红曲中桔霉素的HPLC-苯基柱分离分析

为了给桔霉素的定性分析提供不同方法证据,建立了用苯基柱进行分离的高效液相色谱法。确定了合理的前处理方法及最佳色谱分离条件。用荧光检测器检测,根据标准桔霉素保留时间定性。以标准桔霉素为外标,与样品中桔霉素荧光强度响应值比较定量。对方法的准确度、精确度进行分析并对红曲中桔霉素含量进行实测。结果表明:在实验条件下,红曲中桔霉素与其他杂质能够得到良好的分离。方法的线性关系、准确度、精密度及最低检测线均能够达到目前HPLC C18柱检测方法的基本要求。

五氟苯基柱HPLC⁃PAD法测定硫酸巴龙霉素含量及有关物质

目的建立一种用于直接测定硫酸巴龙霉素含量和有关物质的高效液相色谱⁃脉冲安培电化学检测器(HPLC⁃PAD)法。方法采用Agilent Pursuit®PFP(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以体积分数2.0%三氟乙酸溶液[含0.15%(体积分数)五氟丙酸,用50%氢氧化钠溶液(质量分数)调pH值至3.5]的水溶液为流动相,积分脉冲安培电化学检测器的四电位波形测定硫酸巴龙霉素有关物质。结果五氟苯基柱比传统的十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱分离效果更优,代表性样品中分离出21个峰,有巴龙霉素Ⅱ与其同分异构体巴龙霉素Ⅰ和另外的19个有关物质;在0.49~118.30μg·mL^(-1)内巴龙霉素质量浓度与峰面积呈良好的线性关系(r>0.9993),检测限(LOD)为0.49μg·mL^(-1),定量限(LOQ)为0.99μg·mL^(-1),重复性和精密度RSD均小于2.0%。结论建立的HPLC⁃PAD方法专属性好、灵敏度高、稳定性强、耐用性好,为巴龙霉素质量控制和工艺优化研究提供了可靠的分析手段。

四-(对甲基苯基)-卟啉柱前衍生,高效液相色谱法测定食品中痕量铅、镉、汞

研究了用四-(对甲基苯基)-卟啉柱前衍生,高效液相色谱法测定食品中痕量铅、镉、汞的方法。食品样品用湿法消化后,消化液中的铅、镉、汞用四-(对甲基苯基)-卟啉(T4MPP)柱前衍生,然后用甲醇(内含0.01mol/L四氢吡咯-醋酸缓冲盐)和四氢呋喃(内含0.01mol/L四氢吡咯-醋酸缓冲盐)为流动相梯度洗脱,WatersXterraTMRP18(3.9150mm,5μm)色谱柱为固定相分离铅、镉、汞的T4MPP络合物,用二极管矩阵检测器检测,铅、镉、汞含量在0.01～3mg/L范围内与峰面积成线性关系,根据信噪比(S/N=3),方法检测限为:铅2.3μg/L、镉1.8μg/L和汞2.5μg/L,方法相对标准偏差为2.1%～3.5%,标准回收率为93%～106%,该方法用于测定食品中的铅、镉、汞,结果令人满意。

PMP柱前衍生化HPLC法测定黄秋葵多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立同时测定黄秋葵多糖中8种单糖组分的方法。采用InfinityLab Poroahell C18色谱柱为固定相,流动相为磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L,pH 6.85)-乙腈(82∶18,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温25℃,紫外检测器,波长250 nm。各单糖组分的线性范围较宽,相关系数均大于0.999,检出限为0.13～0.45 mg/kg,定量限为0.43～1.49 mg/kg,相对标准偏差小于5%,加标回收率为94.51%～106.44%。方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适用于黄秋葵多糖的单糖组分分析。同时测定从黄秋葵中顺序提取的热水浸提物(hot buffer soluble solution,HBSS)、螯合剂浸提物(chelating agent solublesolution,CHSS)和碱提物(dilute alkaline soluble solution,DASS)的单糖组成,确定其单糖组分的物质的量比。HBSS中,甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=0.1∶7.0∶0.4∶5.8∶0.9∶14.6∶1.5;CHSS中,鼠李糖∶半乳糖醛酸∶半乳糖∶阿拉伯糖=4.7∶61.8∶9.6∶5.3;DASS中,甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=9.5∶5.4∶1.3∶10.8∶2.4∶7.6。

