天冬氨酸氨基转移酶与血小板比值指数与纤维化-4指数对肝癌切除术后患者预后的预测价值

目的探讨肝硬化血液生化指标天冬氨酸氨基转移酶与血小板比值指数(APRI)、纤维化-4指数(FIB-4)对肝癌切除术后患者预后的预测价值。方法回顾性收集2005年2月至2017年7月在复旦大学附属中山医院行肝癌根治性切除300例患者的临床病理资料、肝癌复发和生存情况,分析APRI、FIB-4与肝癌患者术后复发、生存的关系,应用ROC曲线评价APRI、FIB-4对肝癌切除术后患者预后的预测价值。结果300例患者的中位随访时间为61个月。单因素Cox回归分析显示,APRI、FIB-4、血管侵犯是影响肝癌患者术后无复发生存期(DFS)、总生存期(OS)的危险因素;多因素Cox回归分析显示,血管侵犯是影响肝癌患者术后DFS(HR=1.518,95%CI 1.024~2.252,P=0.038)、OS(HR=2.301,95%CI 1.270~4.167,P=0.006)的独立危险因素。时间依赖ROC(time-ROC)结果显示,APRI、FIB-4预测术后1年、3年和5年DFS的曲线下面积(AUC)为0.555~0.596,预测术后1年、3年和5年OS的AUC为0.600~0.679。结论基于血液生化检测的肝硬化指标APRI与FIB-4对肝癌患者术后预后的预测价值有限。

苯丙氨酸解氨酶合成L-2-氯苯丙氨酸的研究

L-2-氯苯丙氨酸要求旋光对映体过量(ee)≥98%,导致使用化学拆分法合成L-2-氯苯丙氨酸的收率不足50%。为提高收率,文章采用具有立体专一性的苯丙氨酸解氨酶(PAL),催化邻氯肉桂酸与氨合成L-2-氯苯丙氨酸,旋光对映体过量(ee)>99%。通过考察不同形态PAL酶的稳定性,研究得出全细胞冻融法制作的PAL酶稳定性较好,结合氮气保护,反应80 h依然能保留62%的酶活。同时,优化PAL酶催化反应的pH、温度、酶用量,确定最佳条件后,结合分段补料的方式进行酶催化反应,最终使L-2-氯苯丙氨酸的累积量达到了68.5 g/L,转化率达到了97.8%。该技术合成L-2-氯苯丙氨酸的产量和收率较高,有效降低了成本,提升了L-2-氯苯丙氨酸的市场价值。

1-甲基环丙烯结合苯丙氨酸处理对桃花色苷合成的影响

为探究采后1-甲基环丙烯(1-methylcyclopropene,1-MCP)结合苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)处理对桃果实外观色泽的影响,本实验以套袋桃果实为材料,采用清水(Control)、Phe、1-MCP、Phe+1-MCP 4?种方式进行处理,研究不同处理后贮藏期间桃果实表型、果皮色差、花色苷含量、花色苷和乙烯代谢相关基因表达的规律。结果表明:与Control组相比,单独Phe和1-MCP处理均可促进花色苷含量的增加,而Phe+1-MCP处理可更有效地促进花色苷的合成;贮藏第6天时,Phe+1-MCP处理组桃果皮的花色苷含量为76.71 mg/kg,分别是Control、Phe组和1-MCP组的7.29、3.36倍和1.33倍;Phe+1-MCP处理可有效提升桃果皮花色苷合成相关基因(PAL、CHS、CHI、F3H、DFR、ANS、UFGT、MYB10.1、bHLH-3和WD40-1)的表达量,并降低乙烯合成和信号转导相关基因(ACS、EIN4和EIL)的表达量。本研究结果不但进一步证实了1-MCP处理可有效促进套袋桃果皮花色苷的合成,且发现Phe结合1-MCP处理对花色苷的合成具有协同作用,可为1-MCP结合Phe处理在桃采后色泽调控中的应用提供理论依据。

