大鼠脑缺血半暗带区外周型苯二氮卓受体的变化及黄芪甲苷的影响

目的观察大鼠脑缺血/再灌注损伤后半暗带区外周型苯二氮卓受体(peripheral-type benzodiazepine receptors,PBRs)的变化,研究不同剂量黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AST)对PBRs的影响。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、AST 10、40和100 mg.kg-1组5组。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,于缺血2 h后再灌注24 h。采用Bederson方法进行神经功能评分,采用梯度离心法提取缺血半暗带区线粒体,应用放射配基结合实验检测线粒体[3H]PK11195特异性结合活性,测定PBRs最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(Kd)。结果线粒体PK11195特异性结合活性与动物神经功能缺损评分具有明显相关性(r=0.833,P<0.01)。与模型组相比,AST 10(P<0.05)、40(P<0.01)、100(P<0.01)mg.kg-1组动物神经功能障碍评分均明显减少,AST 40 mg.kg-1组与AST 100 mg.kg-1组相比,差异无显著性(P>0.05)。与模型组相比,AST 10(P<0.05)、40(P<0.01)、100(P<0.01)mg.kg-1组半暗带区Bmax明显减少。与AST 10 mg.kg-1组相比,AST 40(P<0.05)、100(P<0.01)mg.kg-1组Bmax明显减少(P<0.01)。AST 40 mg.kg-1组和100 mg.kg-1组相比,Bmax及动物神经功能缺损评分差异均无显著性(P>0.05)。各组Kd值差异无显著性(P>0.05)。结论 AST可通过降低脑缺血/再灌注后PBRs表达起到脑保护作用。

血小板膜与脑细胞线粒体和突触体外周型苯二氮卓受体的相关性及生物学意义

目的:探讨衰老过程中脑细胞线粒体和突触体外周型苯二氮卓受体(PBRs)的动态变化以及与外周血血小板膜PBRs相关性的生物学意义。方法:实验动物分为3月龄、12月龄和24月龄3组。动物断头取血后,迅速取脑。采用梯度离心技术提取大脑皮质线粒体和海马突触体,低渗溶血法制备外周血血小板膜。应用放射配基[3H]PK11195结合实验测定PBR结合活力。结果:3组比较,大脑皮质线粒体(F=194.6)、海马突触体(F=94.2)、外周血血小板膜(F=162.2)[3H]PK11195结合活性差异均有显著性(P<0.001)。随着鼠龄增加,上述指标显著下降。外周血血小板膜[3H]PK11195结合活性与大脑皮质线粒体(r=0.894)、海马突触体(r=0.893)[3H]PK11195结合活性比较差异均具有显著性(P<0.001)。结论:大脑皮质线粒体、海马突触体PBRs水平呈增龄下降改变,外周血血小板膜[3H]PK11195结合活性能够反映脑组织该指标的变化。

黄芪对感染血吸虫小鼠脑组织外周型苯二氮卓受体表达的影响

目的探讨黄芪对感染血吸虫小鼠脑组织外周型苯二氮卓受体表达的影响。方法采用黄芪注射液腹腔注射,在小鼠感染血吸虫满8周开始治疗,疗程12周,注射生理盐水作阴性对照。应用实时监测荧光定量PCR技术,于感染满8周、12周和20周检测脑组织外周型苯二氮卓受体mRNA的表达水平。结果黄芪治疗组小鼠脑外周型苯二氮卓受体mR-NA水平在感染12周和20周时均明显低于同期对照组(P<0.01),与正常组比较无显著差异(P>0.05);黄芪治疗组治疗前、中和后脑外周型苯二氮卓受体mRNA水平比较差异无统计学意义,而对照组治疗前后差异显著。结论黄芪可降低血吸虫病小鼠脑组织外周型苯二氮卓受体mRNA表达,提示黄芪可能通过此机制对肝性脑病有一定的治疗作用。