PMP柱前衍生化HPLC法测定野生与移栽滇重楼多糖的单糖组成

目的建立同时测定滇重楼多糖中5种单糖组分的方法。方法采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱(HPLC)法测定滇重楼多糖中5种单糖组分,色谱柱为Agela MP-C18(2)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-pH 6.70磷酸盐缓冲液(19∶81,V∶V),检测波长为250 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL·min^-1。并对其测定结果进行独立样本t检验、主成分分析和聚类分析。结果滇重楼多糖最佳的水解条件为110℃,2 mol·L^-1三氟乙酸(TFA),水解6 h。基于HPLC法所建立的单糖检测方法,5种单糖成分在各自线性范围内线性关系良好(r≥0.9993),加样回收率为92.38%~99.98%。滇重楼多糖主要是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成,且野生品葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖的摩尔比为219.22∶28.23∶1.83∶1.44∶1.00。而移栽品的摩尔比为243.29∶17.85∶3.41∶1.00∶2.02。结论该试验所建立的方法操作简便、重复性和准确度高,适用于滇重楼的单糖成分的含量测定。不同产地的野生和移栽滇重楼在单糖组成方面无明显差异,初步认为移栽滇重楼可代替野生滇重楼入药。

反相高效液相色谱法测定保健品中反式维生素K1的含量

建立了反相高效液相色谱法测定保健品中维生素K1反式构体含量的方法。将维生素K1补充片剂研磨成粉后,称取0.25 g样品,用异丙醇溶解后,定容至50 mL棕色容量瓶中,用0.45μm滤膜过滤,取上清液,采用Phenyl柱,以不同体积比的甲醇和50 mmol·L^(-1)乙酸溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱。结果显示:在上述色谱条件下,顺、反式维生素K1的分离度(RS)为1.76,线性范围分别为0.01~2 mg·L^(-1)和0.04~8 mg·L^(-1),检出限(3S/N)分别为0.032 mg·L^(-1)和0.074 mg·L^(-1)。对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,反式维生素K1的回收率为92.0%~95.2%,测定值的日内相对标准偏差(RSD,n=6)为1.6%~2.2%,日间RSD(n=5)为2.4%~4.8%;顺式维生素K1的回收率为90.0%~101%,测定值的日内RSD(n=6)为1.4%~2.3%,日间RSD(n=5)为2.6%~4.6%。方法用于实际样品分析,反式维生素K1的检出量为75.36~80.12μg·g-1。

苯并芘DNA加合物anti-BPDE-N^2-dG四种立体异构体的合成及色谱分离

体外合成了苯并芘DNA加合物-邻二醇环氧苯并芘-脱氧鸟苷加合物(anti-BPDE-N2-dG)四种立体异构体(两对手性异构体)。通过优化体外反应条件,anti-BPDE-N2-dG四种异构体的合成产量较现有合成方法提高了2倍多,为定量检测生物体中anti-BPDE-N2-dG提供了标准品。并首次将五氟苯基色谱柱应用于该立体异构体的色谱分离提纯,通过优化色谱条件,采用常规的五氟苯基色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水(22.5∶77.5)为流动相,流速1.2 mL/min条件下,45 min内即可分离提纯四种立体异构体。该方法与常规C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)需要160 min,苯基柱(250 mm×4.6 mm,5μm)需要85~100 min才能将四种立体异构体实现色谱分离相比,缩短了分离时间,提高了提纯效率。通过紫外吸收光谱、质谱、圆二色谱对四种立体异构体进行表征,确定出峰顺序为trans(-)、trans(+)、cis(+)、cis(-)-anti-BPDE-N2-dG。此外,利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测anti-BPDE-N2-dG四种立体异构体标准品时,使用常规的五氟苯基色谱柱可在30 min内完成分离检测,与相同规格的苯基柱需要60 min相比提高了检测效率。

石花菜多糖的分离纯化及单糖组成分析

以石花菜为原料,对石花菜多糖进行分离纯化,并对纯化后多糖组分的理化性质及单糖组成进行分析。利用复合酶法提取石花菜多糖并采用Sevage法脱蛋白,通过DEAE-52离子交换柱层析及Sephadex G-200凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,按峰收集主要的多糖组分GAP1,对其总糖、蛋白质、糖醛酸及硫酸基质量分数进行测定,并采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)对多糖进行衍生化,通过高效液相色谱法测定其单糖组成。结果表明:石花菜粗多糖经柱层析后收集得到主要多糖组分GAP1,其总糖质量分数为92.56%,糖醛酸质量分数为44.53%,硫酸基质量分数为6.92%,不含蛋白质;PMP柱前衍生高效液相色谱法测得GAP1主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和L-岩藻糖6种单糖按照不同比例缩合而成,各单糖物质的量比为1.00∶1.00∶4.45∶27.31∶2.27∶1.88。

