桥连双苯丙氨酸二肽增强灭活猪丁型冠状病毒在小鼠上的免疫效果分析

猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)会引起新生仔猪腹泻、呕吐甚至死亡,对生猪养殖造成了严重危害。苯丙氨酸二肽及其衍生物可自组装成纳米超分子组装体,具有负载并递送药物的功能。本研究旨在探究桥连双苯丙氨酸二肽是否可以增强PDCoV的免疫原性。首先对桥连双苯丙氨酸二肽进行细胞毒性评价,之后作为佐剂(0.1 mg·mL^(-1))等体积混合灭活PDCoV(PDCoV HNZK-02,TCID 50为10^(8)·0.1 mL^(-1)),制备灭活疫苗。将灭活疫苗免疫小鼠(200μL·只-1),采用ELISA方法检测PDCoV N蛋白特异性IgG抗体、CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖SI指数、乳酸脱氢酶(LDH)方法检测特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。小鼠免疫5周后,灌胃攻毒PDCoV(500μL·只-1),3 d后进行回肠等组织病毒载量检测。结果显示,桥连双苯丙氨酸二肽对猪睾丸细胞没有明显毒性作用,作为佐剂与灭活PDCoV混合免疫小鼠后,PDCoV N蛋白特异性IgG抗体水平、SI和CTL检测结果均高于灭活PDCoV组,肠道组织病毒载量显著低于灭活PDCoV组。桥连双苯丙氨酸二肽有良好的佐剂效果,具有成为新型安全有效佐剂的潜力。

苯丙氨酸二肽类化合物Y101对DHBV-DNA的影响

目的探讨苯丙氨酸二肽类化合物Y101对感染鸭乙肝病毒的北京雏鸭体内外DHBV-DNA表达的影响。方法90只感染DHBV的北京雏鸭随机分为对照组、Y101剂量组和拉米夫定组,各组雏鸭于给药前(d 0)、给药5 d(d 5)、10d(d 10)及停药后3 d(P 3)经腿胫静脉取血,分离血清,斑点杂交法测定鸭血清中DHBV-DNA的含量;利用灌流法分取感染鸭乙肝病毒的北京雏鸭的原代肝细胞,采用QuickEx-tract DNA Extraction Soln 1.0提取鸭原代肝细胞Y101剂量组、拉米夫定对照组和正常对照组细胞内和细胞上清中的DHBV-DNA,用TaqMan探针实时荧光定量法检测DHBV-DNA含量,观察Y101对其抑制作用。结果 Y101对体内外DHBV-DNA都具有良好的抑制作用,体内0.05、0.025 g.kg-1剂量组抑制作用明显,体外80、60 mg.L-1剂量组抑制作用最强,DNA含量明显下降(P<0.05)。结论Y101可以有效的抑制DHBV-DNA的表达,抗病毒作用明显。

苯丙氨酸二肽类化合物190对小鼠CCl_4肝损伤的保护作用

目的观察苯丙氨酸二肽类化合物190对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将180只小鼠随机分为正常组,CC l4模型对照组,联苯双酯阳性药物组和PDC190低、中、高(25、50、100mg.kg-1)3个剂量组。应用0.12%CC l4腹腔注射致小鼠急性肝损伤模型,通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性以及小鼠肝组织中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活力,并观察肝脏组织病理学变化,对PDC190的保肝作用进行研究。结果模型组小鼠肝功能明显异常,肝组织变性、坏死严重;PDC190组能明显改善CC l4中毒小鼠肝功能,其降酶率以低、中、高剂量分别为22.1%、70.2%、78.5%;肝组织切片镜检证实,苯丙氨酸二肽类化合物190能减轻中毒小鼠肝细胞损伤程度。结论苯丙氨酸二肽类化合物190对急性肝损伤小鼠有较好的保肝作用。