血小板膜外周型苯二氮卓受体在初发脑梗死后抑郁中的作用

目的:观察卒中后抑郁(PSD)患者血小板膜外周型苯二氮卓受体(PBRs)的变化,探讨PBRs在PSD中的作用。方法:卒中后抑郁组为初发脑梗死后PSD患者43例、脑梗死组为初发脑梗死患者59例、对照组为健康献血者46名。采用Hamilton抑郁量表(HAMD)评定患者抑郁程度。提取外周血血小板膜,应用放射性配基[3H]PK11195结合实验测定PBRs特异结合活性。结果:[3H]PK11195结合活性3组之间有显著差异(P<0.01)。与对照组[(298.2±25.1)pmol/(g protein)]比较,脑梗死组[3H]PK11195结合活性[(1 410.8±41.4)pmol/(g protein)]显著升高(P<0.01)。与脑梗死组比较,PSD组[3H]PK11195结合活性[(361.7±30.6)pmol/g protein]显著降低(P<0.01)。PSD组男性、女性患者之间比较,[3H]PK11195结合活性差异不显著。PSD组[3H]PK11195结合活性与患者病程无显著相关性(r=0.27,P>0.05),与HAMD评分呈显著负相关(r=-0.44,P<0.01)。结论:PSD患者血小板膜PBRs结合活性下降,PBRs影响抑郁程度。

外周型苯二氮卓受体转运蛋白与小胶质细胞

在中枢神经系统中,外周型苯二氮卓受体转运蛋白(TSPO)主要分布在小胶质细胞线粒体外膜。最近研究表明,TSPO在静息小胶质细胞中的表达很低,而在激活的小胶质细胞中却呈现高表达,这使TSPO成为反映小胶质细胞病理生理学改变的一种敏感而特异的定量指标。深入研究TSPO在小胶质细胞活化中的作用,有可能为调节小胶质细胞活化状态和体外显像判断小胶质细胞状态的靶点。

感染血吸虫小鼠端脑外周型苯二氮卓受体表达的观察

目的探讨感染血吸虫小鼠不同时期端脑外周型苯二氮卓受体(PBR)的表达水平。方法应用实时监测荧光定量PCR技术,于感染8、12、20周时检测小鼠端脑PBRmRNA的表达水平。结果在8、12、20周各时期的感染组小鼠较同期正常组小鼠的端脑组织PBR表达量明显增加;感染组小鼠随着感染时间的延长,脑组织PBRmRNA的表达量逐渐增加,感染8、12、20周脑组织PBRmRNA的表达量差异有显著性(P<0.01),而不同时期正常组脑组织PBRmRNA的表达差异无显著性。结论感染血吸虫小鼠在血吸虫肝纤维化过程中,端脑组织PBR表达水平显著增加。

外周苯二氮卓受体PET显像剂^(11)C-PK 11195的合成

目的研究外周苯二氮卓受体PET显像剂N-[11C]甲基-N-(1-甲基丙基)-1-(2-氯苯基)异喹啉-3-氨甲酰(11C-PK11195)在国内现有合成模块上进行自动化合成工艺,并建立11C-PK11195的质量控制方法。方法利用国产11C-CH3I合成模块生产的11C-CH3I与1-(2-氯苯基)-N-(1-甲基丙基)-异喹啉-3-氨甲酰去甲基前体在TracerLabFXF-N自动化合成模块中进行甲基化反应,利用半制备型HPLC系统进行分离纯化制备11C-PK11195,并进行放化纯度、化学纯度、稳定性检测和异常毒性检查。同时探讨了影响11C-PK11195合成的因素。结果从11C-CO2生产到11C-PK11195合成结束,总的合成时间约35min,甲基化反应时间为3～4min,平均放化产率为(33±5)%,11C-PK11195的放化纯度和化学纯度均大于99%,比活度为30～65GBq/μmol(EOS)。11C-PK11195的稳定性高,毒性低。结论利用该方法能够合成出适合临床应用的11C-PK11195,其合成程序也适合于在国内其他模块中应用。

