反相高效液相色谱法快速同时测定苯代谢物的方法

建立了用反相高效液相色谱法快速同时测定尿中苯的 3种代谢物 (包括粘糠酸、氢醌和儿茶酚 )的方法。采用反相C18分析柱 (4 .6× 2 5 0mm) ,流动相为甲酸 :四氢呋喃 :水 =14:17:96 9,流速为 1.8ml/min ,检测波长为 2 70nm。该方法的相对标准偏差为 2 .4%～ 4.6 %之间 ,加标回收率为 81%～ 93%之间。本法经过样品预处理后 ,适于现场尿中苯代谢物的测定。

新型弱阴离子交换色谱柱-高效液相色谱法同时测定苯代谢产物的方法

目的:建立了苯及其同系物体内代谢产物粘糠酸、苯乙醛酸、马尿酸的弱阴离子交换-HPLC测定方法,并进行了方法学研究。方法:采用Acclaim Mixed-Mode WAX-1(150 mm×2.1 mm,5μm)弱阴离子交换色谱柱,以甲醇-50 mmol/L磷酸氢二钾(18∶82)为基础流动相,以波长时间程序分别在254 nm下检测粘糠酸、苯乙醛酸,224nm下检测马尿酸,探讨了弱阴离子交换色谱柱分离粘糠酸、苯乙醛酸及马尿酸的影响因素。结果:流动相的pH值、离子强度、有机相比例对上述三种代谢物产生的分离产生明显影响。结论:在确定的色谱条件下,从分离度、对称性、重复性、线性4个方面来评价,弱阴离子交换色谱柱分析酸性可离子化化合物要优于常规C18色谱柱。

HIF-1α高表达对苯代谢物诱导K562细胞毒性的影响

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)高表达对苯代谢物1,4-苯醌、氢醌、苯酚诱导K562细胞毒性的影响。方法:用不同浓度的1,4-苯醌(0、10、20、40、80μmol/L)、氢醌(0、10、20、40、80μmol/L)、苯酚(0、1、1.5、2、2.5、5 mmol/L)分别染毒对照组K562细胞及高表达HIF-1α的K562细胞24 h,MTT法检测细胞增殖情况,PI/FITC Annxein V双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,碘化丙啶结合流式细胞术检测细胞周期。结果:MTT实验结果显示,1,4-苯醌染毒后,两株细胞均出现增殖率下降且呈剂量效应关系,1,4-苯醌浓度为80μmol/L时,高表达HIF-1α的K562细胞增殖率高于对照组K562细胞(P<0.05)。氢醌和苯酚在较高浓度染毒后,对照组K562细胞亦出现增殖抑制,而高表达HIF-1α的K562细胞增殖无明显抑制。流式细胞术结果显示,1,4-苯醌染毒后,两株细胞的细胞凋亡率增加且呈剂量效应关系。20μmol/L浓度1,4-苯醌染毒时,高表达HIF-1α的K562细胞较对照组K562细胞凋亡减弱(P<0.05)。氢醌和苯酚染毒后,两株细胞的凋亡率与未染毒组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),高表达HIF-1α的K562细胞的凋亡率较对照组K562细胞亦无显著差异。细胞周期检测结果显示,3种苯代谢物均可引起K562细胞周期阻滞在G0/G1期或S期。结论:3种苯的代谢物中,1,4-苯醌对K562细胞的毒性大于氢醌和苯酚,HIF-1α高表达可降低苯代谢物引起的细胞毒性,其作用的发挥可能是通过调节细胞增殖及凋亡而实现。

6’-O-咖啡酰熊果苷处理通过激活苯丙烷代谢提高采后蓝莓果实对灰霉病的抗性

为研究6’-O-咖啡酰熊果苷处理对采后蓝莓果实灰霉病的防控作用,以蓝莓果实为研究材料,蒸馏水处理为对照,采用2.5 mmol/L 6’-O-咖啡酰熊果苷浸泡处理蓝莓果实,分析6’-O-咖啡酰熊果苷处理后对蓝莓灰霉病的防控效果及其对果实苯丙烷代谢的影响。结果表明,与对照组比,6’-O-咖啡酰熊果苷处理显著降低了采后蓝莓果实灰霉病的发病率,抑制了病斑的扩张;与此同时,与对照组比,还提高了果实苯丙氨酸解氨酶、4-香豆酸辅酶A连接酶、肉桂酸-4-羟基化酶、肉桂醇脱氢酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性以及总酚、类黄酮和木质素的含量,对蓝莓果实的贮藏品质也无不良影响。综上,6’-O-咖啡酰熊果苷处理通过激活采后蓝莓果实苯丙烷代谢相关酶活性,促进抗性物质的合成积累,从而增强蓝莓果实对灰霉病的抗性。