苯丙氨酸二肽类化合物Y101对α-萘基异硫氰酸酯致小鼠肝损伤的保护作用

目的观察苯丙氨酸二肽类化合物Y101对α-萘异硫氰酸酯致小鼠肝损伤的保护作用,探讨其保肝作用机制。方法建立α-萘异硫氰酸酯肝损伤模型,以肝功能和肝病理改变为判断指标,对Y101的保肝作用和退黄降酶疗效进行实验。结果在改善肝功能的实验中,3个剂量结果均表明,与正常组相比,模型组小鼠血清中总胆红素、丙氨酸转氨移酶、天冬氨酸转氨酶含量明显升高。Y101低、中、高剂量组可剂量依赖性地降低α-萘异硫氰酸酯肝损伤小鼠血清中总胆红素、丙氨酸转氨移酶、天冬氨酸转氨酶的含量。在保肝作用的机制探讨中,与模型组比较,Y101各剂量组不同程度地降低α-萘异硫氰酸酯受损肝组织中的丙二醛、一氧化氮含量,同时不同程度的升高其超氧化物歧化酶、谷胱甘肽活力。结论 Y101对α-萘异硫氰酸酯致小鼠黄疸型肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化作用有关。

苯丙氨酸二肽类化合物073对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响

目的观察苯丙氨酸二肽类化合物073对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的影响。方法以2.2.15细胞为研究对象,通过细胞毒性实验确定苯丙氨酸二肽类化合物073对细胞的最大无毒浓度(TC0),在最大无毒浓度以下将药物用培养液对倍稀释成50、25、12.5μg.mL-1加入2.2.15细胞进行培养,每4d换同浓度药物培养液;分别收集第4、8天以及停药后4天的培养液上清,酶联免疫法(ELISA)测定HBsAg、HBeAg含量。结果苯丙氨酸二肽类化合物073最大无毒浓度为50μg.mL-1,在最大无毒浓度时对HBsAg有明显的抑制作用,第8天时的抑制率为59.3%,半数抑制浓度(IC50)为22.9μg.mL-1,治疗指数(TI)为3.1;但对HBeAg无明显抑制作用,第8天时的抑制率仅为25.5%。结论苯丙氨酸二肽类化合物073对2.2.15细胞HBsAg有显著的抑制作用。

苯丙氨酸二肽类化合物Y101对正常小鼠的免疫调节作用

目的探讨苯丙氨酸二肽类化合物Y101对正常小鼠的免疫调节作用。方法利用免疫学相关技术对Balb/C小鼠对照组、苯丙氨酸二肽类化合物Y101低、高(25、100 mg/kg)剂量组的碳粒廓清指标进行测定,并对昆明小鼠Y101低、中、高(25、50、100 mg/kg)剂量组的血清溶血素水平及脏器指数进行测定。结果与空白对照组小鼠比较,高剂量组吞噬系数明显升高;与模型组相比,高、中剂量给药组溶血值、脾指数、胸腺指数均显著升高。结论苯丙氨酸二肽类化合物Y101具有促进正常小鼠非特异性免疫和体液免疫功能的作用。

溶剂挥发诱导苯丙氨酸二肽自组装结构的电化学生物传感研究

将乙腈诱导苯丙氨酸二肽自组装生成的蒲公英状微晶聚集体修饰于玻碳电极上作为酶载体,采用戊二醛交联固定辣根过氧化物酶(HRP),Nafion溶液包埋保护HRP,制备过氧化氢生物传感器。该传感器对H2O2表现出良好的催化还原特性,其响应线性范围为5.0×10-7～6.0×10-4mol/L,检出限为2.5×10-7mol/L(S/N=3)。米氏常数为0.83 mmol/L,表明所固定的酶具有较高的生物活性,且与过氧化氢有较强的亲和能力。这种采用寡肽自组装产物修饰电极的方法也可为制备其他酶传感器提供借鉴。

L-苯丙氨酸二肽衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的:探讨L-苯丙氨酸二肽衍生物的合成及其抗肿瘤活性。方法:以L-酪氨酸或L-苯丙氨酸为原料,依次酰化反应、缩合反应、亲核取代及烷基化等反应合成得到苯丙氨酸二肽衍生物,并用噻唑蓝(MTT)法测定其对人前列腺癌细胞(PC3)、人慢性髓原白血病细胞(K562)、人红白细胞白血病细胞(HEL)3类肿瘤细胞株的抗肿瘤活性。结果:共合成了3a^3h共8个未见文献报道的苯丙氨酸二肽衍生物,MTT结果显示,部分衍生物对K562细胞株具有一定抑制作用,衍生物3b,3e,3f对PC3和K562有较好的抑制作用。结论:合成了8个新的苯丙氨酸二肽衍生物,其对K562及PC3肿瘤细胞株具有一定的抑制作用。