N-9,10-蒽醌-2-甲酰基苯丙氨酸治疗大鼠痛风性关节炎的作用及机制

目的探究N-9,10-蒽醌-2-甲酰基苯丙氨酸(NAY)对尿酸钠(MSU)所致痛风性关节炎(GA)大鼠的作用及机制。方法将雄性SD大鼠随机分为7组,每组8只,即正常组、模型组、NAY低(20 mg·kg^(-1))、中(40 mg·kg^(-1))、高剂量组(80 mg·kg^(-1))、秋水仙碱组(0.8 mg·kg^(-1))和别嘌呤醇组(10 mg·kg^(-1)),通过关节腔内注射MSU晶体建立大鼠急性GA模型,各组灌胃给药5 d,给药第3天造模。将原代培养的大鼠腹部巨噬细胞分成空白组、模型组、NAY组、MCC950组和联合给药组。软尺测量大鼠踝关节周长并计算大鼠关节肿胀度;检测大鼠血清尿酸(UA)、肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)含量;HE染色观察大鼠踝关节滑膜组织病理切片;检测各组血清、关节滑膜和细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的含量;并检测各组关节滑膜和细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的蛋白表达。结果动物实验发现,与模型组相比,NAY给药组在造模12、24和48 h均可不同程度改善GA大鼠踝关节肿胀度,且NAY各个剂量组均显著降低GA大鼠血清UA、CRE和BUN水平,同时显著降低GA大鼠血清中TNF-α和IL-1β水平及GA大鼠关节滑膜中炎症因子TNF-α和IL-1β水平,而NAY能显著降低GA大鼠关节滑膜中NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达,HE染色结果显示NAY可减轻GA模型大鼠踝关节滑膜组织炎性细胞浸润,改善细胞形态。细胞实验发现,NAY、MCC950和联合给药组均可显著提高MSU诱导大鼠巨噬细胞活力,降低上清液TNF-α和IL-1β的含量,并显著降低模型组NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达,但是联合给药组与MCC950组相比,上述指标没有显著性差异。结论NAY可在体内和体外有效预防MSU晶体诱导的GA,机制可能与其降尿酸和抑制NLRP3炎症小体表达有关。

4-氨基丁酸改性聚天冬氨酸聚合物的合成及其阻垢性能研究

以4-氨基丁酸(4-Aminobutyric acid)和聚琥珀酰亚胺(PSI)为原料,利用接枝共聚法制备聚天冬氨酸衍生物(PASP-GABA)。利用傅立叶变换红外光谱和核磁共振波谱对该聚合物的结构进行表征,通过静态阻垢法测定PASP-GABA的阻CaSO_(4)垢性能。研究结果表明,相较于聚天冬氨酸(PASP),PASP-GABA阻垢剂的阻垢性能得到了明显提升。当PASP-GABA用量为2 mg/L时,阻CaSO_(4)垢效率较PASP提升了71%,且具有良好的时效性。利用扫描电子显微镜(SEM)观察CaSO_(4)垢晶体形貌的变化,利用X射线衍射分析仪(XRD)、X射线光电子能谱(XPS)和量子化学计算等手段探讨其阻垢机理。