解淀粉芽孢杆菌GSBa-1对佛手香橼多酚合成和苯丙烷代谢的影响

为探讨解淀粉芽孢杆菌GSBa-1(Bacillus amyloliquefaciens,GSBa-1)对在常温贮藏环境条件下佛手贮藏品质、多酚合成和苯丙烷代谢的影响,采用浓度为1×10^(8)CFU/mL的解淀粉芽孢杆菌GSBa-1浸泡处理佛手香橼,在常温贮藏环境观察测定果实的总可溶性固形物、可滴定酸、乙烯释放量、呼吸强度、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力、H2O2含量、多酚含量和苯丙烷代谢途径相关酶活力指标。结果表明:解淀粉芽孢杆菌GSBa-1处理可降低佛手的乙烯释放量和呼吸强度,抑制佛手果皮的转色和软化,有效诱导果实中苯丙烷代谢途径中苯丙氨酸解氨酶和肉桂酸-4-羟化酶活性的提高,并快速促进没食子酸和咖啡酸为代表的酚酸类多酚合成,诱导橙皮苷、圣草次苷、地奥司明等黄酮、黄烷醇类多酚的后续积累,增加果实总酚和总黄酮的含量,提高果实中的DPPH自由基清除能力和H_(2)O_(2)含量,增强了果实的抗性。结论:解淀粉芽孢杆菌GSBa-1处理能够通过激活佛手中苯丙烷代谢途径,刺激多酚合成累积,从而延缓佛手的后熟衰老,提升贮藏品质。

高效液相色谱法测定尿中苯的代谢物反,反-粘糠酸

建立了高效液相色谱测定职业苯接触者尿中苯的代谢物反，反-粘糠酸（tt—MA）的方法。该方法采用C18柱进行分离，以冰乙酸-四氢呋喃-甲醇-水（体积比为1：2：10：87）为流动相，以香草酸为内标，于264nm处进行紫外检测。尿样经2mol／L盐酸酸化后用乙酸乙酯进行萃取。结果表明，所建立的标准曲线在tt—MA的质量浓度为0．10～10．00mg／L时线性关系良好（r=0．9999），加标回收率为95．1％～100．5％，日内和日间测定的相对标准偏差分别为4．0％～9．0％和6．2％～8．8％。应用该法测定职业苯接触者56人和非职业苯接触者24人尿中的tt—MA，结果显示职业苯接触者的尿中tt—MA含量明显高于非职业苯接触者，并与接触的苯的浓度呈线性相关（P〈0．01）。该方法灵敏、快速、经济、简便，可用于职业苯接触者的生物监测和毒物动力学研究。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对苯代谢物抑制K562细胞转铁蛋白受体表达的干预作用

目的观察苯代谢物对K562细胞转铁蛋白受体表达的影响以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷的干预作用。方法 K562细胞用苯代谢物处理72 h,处理期间的后48 h加入5-氮杂-2’-脱氧胞苷进行干预,然后利用荧光标记抗体结合流式细胞技术分析细胞表面转铁蛋白受体的表达,应用半定量反转录PCR技术分析细胞转铁蛋白受体mRNA的表达水平。结果苯代谢物苯酚（200-800μmol/L）、氢醌（10-40μmol/L）和1,2,4-苯三醇（5-20μmol/L）均能浓度和时间依赖性抑制转铁蛋白受体在细胞表面的表达和浓度依赖性抑制细胞内转铁蛋白受体mRNA表达;而5-氮杂-2’-脱氧胞苷可显著拮抗苯代谢物抑制转铁蛋白受体表达的作用。结论苯代谢物可抑制红系祖细胞转铁蛋白受体的表达,而DNA甲基化可能参与其中,转铁蛋白受体的表达抑制会影响细胞铁的摄入,从而影响血红素合成,继而抑制血红蛋白合成影响红系分化。

