69.84±6.54)%(P<0.05);多烯紫杉醇对各处理组细胞的IC50分别为135.98±2.69、109.65±3.87、87.65±3.84、64.62±2.98 nmol/L(P<0.05);细胞的凋亡率分别为(7.20±0.80)%,(10.20±0.90)%,(19.80±2.10)%和(27.40±2.50)%(P<0.05);Western blot显示苯丁酸钠促进p21蛋白的表达,抑制Cyclin D1与Survivin蛋白的表达。结论苯丁酸钠可以增加前列腺癌耐药细胞株对多烯紫杉醇的药敏性,并影响前列腺癌耐药细胞株p21、Cyclin D1与Survivin蛋白的表达量。

苯丁酸钠对人肝癌细胞分化及P^(21WAF1/CIP1)表达的调控

目的:探讨苯丁酸钠诱导人肝癌细胞Bel7402,HepG2生长抑制、分化和细胞周期阻滞,以及对抑癌基因P21WAF1 /CIP1表达的影响。方法:培养Bel7402,HepG2,应用MTT比色法观察苯丁酸钠对Bel7402,HepG2的生长抑制作用,倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期,以RTPCR检测Bel 7402,HepG2细胞中P21WAF1 /CIP1基因表达水平,WESTERN印记法检测P21WAF1 /CIP1蛋白的表达。结果:苯丁酸钠 2, 4, 8mmol·L-1处理 72h后Bel 7402, HepG2 的抑制率分别为 28. 43 %,57. 61 %, 71. 32 %和 27. 42 %, 57. 11 %, 70. 31 %处理后的细胞成纤维母细胞样改变,细胞阻滞于G期,P21WAF1 /CIP1基因和蛋白表达水平均增强。结论:苯丁酸钠抑制 2种人肝癌细胞株的生长,诱导部分人肝癌细胞分化,使细胞阻滞于G1期,苯丁酸钠能诱导P21WAF1 /CIP1基因的表达,增加P21WAF1 /CIP1蛋白的表达水平。

苯丁酸钠单用与氟尿嘧啶或顺铂联用对喉癌Hep-2细胞株的影响

目的:研究苯丁酸钠(sodiumphenylbu-tyrate,PB)对体外喉癌Hep-2细胞株生长和分化的影响,及其能否增强氟尿嘧啶、顺铂对喉癌细胞的细胞毒性。方法:采用流式细胞仪检测PB作用后喉癌细胞的细胞周期,应用四氮唑蓝法检测PB单独及联用氟尿嘧啶或顺铂时,喉癌细胞的存活能力。结果:经PB作用4d后,细胞周期出现G1-S期阻滞和剂量依赖性生长抑制作用;PB的半数抑制浓度(IC50)是4.21mmol·L-1。1mmol·L-1PB与氟尿嘧啶或顺铂联用3d后,2药的IC50分别由(11.4±s1.7)mg·L-1和(1.60±0.05)mg·L-1下降至(8.2±0.8)mg·L-1和(1.36±0.11)mg·L-1P<0.05。结论:PB能诱导体外喉癌细胞发生分化和生长抑制作用,增强氟尿嘧啶、顺铂对喉癌细胞株的细胞毒性作用。

苯丁酸氮芥对淋巴瘤细胞凋亡信号通路的影响

目的:探讨苯丁酸氮芥对B细胞淋巴瘤细胞株A20细胞是否具有促凋亡效应及其在凋亡信号通路中的具体作用机制。方法:实验组使用终浓度为20μmol/L的苯丁酸氮芥处理A20细胞,对照组使用PBS处理A20细胞。使用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞的凋亡情况,使用Western blot检测淋巴瘤细胞中Active caspase-3、Survivin、NF-κB和p AKT的表达,使用荧光定量PCR检测淋巴瘤细胞中Survivin mRNA的表达。结果:与对照组相比较,苯丁酸氮芥干预组的A20细胞FITC^+/PI^+凋亡细胞的比例显著增高,而Active caspase-3的表达显著上调(t=7. 384,P=0. 000),Survivin mRNA的表达显著降低(t=4. 384,P=0. 000),Survivin蛋白的表达显著降低(t=12. 360,P=0. 000),NF-κB蛋白的表达显著降低(t=5. 462,P=0. 000),p AKT的表达显著降低(t=7. 183,P=0. 000)。结论:苯丁酸氮芥促进淋巴瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路、NF-κB和Survivin的表达有关。