外周苯二氮卓受体对缺氧复氧损伤心肌细胞中钙离子浓度和蛋白激酶C含量的作用

目的:研究线粒体外周型苯二氮卓受体(PBR)对缺氧复氧损伤所致大鼠心肌细胞凋亡、细胞内钙离子浓度和蛋白激酶C含量的影响。方法:采用改良的Simpson法分离培养心肌细胞,建立大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,培养融合的细胞随机分为5组:对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、PBR拮抗剂PK11195组(P组)、PBR激动剂Ro5-4864组(R组)、PK11195 +Ro5-4864组(PR组)。P、R组在缺氧前30 min于培养液中分别加入终浓度10-4mol/L PK11195和Ro5-4864 ,PR组在缺氧前30 min加入以上浓度的两种药物共同孵育,然后再进行缺氧复氧。结果:R组细胞凋亡率(9 .4±0 .6) %与HR组(26 .6±2 .7) %比较有统计学意义(P<0 .05) ,PR组细胞凋亡(27 .4±3 .1) %与R组比较有统计学意义(P<0 .01) ;R组细胞内钙离子荧光强度(172±29)与HR组(207±22)比较差异有统计学意义(P<0 .01) ,PR组(222±26)与R组比较差异有统计学意义(P<0 .01) ;R组细胞蛋白激酶C表达(21±4) %与HR组(12±4) %比较有统计学意义(P<0 .01) ,PR组(11±4) %与R组比较有统计学意义(P<0 .01)。结论:PBR激活明显抑制缺氧复氧所致的心肌细胞凋亡,该作用是通过抑制细胞内钙离子浓度增加和激活蛋白激酶C信号转导通路实现的。

外周苯二氮卓受体示踪剂^(18)F-SAN的合成

目的:根据先导化合物外周苯二氮卓受体激动剂N-(2,5-二甲氧苄基)-N-(5-氟-2-苯氧苯基)丙酰胺,合成18F标记的N-(2,5-二甲氧苄基)-3-氟-N-(5-氟-2-苯氧苯基)丙酰胺(18F-SAN)化合物。方法:18F离子与前体3-溴-N-(2,5-二甲氧苄基)-N-(5-氟-2-苯氧苯基)丙酰胺进行亲核取代反应,标记产物采用半制备HPLC进行分离纯化。结果:初步结果显示,18F-SAN的放化纯度大于95%,放化产率为50%左右,全部合成时间约为60 m in。TLC检测18F-SAN的Rf值为0.4~0.5。HPLC检测18F-SAN的tR值为6.24 m in。

外周型苯二氮卓受体对海人酸点燃大鼠癫痫敏感性的影响

目的:探讨外周型苯二氮卓受体对海人酸点燃大鼠癫痫敏感性的影响。方法:大鼠随机分为海人酸组和对照组,海人酸组动物注射惊厥剂量海人酸(8mg.kg-1)建立化学点燃模型。注射7d后再注射阈下剂量海人酸(4mg.kg-1),将癫痫敏感性形成的动物作为癫痫敏感性形成组,未形成的动物作为癫痫敏感性未形成组。对照组分别经皮下注射阈下剂量的海人酸及生理盐水作为单独阈下剂量组和空白对照组。观察120min内动物癫痫发作情况,然后动物断头取脑,采用梯度离心技术制备大脑皮质线粒体,利用放射性配基结合实验测定外周型苯二氮卓受体特异结合量。结果:癫痫敏感性形成组大脑皮质线粒体外周型苯二氮卓受体水平显著高于其他3组(P<0.001)。癫痫敏感性形成组大脑皮质线粒体外周型苯二氮卓受体特异结合量与注射阈下剂量海人酸后动物湿狗样抖动次数、癫痫发作潜伏期、癫痫发作最大强度均具有显著相关性(P<0.001)。结论:大脑皮质线粒体外周型苯二氮卓受体水平与海人酸点燃大鼠癫痫敏感性有关。

外周型苯二氮卓受体在大鼠肝星状细胞上的表达

目的:探讨外周型苯二氮卓受体(PBR)在大鼠肝星状细胞(HSC)上的表达。方法:采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法来分离培养大鼠HSC;应用实时监测荧光定量PCR技术(RT-PCR),于造模第4、6、8周时检测大鼠HSC PBR mRNA的水平。结果:在第4、6、8周时模型组大鼠较同期正常组大鼠的HSC PBRmRNA的表达量明显增加(P<0.01);模型组大鼠随着造模时间的延长,HSC PBR mRNA的表达量逐渐增加,差异有显著性意义(P<0.01或P<0.01);而不同时期正常组大鼠HSC PBR mRNA的表达差异无显著性意义。结论:肝纤维化过程中,HSC PBR mRNA的表达水平显著增加。