高效液相色谱-四级杆/静电场轨道肼高分辨率质谱测定禽蛋中的阿苯达唑及其代谢物残留

建立了高效液相色谱-四级杆/静电场轨道肼高分辨率质谱法测定禽蛋中阿苯达唑及其代谢物的检测方法。禽蛋样品经乙腈溶液提取、无水硫酸钠除水、正己烷脱脂净化、氮吹后,用体积比为3:7的甲醇水溶液定容并溶解残渣,充分涡旋混合后过0.45μm滤膜。采用Phenomenex C18(100 mm×4.6 mm,2.6μm)色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(体积分数)为流动相梯度洗脱。质谱采用正离子模式,扫描范围:100~1000 m/z,二级采用Target-ms/ms扫描模式,在碰撞能为30 eV和分离窗口m/z为2.0的条件下,提取响应值较高且在待测样品中无干扰的目标化合物的精确质量数,以二级子离子为定量离子,外标法定量。在所建立的色谱条件下,阿苯达唑及三种代谢物能够得到较好的分离。该方法对阿苯达唑及代谢物的检测限可达3μg/kg,定量限可达10μg/kg,在20~200 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99。通过加标验证,在三个水平下的平均回收率为75.9%~97.4%,相对标准偏差(Relative Standard Deviations,RSD)为4.3%~8.5%。该方法样品处理过程简单,回收率高、稳定性好,可以用于禽蛋中阿苯达唑及其代谢的测定,为规范禽蛋中阿苯达唑兽药的使用具有重要意义。

外源水杨酸处理对采后蓝莓果实苯丙烷代谢的影响

为了解外源水杨酸处理对采后蓝莓果实苯丙烷代谢系统的影响及其作用机制,采用0.5mmol/L和1.0mmol/L的水杨酸对蓝莓果实进行浸泡处理,然后装入聚乙烯薄膜袋后松扎口,贮藏在1℃下。贮藏期间分析测定了蓝莓果实的感官品质、呼吸速率以及参与苯丙烷代谢的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)等酶活性和木质素含量等指标。结果表明,0.5mmol/L和1.0mmol/L的外源水杨酸处理均可促进蓝莓果实苯丙烷代谢的进程,从而使苯丙烷代谢的终产物-木质素的含量增加,进而增加了果实硬度并可有效地抵御微生物的入侵,减少果实腐烂,延长保质期。

采前水杨酸处理对杏果实抗病性及苯丙烷代谢的诱导

以新疆赛买提杏为试材,在果实坐果期、膨大期、转色期及采收前48 h的4个时期,采用1.0 mmol/L水杨酸对杏果实进行喷施处理,以喷清水处理作为对照。采收后的杏果实置于4℃、90%~95%相对湿度条件下贮藏,定期统计杏果实接种链格孢(Alternaria alternata)的病斑直径和接种发病率,测定苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸羟化酶(C4H)、4-香豆酰-辅酶A连接酶(4-CL)的活性及木质素、总酚和类黄酮的含量,研究采前水杨酸处理对杏果实抗病性和苯丙烷代谢关键酶活性及代谢产物积累的影响。结果显示:采前水杨酸处理能有效降低杏果实损伤接种的病斑直径和接种发病率,显著提高杏果实PAL、C4H、4-CL的活性和木质素、总酚、类黄酮的含量。