卵巢子宫内膜异位症患者血清磷脂酰胆碱、苯丙氨酰-异亮氨酸表达水平及临床价值研究

目的探讨卵巢子宫内膜异位症(ovary endometriosis,OEM)患者血清磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、苯丙氨酰-异亮氨酸(phenylalanyl-isoleucine,PheIL)表达水平及临床价值。方法选取2020年1月~2022年1月期间亳州市人民医院诊治的OEM患者163例为研究对象(OEM组),根据患者术后复发情况分为复发组(n=35)和未复发组(n=128)。以同期因卵巢良性疾病诊治的60例女性患者为对照组。应用高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)检测各组血清PC和PheIL水平。比较不同美国生殖医学会(American Society of Reproductive Medicine,ASRM)分期、痛经程度OEM患者血清PC和PheIL水平差异。单因素及多因素COX回归分析影响OEM复发的危险因素。受试者工作曲线评价血清PC,PheIL及联合检测对OEM复发的诊断价值。结果OEM组患者血清PC(34∶3)(18.01±3.66μg/ml),PheIL(64.38±7.75 ng/ml)均高于对照组(1.66±0.47μg/ml,42.66±6.50ng/ml),差异具有统计学意义(t=34.388,18.145,均P<0.05)。ASRM分期Ⅲ~Ⅳ期的OEM患者血清PC(34∶3)(21.74±3.71μg/ml),PheIL水平(71.22±7.89ng/ml)高于Ⅰ~Ⅱ期患者(14.41±3.50μg/ml,57.79±7.60ng/ml),差异具有统计学意义(t=12.979,11.069,均P<0.05)。ASRM分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.510,P<0.001),PC(34∶3)升高(OR=1.446,P<0.001),PheIL升高(OR=1.706,P<0.001)是影响OEM患者术后复发的独立危险因素,术后妊娠(OR=0.736,P<0.001)和术后用药(OR=0.749,P<0.001)是影响OEM患者术后复发的保护因素。血清PC(34∶3)和PheIL联合检测对OEM复发诊断的曲线下面积(95%CI)为0.864(0.840~0.879),大于血清PC(34∶3)和PheIL单一指标检测0.772(0.735~0.808),0.727(0.683~0.770),差异具有统计学意义(Z=4.252,5.640,均P<0.001)。结论OEM患者血清PC和PheIL水平升高,两者与ASRM分期有关,两者联合检测有助于预测OEM复发。

4-苯基丁酸对同型半胱氨酸诱导的主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的作用及机制

目的探讨内质网应激(ERS)分子伴侣4-苯基丁酸(4-PBA)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)成骨分化中的作用及相关机制。方法原代SD大鼠AVICs分离与培养,前钙化培养基(PCM)诱导钙化,为明确Hcy是否诱导AVICs钙化,先采用随机数字法将AVICs分为3组:对照(NC)组,PCM组,PCM+Hcy组;为进一步明确ERS抑制剂4-PBA是否能抑制Hcy诱导的AVICs钙化,采用随机数字法将AVICs分为4组:PCM+Hcy组,4-PBA组,PCM+4-PBA组,PCM+Hcy+4-PBA组。为明确4-PBA是否能通过促进自噬,从而缓解Hcy诱导的AVICs钙化,采用随机数字法将AVICs分别分为NC组,PCM组,PCM+Hcy组;PCM+Hcy组,PCM+Hcy+4-PBA组;PCM+Hcy+4-PBA组,PCM+Hcy+4-PBA+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。Western blot检测内质网跨膜蛋白[蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、活化转录因子6(ATF6)]、成骨因子[Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)]、自噬效应蛋白(Beclin1)的蛋白表达;茜素红染色测量钙化结节。结果在成功建立AVICs钙化模型基础上,茜素红染色显示PCM+Hcy组钙化结节形成较PCM组明显增多,PCM+Hcy组在PCM组基础上进一步上调内质网跨膜蛋白及成骨因子的表达,抑制了自噬;而4-PBA处理后则抑制了Hcy诱导的AVICs成骨分化,促进了自噬;在4-PBA基础上加入自噬抑制剂3-MA后,成骨分化抑制效应被逆转。结论Hcy能促进AVICs成骨分化,而4-PBA可通过抑制ERS,促进自噬,从而延缓Hcy诱导的AVICs成骨分化。

桥联双β-环糊精对N-[4-(1-芘基)]丁酰-D/L-苯丙氨酸的手性识别及机理研究

利用紫外-可见吸收和荧光发射光谱,结合非线性最小二乘法拟合曲线以及分子力学(MM2)模拟系统地研究了手性分子N-[4-(1-芘基)]丁酰-D/L-苯丙氨酸(PDP和PLP,总称PPs)与β-环糊精(-βCD)、2-位硒桥联双-βCD(2-SeCD)和2-位碲桥联双-βCD(2-TeCD)的包结能力大小及这3个环糊精对PPs手性识别能力的差异和识别机理.研究结果表明,PPs不能与单疏水空腔的-βCD形成很好的包结复合物,与具有较长桥联链的2-TeCD结合能力最强.2-TeCD与PDP和PLP的结合常数分别为2.33×104和6.07×103L/mol,对PPs的手性识别比达到KD/KL=3.84,高于2-SeCD(KD/KL=2.61).用MM2模拟得出了PPs与这两个双环糊精形成复合物的三维结构:PPs的绝大部分位于双环糊精两个空腔之间,但是在这两个复合物中,苯环与芘环所成的二面角不同.此外,PPs与这两个双环糊精作用时均存在明显的氢键相互作用,且2-TeCD强于2-SeCD.