二苯丙氨酸二肽组装体电化学生物传感应用

二苯丙氨酸二肽因其结构简单,可自组装形成生物相容性良好、形状各异的微纳结构,已成为构筑生物功能材料的重要基元之一。本课题组近年来围绕二苯丙氨酸二肽组装体的功能化及其在电化学生物传感领域的应用开展了系列工作。基于此,本文总结了这些短肽组装功能材料在电化学酶传感、免疫传感、microRNA传感、细胞传感和电致化学发光领域的应用进展,展望了今后可能的发展方向。

苯丙氨酸二肽类分子自组装:分子设计、结构调控与材料应用

近年来,苯丙氨酸二肽类分子的自组装研究受到了广泛关注,已成为超分子化学、生物材料科学研究的前沿领域之一。苯丙氨酸二肽类纳米组装体因具有结构多样、易功能化以及良好的生物相容性等优点,在纳米制造、组织修复等方面展示出巨大的应用潜力。本文从分子设计、组装结构调控与材料应用三个层次系统综述了苯丙氨酸二肽类分子自组装的研究进展。首先总结了苯丙氨酸二肽类分子的修饰改性,包括乙酰基、芳香环、氨基酸、短肽等基团。然后,重点介绍了苯丙氨酸二肽类分子自组装的调控策略和方法,如溶剂、界面、气相、多组分共组装和酶催化组装。最后,介绍了苯丙氨酸二肽类自组装材料在纳米材料合成、传感检测、药物传递及组织修复等方面的应用现状,并分析了该领域今后的发展方向。

苯丙氨酸二肽类化合物073对鸭乙型肝炎病毒DNA的抑制作用

目的观察苯丙氨酸二肽类化合物073对雏鸭乙型肝炎病毒DHBV-DNA的抑制效果。方法90只感染DHBV的北京雏鸭,随机分为5组:对照组,苯丙氨酸二肽类化合物073低、中、高剂量组(0.025g·kg-1、0.05g·kg-1和0.1g·kg-1)和拉米夫定组(0.05g·kg-1)。于给药前、给药d7、d14及停药后d3,各组雏鸭腿静脉取血,分离血清,样品点膜,标记DHBV-DNA探针,血清斑点杂交,放射自显影膜片斑点检测。以杂交斑点吸光度值进行自身和组间比较,并作鸭肝组织病理检查评价。结果苯丙氨酸二肽类化合物073低、中、高剂量组能明显降低鸭血清DHBV-DNA水平,给药d7、d14及停药后d3的抑制率与对照组比较,均有非常显著差异(P<0.01)。肝组织病理检查发现对照组鸭肝细胞的变性坏死较重,而苯丙氨酸二肽类化合物073中、高剂量组则较轻。结论苯丙氨酸二肽类化合物073对DHBV-DNA有明显的抑制作用,而且有保护肝细胞的作用。

苯丙氨酸二肽类化合物Y101对CCl4诱导大鼠慢性肝损伤的保护作用

目的:观察苯丙氨酸二肽类化合物Y101对CC l4诱导大鼠慢性肝损伤的保肝作用,探讨其作用机制。方法:CC l4加苯巴比妥诱导大鼠慢性肝损伤,实验分正常组、模型组、Y101低、中、高剂量组(17.5,35,70 m.gkg-1),阳性对照组(鳖甲软肝片,540 m.gkg-1),分别进行防治和给药,7周疗程结束后处死大鼠,检测其血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)的活性及白蛋白(ALB),总蛋白(TP)含量。取肝脏,称重,检测肝脏中羟脯氨酸(HyP),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH)的含量;另取肝脏做病理组织学检查,取脾、胸腺,称重,将所得数据进行统计分析。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ALT,AST,ALP活性,肝内HyP,MDA,NO含量及胸腺重量显著升高(P<0.01),血清中ALB,TP含量,肝内SOD,GSH水平及肝脾重量明显降低(P<0.01)。低、中、高剂量Y101对慢性肝损伤大鼠上述指标均有不同程度的改变,且呈良好的剂量关系。给予Y101治疗后,中、高剂量组的肝组织病理变化均明显轻于模型组。结论:Y101对CC l4所致慢性肝损伤具有较好的防治作用,保肝降酶效果明显,其机制可能与抑制HyP增多,降低MDA,NO和升高SOD,GSH有关。