感染血吸虫小鼠肝组织外周型苯二氮卓受体的表达

目的 研究感染血吸虫小鼠不同时期肝组织外周型苯二氮卓受体mRNA的变化。方法 采用BALB／C系雄性小鼠感染血吸虫尾蚴，分别于感染后wk8、wkl2和wk20三次平均剖杀小鼠，取肝脏标本，应用实时监测荧光定量PCR技术，检测外周型苯二氮卓受体mRNA表达水平，检测结果用PCR扩增样品数量达到设定检测阅值所需循环次数(CT值)表示，CT值与样品含量成反比。结果 在感染后wk8、wkl2和wk20时，感染组小鼠CT值较正常组小鼠明显减少(wk8：28．07±1．92比30．28±1．28，P<0．05；wk12：25．27±1．50比30．41±1．42，P<0．01；wk20：23．65±1．65比29．70±2．91，P<0．01)，且随感染时间延长而减少。结论 血吸虫病过程中肝组织外周型苯二氮卓受体mRNA表达显著增加，且随感染时间延长而增加，外周型苯二氮卓受体在血吸虫病肝损伤过程中扮演了重要角色。

TSPO：外周苯二氮卓受体的新命名及其在中枢神经系统中的作用

早期外周苯二氮卓受体(PBR)是根据其在外周组织的广泛分布而命名的,用以区分中枢苯二氮卓受体(CBR)。但是近年来,随着研究的不断深入,人们发现PBR已不能反映该蛋白的分布、生理特性及其功能等,故2006年Papadopoulos等提出了18ku转位蛋白translocator protein(18ku),简称TSPO,将其作为PBR的新名称。该文将从TSPO的分子特性、定位分布、生理特性,特别是其在中枢神经系统疾病进程中所扮演的角色等方面对其研究进展做一综述。

外周苯二氮卓受体示踪剂^(131)I-CLINDE的合成和标记

本文报道CLINDE改进的合成方法及其同位素131I-标记。标记前体由5-氯-2-氨基吡啶与溴代酮酰胺缩合制得。标记产物经三烷基锡化、过氧化氢-碘脱锡化而得。产物经反向HPLC分离纯化。结果显示,标记前体总收率30.8%,标记物放化得率80%,TLC和HPLC检测放化纯度大于98%。表明该法简便易行,放化得率好,产物纯度(包括放射化学纯度)高。

补肝散含药血清对肝星状细胞的外周型苯二氮卓受体表达及凋亡的影响

目的:探讨补肝散含药血清对培养肝星状细胞(HSC)的外周型苯二氮卓受体(PBR)及凋亡的影响,并从PBR角度探讨其作用机制。方法:在不同浓度(5%、10%、20%)补肝散含药血清液的作用下,在PBR高表达期的不同时间,采用流式细胞仪测定细胞凋亡指数,同时采用放射免疫法检测PBR特异性配基[3H]PK11195结合量。结果:与不含药血清组相比较,补肝散各含药血清组细胞凋亡指数明显增加,而HSC与[3H]PK11195结合量明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论:补肝散含药血清可以促进HSC凋亡,可能通过PBR途径发挥作用。

咪唑并吡啶类外周苯二氮卓受体配体的合成新方法

目的咪唑并[1,2-a]吡啶类PBR配体新的合成方法及其同位素125I-标记。方法非放射活性的咪唑并[1,2-a]吡啶通过5-氯-2-氨基吡啶与溴代酮酯缩合后再酰胺化而得。起始溴代酮酯经付-克酰化、酯化和溴代而被制备。放射标记的125I-咪唑并[1,2-a]吡啶通过Na125I在氯胺T反应体系中经碘脱锡交换反应被制备。由反向HPLC纯化得125I-咪唑并[1,2-a]吡啶。结果非放射活性的咪唑并[1,2-a]吡啶6步合成总收率25.2%,放化得率68%,放化纯度大于98%。结论咪唑并[1,2-a]吡啶类PBR配体的合成和标记方法简便,且回收率高。