大肠杆菌合成4-羟基异亮氨酸的代谢工程研究

为进一步提高大肠杆菌(Escherichia coli)合成4-羟基异亮氨酸的性能,以前期构建的重组菌株Escherichia coli IEOH-9为出发菌株进行代谢工程改造。首先,过表达解除反馈抑制作用的天冬氨酸激酶编码基因lysCC1055T以强化L-异亮氨酸代谢通量;然后,过表达吡啶核苷酸转氢酶编码基因pntAB以提高胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平;在此基础上,分别敲除丙酮酸激酶编码基因pykF和pykA以增强磷酸烯醇式丙酮酸合成草酰乙酸的代谢流;最后过表达柠檬酸合酶编码基因glt A以提高前体物α-酮戊二酸的供应。结果表明,基因lysCC1055T、pnt AB过表达菌株E. coli IEOH-10、E. coli IEOH-11的4-羟基异亮氨酸产量分别达到17.3 g/L、19.4 g/L;敲除基因pykF的效果优于pykA,基因pykF敲除菌株Escherichia coli IEOH-13的4-羟基异亮氨酸产量为21.5 g/L;过表达基因glt A菌株IEOH-14的4-羟基异亮氨酸产量增加至24.7 g/L,较出发菌株IEOH-9提高57.3%,生物量无明显差异(P>0.05)。

亮氨酸94在光驱质子泵古紫质-4中的功能

利用基因定点突变技术分别将bR/aR4(细菌视紫红质/古紫质-4)中L93/L94(亮氨酸93/亮氨酸94)突变为侧链不同的丙氨酸、苯丙氨酸和极性不同的苏氨酸,得到bR、含菌红素BI-aR4和缺失菌红素BE-aR4体系突变蛋白,采用紫外-可见光吸收光谱、闪光光解光谱技术和pH滴定等方法,对比研究L94在aR4中对视黄醛构象、光循环及质子传输的影响及其同菌红素的关系。结果表明,aR4中L94同样会通过空间位阻效应调控视黄醛键合区构象和质子通道的螺旋分布,以维持视黄醛顺-反异构平衡和再异构化过程,并且促进质子的释放,保证蛋白高效的质子泵活性。此外,L94对aR4结构和功能的影响会受到菌红素的调制,在缺失菌红素的情况下L94突变对aR4螺旋的扰动更加剧烈,导致质子供体和质子释放簇周围的氢键网络发生变化。

L-4-硝基苯丙氨酸的合成研究

L-4-硝基苯丙氨酸为合成众多药物的中间体。采用釜式反应器,以混酸(浓硫酸与浓硝酸)为硝化试剂对L-苯丙氨酸进行硝化反应,制备得到了目标产物。在浓硫酸与浓硝酸的体积比为2:1,反应温度为0℃,反应时间为3h的工艺条件下,该法制备L-4-硝基苯丙氨酸的收率达到65.2%。该法在反应过程中得到的副产物,经1H-NMR和13C-NMR鉴定了其结构,证明其为两分子间的缩合产物,据此推测了反应可能的机理。为了减少分子间的缩合反应,采用管式反应器对苯丙氨酸的硝化反应进行探索,并用正交实验法对反应条件进行了优化,结果表明,反应温度为50℃,反应时间为5min,混酸中浓硫酸与浓硝酸体积比为2:1,收率可达80.9%。与釜式反应相比,管式反应器能够有效避免分子间缩合的副反应,并能加快反应速率,提高反应效率。