硫色镰刀菌(Fusarium sulphureum)接种对抗病/易感品种马铃薯块茎苯丙烷代谢的影响比较

以抗病品种"青薯168"和易感品种"陇薯3号"马铃薯块茎为试材,比较2个品种马铃薯块茎、切片接种硫色镰刀菌(F.sulphureum)后苯丙烷代谢关键酶活性和相关产物积累的动态变化。结果表明,"青薯168"马铃薯块茎及其切片接种F.sulphureum后的病斑直径显著小于"陇薯3号"。2个品种马铃薯接种F.sulphureum后,在前期苯丙氨酸解氨酶(PAL)、4-香豆酰-辅酶A连接酶(4CL)活性以及总酚、类黄酮含量增加,但随着病斑的扩展,PAL、4CL活性以及总酚、类黄酮含量迅速降低并低于未接菌对照。肉桂酸-4-羟化酶(C4H)活性和木质素含量在整个培养过程中均显著低于未接菌对照。抗病品种"青薯168"接种F.sulphureum后,PAL、4CL和C4H活性以及总酚、类黄酮和木质素含量均显著高于"陇薯3号"。表明苯丙烷代谢在F.sulphureum与马铃薯块茎互作的早期发挥了积极的作用,一旦病斑开始扩展,苯丙烷代谢的抗病作用将显著降低;抗病块茎的苯丙烷代谢活性显著高于感病块茎,表明苯丙烷代谢在马铃薯块茎抗干腐病方面具有重要的作用。

硅酸钠处理对杏果实活性氧和苯丙烷代谢的影响

本实验以李杏为材料,研究了采后50mmol/L硅酸钠溶液浸泡处理对果实活性氧代谢和苯丙烷代谢的影响。结果表明:50mmol/L硅酸钠溶液浸泡处理提高了果实中O-2·的产生速率和H2O2含量,提高了超氧化物歧化酶(SOD)活性,抑制了过氧化氢酶(CAT)的活性。另外,处理还提高了果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,诱导果实中的抗性物质总酚和木质素的积累。因此,硅酸钠处理可通过调节活性氧代谢和苯丙烷代谢途径来增加对杏果实对病害的抗性。

茉莉酸甲酯处理对鲜切莴苣和甘蓝苯丙烷代谢的影响

本文以鲜切莴苣和鲜切甘蓝为实验材料,采用10μmol/L茉莉酸甲酯(以10%甲醇为溶剂)浸泡处理,研究了处理后鲜切莴苣和鲜切甘蓝苯丙烷代谢的变化。结果表明,MeJA处理可有效提高鲜切莴苣和鲜切甘蓝苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,同时,次生代谢产物如总酚、类黄酮以及木质素的含量也有所增加。由此可见,茉莉酸甲酯作为外界信号分子可诱导并激活苯丙烷代谢途径运行,合成多酚类化合物用以修复伤口,提高鲜切莴苣和甘蓝的自身修复能力与抗性。

热水和壳聚糖处理对厚皮甜瓜采后病害及苯丙烷代谢的影响

以厚皮甜瓜为试材,采用53℃热水,2%壳聚糖及2%壳聚糖结合53℃热水浸泡处理10min,研究了不同处理对T.roseum损伤接种果实病斑直径及苯丙烷代谢关键酶及其产物积累的影响。结果表明:三种处理均可抑制果实病斑直径的扩展,其中以热水和壳聚糖结合热水处理效果较好,处理后第7d时病斑直径分别低于对照47.41%和41.78%。热水和壳聚糖结合热水处理可显著诱导果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)和4-香豆酰-辅酶A连接酶(4CL)的活性。处理后第9d时的PAL活性分别高出对照3.32与2.8倍,贮存12d时4CL活性也分别高出对照32.5%和25.3%。壳聚糖结合热水处理可显著促进果实体内总酚、类黄酮和木质素的积累,处理后第15d时分别高出对照32.8%、50.76%和71.61%。热水和壳聚糖结合热水处理可通过诱导甜瓜果实的苯丙烷代谢活性来增强对T.roseum侵染的抗性。

采后BTH处理对苹果果实苯丙烷代谢和病程相关蛋白积累的增强作用

本文探讨采后苯丙噻重氮(BTH)处理对苹果果实苯丙烷代谢和病程相关蛋白产生的增强作用。以"国光"苹果为试材,采后用100mg/L BTH浸泡处理10min,测定处理对果实苯丙烷代谢相关酶活性、产物积累和病程相关蛋白产生的影响。结果表明,BTH处理显著提高了苹果果实体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、4-香豆素辅酶A连接酶(4CL)的活性,增加了总酚、类黄酮及木质素含量,同时提高了β-1,3葡聚糖酶(GLU)、几丁质酶(CHT)和过氧化物酶(POD)的活性。由此表明,采后BTH处理可通过诱导果实苯丙烷代谢和促进病程相关蛋白的产生来增强果实对采后病害的抗性。