苯二氮卓受体对放射性脑损伤大鼠氧自由基的影响

目的观察苯二氮卓受体对放射性脑损伤大鼠氧自由基的影响。方法210只SD大鼠随机分为7组,每组30只,D-R组:照射前30min腹腔注射地西泮5mg/kg;F-R组:照射前30min腹腔注射氟马西尼0.025mg/kg;DF-R组:照射前30min腹腔注射地西泮5mg/kg,照射前15min腹腔注射氟马西尼0.025mg/kg;N-R组:照射前未用药;D-SR组:假照射前30min腹腔注射地西泮5mg/kg;F-SR组:假照射前30min腹腔注射氟马西尼0.025mg/kg;N-SR组:假照射前未用药。所有照射组建立清醒状态下大鼠放射性脑损伤模型。各组分别于照射(或假照射)前即刻、照射后6h、1d、1周和1个月时测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化。结果N-R、F-R、DF-R组照射后脑组织SOD活力较D-R组减弱,MDA含量较D-R组增加(P<0.05)。结论在照射前使用地西泮可增强脑组织SOD活力,降低脑组织中MDA含量,氟马西尼在用药后可以拮抗地西泮的作用,苯二氮卓受体对放射性脑损伤大鼠的自由基损伤有一定的防护作用。

氟西汀对卒中后抑郁患者外周型苯二氮卓受体及神经功能缺损影响研究

目的观察氟西汀对卒中后抑郁(PSD)患者外周血外周型苯二氮卓受体(PBRs)及神经功能的影响。方法收集2005年12月至2008年3月山东大学附属省立医院神经内科收治的首次发病的脑梗死后抑郁患者86例,将其随机分为氟西汀组和对照组。氟西汀组给予氟西汀20 mg/d,连续服药4周;对照组给予茴拉西坦胶囊100 mg/d。采用改良的斯堪的那维亚神经功能缺损评分量表(SSS)评价神经功能。提取外周血血小板膜,应用放射配基[3H]PK11195结合试验测定PBRs特异结合活性。结果治疗前两组组间[3H]PK11195结合活性差异无统计学意义(t=1.089,P=0.279)。治疗后氟西汀组PBRs结合活性显著高于对照组(t=14.797,P<0.001),Hamilton抑郁量表(HAMD)评分(t=6.369,P<0.001)、SSS评分(t=2.897,P=0.005)显著低于对照组。患者血小板膜PBRs结合活性与HAMD评分(r=-0.303,P=0.006)及SSS评分均具有显著相关性(r=-0.255,P=0.019)。结论氟西汀能够增加PSD患者血小板膜PBRs结合活性,促进神经功能恢复。

脱氢表雄酮对衰老大鼠线粒体外周型苯二氮艹卓受体的影响

目的:观察脱氢表雄酮(DHEA)对衰老模型大鼠大脑皮质线粒体外周型苯二氮艹卓受体(PBRs)的影响,探讨PBRs在脑老化中的作用。方法:Sprague-Dawley大鼠随机分为溶媒对照组和药物治疗组。实验动物连续注射D-半乳糖(100 mg.kg-1,qd,共56次)制备衰老动物模型。溶媒对照组、药物治疗组动物分别同时注射二甲基亚砜或DHEA,隔日一次,共28次。利用Morris水迷宫测试学习记忆能力后动物断头,采用梯度离心法制备大脑皮质线粒体,应用放射配基结合试验测定PBRs最大结合容量(Bmax)和平衡解离常数(KD)。结果:与溶媒对照组比较,药物治疗组Bmax显著升高,KD无显著变化,动物学习记忆能力显著改善。大脑皮质线粒体PBRs特异结合活性与迷宫试验动物逃避潜伏期、平台象限游泳距离和时间显著相关(P<0.05)。结论:大脑皮质线粒体PBRs表达量与衰老动物学习记忆功能密切相关。DHEA可以增加脑组织PBRs的表达量,并改善衰老动物智能状态。

苯二氮[艹卓]受体与异氟烷遗忘作用关系的实验研究

目的 通过观察氟马西尼对异氟烷遗忘作用的影响,揭示异氟烷遗忘机制与苯二氮[艹卓]受体的关系.方法 将48只小鼠随机分成6组,采用避暗实验观察腹腔注射不同剂量氟马西尼（0.5、1.0 mg/kg）对异氟烷处理小鼠步入潜伏期和错误次数的影响.结果 与生理盐水组相比,氟马西尼单用组小鼠的步入潜伏期和错误次数均无明显差异（P〉0.05）;异氟烷单用或合用组步入潜伏期明显缩短（P〈0.05）,错误次数明显增加（P〈0.05 或P〈0.01）.与异氟烷组相比,两药合用组步入潜伏期和错误次数均无统计学差异（P〉0.05）.结论 氟马西尼对异氟烷遗忘作用无明显影响,提示异氟烷遗忘作用与苯二氮[艹卓]受体关系不大.