苯丙氨酸二肽类化合物Y101对刀豆蛋白A致小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的:观察苯丙氨酸二肽类化合物Y101(简称Y101)对刀豆蛋白A(CnoA)致小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将昆明种小鼠随机分为生理盐水组、CnoA模型组、Y101低、中、高(25,50,100 mg.kg-1)剂量组和联苯双酯组(LB,150 mg.kg-1)。除生理盐水组外,CnoA模型组和各给药组均于d 5和d 7给药1 h后尾静脉注射20 mg.kg-1 CnoA溶液使之中毒(按0.1 mL/10 g体重)。末次中毒后禁食不禁水,8 h后眼球取血,并迅速取肝脏备检。检测其血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量。取肝脏,称重,检测肝脏中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)的含量;另取肝脏做病理组织学检查。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST活性,肝内MDA、NO含量及肝脾指数显著升高(P<0.01),肝内SOD、GSH水平及胸腺指数明显降低(P<0.01)。低、中、高剂量Y101对肝损伤大鼠上述指标均有不同程度的改变,且呈良好的剂量关系。给予Y101治疗后,中、高剂量组的肝组织病理变化均明显轻于模型组。结论:Y101对CnoA致小鼠免疫性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关。

L-苯丙氨酸二肽衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的探索苯丙氨酸二肽的合成及对肿瘤细胞的抑制作用。方法以L-苯丙氨酸、4-硝基-L-苯丙氨酸或L-酪氨酸为原料经酰化、缩合、亲核取代等反应,设计合成苯丙氨酸二肽衍生物,并用噻唑蓝(MTT)法评价了目标化合物对5种肿瘤细胞株的生长抑制活性。结果合成了17个目标化合物,体外活性显示,部分化合物对白血病细胞株K562、HEL具有一定的抑制作用,衍生物3f、3q对K562细胞株及前列腺癌细胞株PC3有较好的抑制作用。结论苯丙氨酸二肽衍生物对抑制白血病及前列腺肿瘤细胞具有较好的抑制作用,具有进一步研究的价值。

含有四苯乙烯与苯丙氨酸二肽的凝胶因子:凝胶形成与荧光可逆调控

设计合成了含有四苯乙烯和苯丙氨酸二肽的凝胶因子1,在溶于水和有机溶剂的混合溶液时不显示荧光,但形成凝胶后荧光显著增强,且其荧光可以通过"凝胶-溶液"的可逆相转变进行调控.利用荧光光谱、扫描电子显微镜、激光扫描共聚焦显微镜及X射线衍射等方式,研究了凝胶的结构和性质.

二苯丙氨酸二肽微纳米结构的可控组装及应用

近年来,生物组装单元构筑微纳米结构的组装体在生物纳米技术等领域得到了广泛的研究。不同形貌的微纳米组装体可以通过生物分子的自组装这样快速、简便的方法获得。在众多肽基构筑基元中,二苯丙氨酸二肽及其衍生物作为一种生物活性的肽,具有生物兼容性好、容易化学修饰/生物功能化、制备简单等特点,是构筑微纳米结构材料时重要的生物基元之一。通过可控的方法组装,可以得到基于二苯丙氨酸及其衍生物的不同结构的组装体,他们在光学、机械工程、电化学传感检测等方面也具有广阔的应用前景。研究证明通过改变组装条件以及引入外源小分子等方法可以实现调控短肽的分子组装。本文综述了二苯丙氨酸二肽微纳米组装体的可控组装及他们在生物医学、生物传感、光电材料、光波导和催化等方面的应用。

固相合成法制备组氨酸-苯丙二肽分子及其自组装研究

本文以组装性能良好的苯丙氨酸二肽(FF)为母体分子,用组氨酸对其进行化学修饰,通过多肽固相合成法合成了组氨酸-苯丙二肽(HisFF)凝胶因子。合成的HisFF分子通过质谱、核磁氢谱和液相色谱等确定其精确结构和纯度。通过透射电镜和扫描电镜观察HisFF聚集体的形貌结构。HisFF分子在甲苯、氯仿和乙酸乙酯溶剂中形成的凝胶的强度不同,透射电镜实验结果表明纤维强度和聚集形态也影响其凝胶的强度。通过不同组装方法,HisFF可以在多种溶剂中组装成各种各样的纳米结构。例如,HisFF在丙酮、甲醇和乙酸乙酯溶剂中可组装成纳米颗粒、纳米管和螺旋状纳米纤维;HisFF先经六氟异丙醇溶解再通过溶剂稀释后,可得到不同直径的纳米纤维。