苯丁酸钠抗肿瘤的广谱诱导分化作用

恶性肿瘤的诱导分化治疗是近年来倍受关注的新策略 ,苯丁酸钠是一种高效、低毒、广谱的诱导分化新药 ,实验表明它对胶质瘤、前列腺癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤以及化学预防方面都有明显作用。由于临床上可以实现其有效浓度 ,本身低毒可以大剂量口服 ,具有独特的优势。苯丁酸钠与其他药物合用可以增强抗癌效果。该药临床上曾用于治疗尿素合成紊乱、地中海贫血和镰刀型贫血症 ,目前美国正在进行对胶质瘤和前列腺癌的临床Ⅱ期实验 ,前景看好。

苯丁酸钠对人脑胶质瘤细胞的诱导分化作用

目的 评价新药苯丁酸钠对胶质瘤细胞的诱导分化作用 ,为胶质瘤诱导分化相关基因研究作前期准备。方法 采用MTT法、软琼脂克隆形成率、形态学、流式细胞术、GFAP免疫荧光等方法鉴定分化程度 ,用划痕实验检测细胞运动能力的改变。结果 2mM苯丁酸钠即可明显诱导人脑胶质瘤低分化细胞株SHG - 4 4 - 9的细胞分化 ,表现为增殖抑制 ,克隆形成能力丧失 ,细胞突起增长 ,G1期阻滞 ,GFAP表达量升高 ,细胞运动能力下降。结论 苯丁酸钠可以高效诱导人脑胶质瘤细胞分化 ,并使细胞运动能力下降 。

苯丁酸氮芥在难治性肾病综合征治疗中的应用

目的 明确苯丁酸氮芥能否有效治疗肾病综合征 (NS) ,及最佳治疗方案 ,为临床NS治疗方案的选择提供指导。方法 通过Medline计算机检索系统检索 1 970～ 2 0 0 0年的相关文献 ,采用加权百分率法进行荟萃分析。结果 应用苯丁酸氮芥治疗的有效率 (67.0 0 % )较不含免疫抑制剂的其他治疗方案 (31 .84% )高 (P<0 .0 5) ;但应用较大剂量苯丁酸氮芥治疗 (63 .63 % )与应用较小剂量治疗 (71 .43 % )的有效率之间无明显差别(P >0 .0 5)。

大鼠微粒体谷胱甘肽S-转移酶1对苯丁酸氮芥体外致肿瘤细胞毒性的影响

目的:基于苯丁酸氮芥(chlorambucil,CHB)激活微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(microso-mal glutathione S-transferase1,mGST1)可显著加快催化CHB-GSH结合效应,探讨大鼠mGST1激活对CHB致不同来源肿瘤细胞株毒性的影响。方法:取雄性Sprague-Dawley大鼠肝脏,制备微粒体,去除胞浆GST的污染,获得纯化mGST1并测其活性。分别设CHB组,CHB+GSH对照组以及CHB+GSH+mGST1组。分别与PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株培养24h、48h、72h后,以IC50作为细胞损伤指标;作用8h后以JC-1染色评价线粒体膜电位(ΔΨm)改变作为损伤早期指标;作用48h以后以AO/EB染色差异作为细胞核损伤后期指标。结果:在mGST1存在环境下,24h、48h、72h PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株IC50均有显著增加。72h CHB+GSH对照组PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株的IC50分别为(6.13±2.42)μmol/L、(3.77±0.95)μmol/L、(5.36±3.06)μmol/L和(9.42±1.77)μmol/L;CHB+GSH+mGST1组显著高于CHB+GSH对照组,相应IC50(15.01±3.47)μmol/L(P<0.001)、(8.33±1.72)μmol/L(P<0.001),(26.74±5.45)μmol/L(P<0.001)和(16.93±0.85)μmol/L(P<0.001)。并伴有线粒体ΔΨm降低和核损伤减轻,呈明显的时效关系。结论:mGST1在富含GSH溶液中,可显著降低CHB对上述肿瘤细胞株的细胞毒性作用。