NEP1-40促进高苯丙氨酸损伤大鼠神经元Nogo A表达

目的了解神经元NgR受体拮抗剂NEP1-40对高苯丙氨酸（Phe）作用下大鼠大脑皮质层神经元Nogo A蛋白表达的影响。方法原代培养胎龄16~18 d的SD大鼠皮质神经元,体外模拟高Phe（0.9 mmol/L）环境,并用不同浓度NEP1-40干预;用免疫荧光方法检测神经元轴突生长和生长锥塌陷情况,实时荧光定量PCR和Western blot检测Nogo AmRNA和蛋白表达。结果 Nogo A可以在神经元胞体和突起表达;高Phe作用12、24和48 h神经元NogoAmRNA与α微管蛋白（α-Tub）的相对表达量明显减低（P〈0.05）;高Phe作用后神经元Nogo A蛋白明显降低（P〈0.05）;NEP1-40对正常神经元无促进作用,但对高phe作用下的神经元呈浓度依赖性地促进其Nogo A的表达。结论 NEP1-40可以促进高Phe损伤时神经元Nogo A的表达增高,从而促进神经元轴突的生长。

用假单胞菌(PSEUDOMONAS SP.)E4-106生物转化苯丙酮酸生产L-苯丙氨酸研究

用从土壤中筛选的假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）Ｅ４１０６株细胞进行了转化苯丙酮酸生产Ｌ苯丙氨酸实验研究．结果表明，转氨反应最适温度３５～４０℃；该转氨酶可在ｐＨ７～１０范围内催化反应而活力变化不大；０．５％戊二醛处理细胞可降低其转氨酶活力；表面活性剂处理细胞或在反应液中加入Ｍｇ２＋能显著提高转氨反应速度；Ｌ天冬氨酸是转氨反应的最适氨基供体；底物转化率与底物浓度、氨基供体浓度有关．在此反应体系中，Ｅ４１０６菌株单位湿重细胞的转氨酶活力为１０３９Ｕ／ｇ；生成产物ＬＰｈｅ浓度为３２．２ｇ／Ｌ和５０．４ｇ／Ｌ时，苯丙酮酸摩尔转化率分别为９７．５％、８７．２％．生成产物用ＣＧＡ６８８大孔吸附树脂进行分离、纯化．目标产物经熔点、比旋光度、元素分析、红外光谱和纸层析分析，证实是ＬＰｈｅ．产物收率为８１．８％．

血清L-Arg和IL-4水平预测症状性颈动脉狭窄患者再发缺血性脑卒中的价值

目的探讨血清L-精氨酸(L-Arg)和白细胞介素(IL)4水平预测症状性颈动脉狭窄患者再发缺血性脑卒中(IS)的价值。方法选取2018年7月—2021年7月西安交通大学第一附属医院、咸阳市第一人民医院和延安大学咸阳医院症状性颈动脉狭窄患者196例。收集所有患者的临床资料,采用多普勒超声检查颈动脉狭窄程度、颈动脉斑块性状和斑块新生血管密度相关参数[基线强度、峰值强度和时间-强度曲线的曲线下面积(AUCTC)],并检测血清L-Arg和IL-4水平。对所有患者随访12个月,根据是否再发IS分为再发组(35例)和未再发组(161例)。采用Logistic回归分析评估症状性颈动脉狭窄患者再发IS的危险因素。采用Pearson相关分析评估各项指标之间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价L-Arg和IL-4水平判断症状性颈动脉狭窄患者再发IS的效能。结果再发组峰值强度、AUCTC、颈动脉狭窄率高于未再发组(P<0.001),血清L-Arg和IL-4水平均低于未再发组(P<0.05)。血清L-Arg和IL-4水平与峰值强度、AUCTC和颈动脉狭窄率均呈负相关(P<0.05)。L-Arg降低、IL-4降低、峰值强度增加、AUCTC增加、颈动脉重度狭窄、高血脂和易损斑块均是症状性颈动脉狭窄患者再发IS的独立危险因素(P<0.05)。血清L-Arg、IL-4单项检测和联合检测判断症状性颈动脉狭窄患者再发IS的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.760、0.845。根据L-Arg和IL-4的最佳临界值将所有患者分别分为降低组和未降低组。L-Arg降低组和IL-4降低组易损斑块所占比例分别高于L-Arg未降低组和IL-4未降低组(P<0.001)。结论低水平L-Arg和IL-4与症状性颈动脉狭窄患者再发IS有关,或可作为IS再发的预测指标。