苯丙烷代谢途径中细胞色素P450的研究

苯丙烷次生代谢途径通过合成木质素、类黄酮等多种次生物质而影响植物的许多重要性状。细胞色素P450超家族参与苯丙烷途径的至少16种关键酶反应。从蛋白特征、功能、编码基因、表达调控等角度,综述了公共苯丙烷和主要分支途径中的细胞色素P450,如肉桂酸-4-羟化酶、类黄酮-3’-羟化酶、类黄酮-3’5’-羟化酶、阿魏酸5-羟化酶等。

接种尖镰孢菌对枸杞苯丙烷代谢关键酶及产物的影响

为了阐明抗感枸杞与根腐病病原菌互作过程中苯丙烷代谢途径中关键酶和代谢产物的变化差异与抗病性的关系,以枸杞栽培品种宁杞一号（NingqiⅠ）、宁杞二号（NingqiⅡ）,国内野生种中国枸杞、宁夏枸杞,美洲引进野生种L.brevipes、L.exsertum等6种材料为参试材料,采用切根法接种强致病菌尖镰孢菌后统计死亡率,以此筛选出抗病和感病材料,并测定二者0~20d内苯丙氨酸解氨酶（PAL）、肉桂酸羟化酶（C4H）、4-香豆酰-辅酶A连接酶（4CL）等苯丙烷代谢途径关键酶以及总酚和类黄酮等代谢产物的动态变化。结果表明,6种参试材料接种枸杞根腐病强致病菌尖镰孢菌后,野生材料较栽培材料抗病性强,宁杞一号为感病材料,L.exsertum抗根腐病能力最强;抗病材料L.exsertum苯丙烷代谢关键酶苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羟化酶、4-香豆酰-辅酶A连接酶活性显著高于宁杞一号,初步确定苯丙烷代谢中的苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羟化酶、4-香豆酰-辅酶A连接酶的活性和类黄酮的含量与枸杞材料抗根腐病呈正相关。因此,苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸羟化酶、4-香豆酰-辅酶A连接酶活性和类黄酮含量,初步可以作为筛选抗枸杞尖镰孢菌根腐病的生化指标。

茉莉酸甲酯和乙烯利处理对鲜切富士苹果抗氧化酶活力和苯丙烷代谢的影响

为研究外源信号分子茉莉酸甲酯(Me JA)和乙烯(Eth)对鲜切果蔬抗氧化酶活力和苯丙烷代谢的影响,以鲜切富士苹果为实验材料,利用Me JA和乙烯利浸泡处理,在10℃下贮藏,分析贮藏期间抗氧化酶类多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)以及苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化。结果表明:与空白对照相比,Me JA和乙烯利可以显著提高鲜切富士苹果PPO和POD活性(p<0.05),降低APX活性下降速率。两种处理都可以提高PAL的活性,乙烯利对增强PAL活性效果更显著(p<0.05)。两种外源信号分子可以提高鲜切苹果的抗氧化能力及苯丙烷代谢能力,启动鲜切苹果的防御反应,提高果实抗性。

油茶芽苗砧嫁接口愈合过程中苯丙烷代谢的若干生理指标

为探讨油茶芽苗砧嫁接口和对照实生苗愈伤口的发育差异,在处理后的2-55 d对嫁接口和愈伤口间隔取样,检测苯丙烷代谢若干生理指标.结果表明:嫁接口的苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性极显著低于愈伤口;过氧化物酶(POD)活性在嫁接后的第14-35天极显著高于愈伤口;苗木重量、纤维素含量、绿原酸含量、多酚氧化酶(PPO)活性与愈伤口无显著差异;各生理指标变化的拐点数量和所处时间与愈伤口不同.相关分析表明:嫁接口的PPO活性与苗木重量,绿原酸含量与纤维素含量,绿原酸含量与苗木重量之间的相关性与愈伤口相当;绿原酸含量与PPO活性,绿原酸含量与POD活性,纤维素含量与苗木重量之间的相关性明显高于愈伤口;而PPO活性与POD活性,PPO活性与纤维素含量之间的相关性却低于愈伤口.