苯丁酸钠对胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用

目的研究苯丁酸钠(SPB)在体外对胃癌细胞株SGC-7901生长、分化的影响。方法应用MTT分析法、流式细胞仪、形态学观察法对在体外经不同浓度的SPB处理过的SGC-7901细胞进行检测。结果 SPB能抑制SGC-7901细胞的生长,并且有时间依赖关系及剂量依赖关系;应用流式细胞仪测定发现,经SPB处理的细胞其S期在16.48%,而未经处理的细胞其S期在31.07%;电子显微镜观察,细胞形态发生改变。结论SPB在体外抑制胃癌细胞株SGC-7901的生长,为SPB治疗胃肿瘤提供了实验依据。

苯丁酸氮芥抗套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1作用机制的研究

目的:探讨苯丁酸氮芥抗套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1作用机制。方法:应用MTT法检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞增殖的影响,Hoechst染色及Annexin V-FITC双染检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞凋亡的影响,Western blot检测苯丁酸氮芥对Jeko-1细胞凋亡相关蛋白BAX,BCL-2,procaspase 3,procaspase 8,procaspase 9表达水平及PI3K/AKT信号通路的激活情况。结果:苯丁酸氮芥0、5、10和20μmol/L作用Jeko-1细胞24、48、72 h后,细胞增殖受到抑制,并呈时间及剂量依赖性(r=0.873,r=0.932)。0,5,10,20μmol/L苯丁酸氮芥作用Jeko-1细胞72 h后,细胞凋亡率显著提高,BAX,procaspase 3,procaspase 8及procaspase 9蛋白表达水平显著上调,BCL-2表达水平显著下调,PI3K蛋白及AKT磷酸化水平显著降低。结论:苯丁酸氮芥能显著诱导套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1凋亡,其作用机制与调节PI3K/AKT信号通路有关。

苯丁酸氮芥的合成以及工艺研究

苯丁酸氮芥(Chlorambucil)是目前临床上最重要的一种一线抗肿瘤药物。近年来以此药物为母核,对其进行结构改造,以期找到活性更好,副作用更小的抗肿瘤药物成为国际上研究的一个热点。但是,通过文献调研我们发现,目前只有少量文献报道此药物的全合成,且已报道的路线存在原料昂贵,工艺复杂,不绿色环保等问题。针对这些问题,本文报道了一条更加简便,环保,适合工业生产的路线,通过五步反应,以总收率19.9%得到了苯丁酸氮芥,对进一步研究此药物的应用提供了帮助。

苯丁酸氮芥诱导Behcet病患者活化淋巴细胞凋亡的研究

目的 研究苯丁酸氮芥对Behcet病患者活化淋巴细胞凋亡的诱导作用。方法 分离正常人与Behcel病患者外周血淋巴细胞并用PHA刺激活化,然后加入苯丁酸氮芥进行体外培养,利用Annexin-V/PI双标记法结合流式细胞技术定量检测淋巴细胞的凋亡。 结果 (1)正常人和Behcet病患者外周血淋巴细胞经PHA活化后均可发生凋亡,其自发凋亡率分别为20.9％±3.4％和16.3％±2.7％,二者具有显著性差异(t=2.36,P<0.05);(2)Behcet病患者的活化淋巴细胞经苯丁酸氮芥作用后凋亡细胞均显著增多,凋亡率从16.3％±2.7％上升至23.6％±5.6％(t=2.72,P<0.05)。结论 Behcet病患者的活化淋巴细胞对凋亡具有抵抗性;苯丁酸氮芥可诱导Behcet病患者的活化淋巴细胞发生凋亡,此可能是其控制炎症与防止炎症复发的作用机制之一。

苯丁酸钠体外对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。[方法]不同浓度苯丁酸钠处理HepG2,应用MTT比色法观察苯丁酸钠对HepG2的生长抑制作用,落射荧光显微镜、DNA电泳和流式细胞仪观察HepG2的凋亡,West-ernblot检测苯丁酸钠处理前后HepG2细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达水平的变化。[结果]苯丁酸钠2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L作用48h对细胞的抑制率分别为19.41%、39.03%、42.19%,作用72h对细胞的抑制率分别为27.42%、57.11%、70.31%,并诱导细胞凋亡;4mmol/L苯丁酸钠作用HepG248h细胞凋亡率明显高于对照组。落射荧光显微镜和DNA电泳均观察到苯丁酸钠作用后HepG2细胞出现凋亡细胞的特征性变化。苯丁酸钠处理HepG2后Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加。[结论]苯丁酸钠体外抑制HepG2增殖并促进其凋亡,其作用机制可能是通过降低细胞内的Bcl-2蛋白,增加细胞内Bax蛋白而实现的。