4-二羟基硼苯丙氨酸(BPA)及其多羟基衍生物BPA(OH)_n(n=1,2,4)的电子结构的理论研究

使用密度泛函方法对硼中子捕获疗法药物4-二羟基硼苯丙氨酸(BPA)及其多羟基衍生物BPA(OH)和BPA(OH)2,BPA(OH)4的电子结构进行了理论计算,探讨了BPA药物作用的可能机制及其羟基衍生物具有良好水溶性的主要因素.研究结果表明,BPA的HOMO主要分布在苯环上,而BPA(OH),BPA(OH)2和BPA(OH)4的HOMO主要位于多羟基基团与BPA母体的结合部位的C,N和O原子附近,羟基衍生物的这种HOMO轨道特性、结构中极性基团数量的增多及分子极性的增大等可能是它们具有良好水溶性的主要因素.计算结果与实验结果一致.

1,2-萘醌-4-磺酸钠分光光度法测定苯丙氨酸

建立了用1,2-萘醌-4-磺酸钠测定苯丙氨酸的方法。在pH 10．0的缓冲溶液中,苯丙氨酸与1,2-萘醌-4-磺酸钠反应形成组成比为1：1的浅红色产物,其最大吸收波长λmax=474nm,表观摩尔吸光系数ε=9. 5×10^3 L /（ mol·cm）。苯丙氨酸浓度在0．15~20 mg·L^-1范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为 A=0．011＋0．0576c（mg·L^-1）,线性相关系数r=0．9995,平均回收率在99．0%以上,本法用于测定药物样品中苯丙氨酸的含量,结果满意。

胃癌患者血清同型半胱氨酸、神经元特异性烯醇化酶和糖类抗原72-4水平及与临床特征和预后的关系

目的 探究胃癌患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和糖类抗原72-4(CA72-4)水平及与临床特征和预后的关系。方法 选取117例胃癌患者及64例胃部良性疾病患者,分别作为胃癌组及良性组,比较两组患者的血清Hcy、NSE、CA72-4水平。分析胃癌患者血清Hcy、NSE、CA72-4水平与临床特征的关系,探讨血清Hcy、NSE、CA72-4单独及联合检测对胃癌的诊断价值及对预后的预测价值。结果 胃癌组患者血清Hcy、NSE和CA72-4水平均明显高于良性组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血清Hcy、NSE和CA72-4联合检测诊断胃癌的曲线下面积(AUC)大于各指标单独检测。不同分化程度、临床分期、淋巴结转移情况、浸润深度胃癌患者的血清Hcy、NSE、CA72-4水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。死亡组患者Hcy、NSE和CA72-4水平均明显高于生存组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。血清Hcy、NSE和CA72-4联合检测预测胃癌患者预后的AUC大于各指标单独检测。Logistic回归分析结果显示,Hcy≥16.61μmol/L、NSE≥60.24 ng/ml、CA72-4≥32.08 U/ml均是胃癌患者预后的危险因素(P﹤0.05)。Hcy≥16.61μmol/L、NSE≥60.24 ng/ml、CA72-4≥32.08 U/ml胃癌患者的3年生存率分别低于Hcy﹤16.61μmol/L、NSE﹤60.24 ng/ml、CA72-4﹤32.08 U/ml的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 胃癌患者血清Hcy、NSE和CA72-4水平与分化程度、临床分期等临床特征有关,且各指标联合检测对胃癌具有诊断价值,对患者预后具有预测价值。

犬尿氨酸-3-单加氧酶抑制剂GSK180对小鼠脓毒症致急性肺损伤的影响

目的探讨犬尿氨酸-3-单加氧酶（KMO）抑制剂GSK180对小鼠脓毒症引起急性肺损伤（ALI）的影响及潜在机制。方法采用盲肠结扎穿孔法（CLP）建立小鼠脓毒症ALI模型。第一批56只成年雄性小鼠随机分为四组：假手术＋溶剂组（n=10）、假手术＋GSK180组（n=10）、CLP＋溶剂组（n=18）及CLP＋GSK180组（n=18）；另外一批56只小鼠按上述方法建模后观察各组小鼠7天生死率。于术后即刻及5h腹腔分别注射GSK180（30mg／kg）或等剂量的生理盐水。假手术或CLP24h后，采用HE染色法进行肺组织学评分，取肺组织检测湿干质量比（W／D）、髓过氧化物酶（MPO）活性、TUNEL阳性细胞数、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL—10、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），并观察各组小鼠7d生存率。结果与假手术＋溶剂组比较，CLP＋溶剂组肺组织学评分、W／D、MPO、TUNEL阳性细胞数、IL-6及MI）A均显著升高（P〈0．05）；与CLP＋溶剂组比较，CLP＋GSK180组肺组织学评分、W／D、MPO、TUNEL阳性细胞数、IL-6及MDA显著降低（P〈0．05）。各组小鼠生存率、肺组织TNF—α、IL-10及SOD水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论犬尿氨酸-3-单加氧酶抑制剂GSK180可改善小鼠脓毒症所致ALl，推测与其降低脓毒症的炎性因子和氧化应激水平有关。

第4代小分子表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂研究进展

目的总结抗肿瘤药物第4代小分子表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的研究与应用进展。方法计算机检索PubMed,SCI-hub,CNKI数据库自建库起至2022年9月第4代小分子EGFR-TKIs的相关研究文献,分析各抑制剂的抗肿瘤活性、作用位点及研究情况。结果已开展临床研究的第4代小分子EGFR-TKIs包括ES-072,TQB3804,BLU-945,其中ES-072和BLU-945治疗非小细胞肺癌安全、有效,且不良反应较轻;开展临床前研究的第4代小分子EGFR-TKIs包括EAI045,JBJ-04-125-02,BI-4020,JND3229,CH7233163,AZ7608。除ES-072外,其余抑制剂的半数抑制浓度均为纳摩尔级;作用机制为T790M,C797S,L858R,19Del等位点的二重或三重突变。结论各抑制剂的作用位点明确,但应进一步加强临床研究。

MiR-28-5p靶向DOK4对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA(miR)-28-5p通过靶向酪氨酸激酶下游蛋白4(DOK4)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的调控作用。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)口腔癌数据库,分析miR-28-5p、DOK4与口腔鳞状细胞癌临床表型的关系;转染miR-28-5p模拟物(mimics)、miR-28-5p抑制剂(inhibitor)及对照物(NC)、pcDNA3.1-DOK4及空载体(Vector)、DOK4干扰序列(siDOK4)。CCK-8法和克隆集落形成实验检测口腔鳞状细胞癌的细胞增殖能力;检测各组细胞的抗氧化能力和细胞活性氧(ROS)含量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-28-5p与DOK4的靶向关系;观察DOK4过表达对细胞增殖和口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响。结果生物信息学分析显示,相较于癌旁口腔组织,miR-28-5p在口腔鳞状细胞癌组织中表达上调,DOK4 mRNA下调(P<0.05);临床分期Ⅳ期、M 1期、G 3~G 4分级患者miR-28-5p水平高于临床分期Ⅰ~Ⅲ期、M 0期、G 1~G 2分级者(P<0.05);临床分期Ⅳ期、N 1期、G_(3)~G_(4)分级患者DOK4 mRNA水平低于临床分期Ⅰ~Ⅲ期、N 0期、G_(1)~G_(2)分级者(P<0.05);DOK4高表达组无进展生存期和总生存期均高于DOK4低表达组(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-28-5p inhibitor组miR-28-5p水平、细胞活性和集落形成数降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-28-5p mimics组DOK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与Vector组比较,DOK4过表达组细胞和移植瘤组织中DOK4 mRNA和蛋白表达升高,细胞活性、集落形成数、肿瘤体积及重量降低(P<0.05);与miR-28-5p inhibitor组比较,miR-28-5p inhibitor+siDOK4组的DOK4 mRNA和蛋白表达水平降低,细胞增殖活性、集落形成数、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH/NADP+)、谷胱甘肽/氧化性谷胱甘肽(GSH/GSSG)升高,ROS含量降低(P<0.05)。结论miR-28-5p在口腔鳞状细胞癌中表达上调,通过靶向抑制DOK4表达,降低ROS水平,促进细胞增殖。