3种不同固定相对皂苷异构体分离度的对比研究

目的分析3种不同固定相对皂苷异构体的分离效果。方法3对皂苷异构体gypenoside L和gypenoside LI、damulin A和damulin B、20(S)-ginsenoside Rg3和20(R)-ginsenoside Rg3,通过C18色谱柱、五氟苯基丙基色谱柱及双苯基色谱柱进行分离比较。以Inertsill ODS-SP色谱柱、Shim-pack Velox PFPP色谱柱和Shim-pack Velox Bipheny1色谱柱作为固定相,用不同比例的流动相分离gypenoside L、gypenoside LI、damulin A、damulin B、20(S)-ginsenoside Rg3和20(R)-ginsenoside Rg3。结果Shim-pack Velox PFPP色谱柱分别在29%和33%乙腈水溶液以1.0 mL/min等度洗脱,gypenoside L和gypenoside LI的分离度达到2.27,20(S)-ginsenoside Rg3和20(R)-ginsenoside Rg3的分离度达到3.50,分离效果最佳;Shim-pack Velox Biphenyl色谱柱在33%乙腈水溶液以0.5 mL/min等度洗脱,damulinA和damulinB的分离效果最佳,分离度达到2.73。结论五氟苯基丙基色谱柱因键合五氟苯基丙基,对差向异构体具有更好的分离度,双苯基色谱柱因键合二苯基,对位置异构体有更好的分离度。

黄花倒水莲多糖的纯化、表征与体外抗氧化活性研究

提取纯化黄花倒水莲多糖(polysaccharide of Polygala fallax Hemsl.,PFP),对其结构进行表征,并测定其体外抗氧化活性。采用水提醇沉法提取PFP,运用Sevag法除蛋白、活性炭脱色以及G-75葡聚糖凝胶柱层析对其进行纯化分离获得不同的多糖组分。分别用红外光谱(infrared spectrum,IR)、凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography,GPC)与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazalone,PMP)柱前衍生高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法对PFP组分进行表征分析。最后测定PFP组分对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基和ABTS+自由基的清除率来评价其体外抗氧化活性。经分离纯化得到两种PFP组分(PFP1与PFP2)。其中PFP1的分子量为20 794 Da,多分散指数为1.32,红外光谱中呈现多糖的典型特征吸收峰,PFP1是由甘露糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖与一种未知单糖组成的一种杂多糖,且摩尔比为0.09∶1∶0.48∶0.64∶0.71∶0.35。PFP1对4种自由基均有清除能力,且在一定浓度范围内呈正相关。因此PFP在体外具有抗氧化活性,为今后进行更深入的研究与开发利用提供依据。

梨园块菌多糖提取工艺优化及其单糖组成分析

目的:本文以梨园块菌Tuber liyuanum为实验材料,优化和确定其多糖的提取工艺,并对单糖组分进行分析。方法:在单因素实验的基础上,采用正交试验设计、优化和确定水提醇沉法提取多糖的最适工艺条件;通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-menthy-5pyrazolone,PMP)柱前衍生化HPLC法分析梨园块菌单糖组分。结果:梨园块菌多糖的最佳提取工艺条件为提取温度90℃、提取时间60 min、料液比1:25 g/mL,在此条件下多糖得率为10.57%±0.31%。梨园块菌多糖主要由D-葡萄糖和少量的D-甘露糖、D-半乳糖组成,其物质的量之比为1:0.023:0.006。结论:采用水提醇沉法,在最佳提取工艺条件下能够获得较高的梨园块菌多糖得率,方法简单且稳定可行;使用柱前衍生化HPLC法测定梨园块菌多糖中的单糖组成,具有操作简便、可重复性和准确度高的优点,可为进一步研究梨园块菌多糖提供理论依据。

高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液中硫柳汞和苯基汞的含量

目的 建立氯霉素滴眼液中硫柳汞和苯基汞防腐剂的含量测定方法 。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent苯基柱[Zorbax Eclipse XDB-phenyl（4.6 mm×250 mm,5μm）],0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（用三乙胺调节pH值至5.5）-乙腈（82∶18）为流动相,流速为1.2 mL·min^-1,检测波长为220 nm。结果 硫柳汞和醋酸苯汞在2-100μg·mL^-1之间呈良好的线性关系（r〉0.999 0）,硫柳汞的平均回收率≥96.9%,醋酸苯汞的平均回收率≥99.1%。结论 本法简便、准确、专属性强,可用于药品中有机汞防腐剂的控制。

高效液相色谱法对β-羟基酮类衍生物的手性拆分

采用高效液相色谱法,以Chiralpak IA柱[直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)]为手性固定相对新合成的7个含4-取代苯基4-羟基-丁-2-酮类衍生物对映体进行了手性拆分。通过考察不同流动相体系,优化了对映体色谱分离条件,同时初步探讨了在手性识别过程中流动相组成和极性对于对映体拆分和保留的影响。

基于碱提多糖收率及含量的茯苓质量评价方法研究

为了完善茯苓的质量控制方法,更好地开发利用茯苓资源,该文采用碱液浸提法提取茯苓碱溶性浸出物,通过单因素分析,确定了碱溶性浸出物的最佳提取方法,并对30批样品进行测定。采用高效凝胶色谱(HPGPC)、红外光谱(FT-IR)、核磁共振光谱(NMR)、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生高效液相色谱(PMP-HPLC)等方法分析碱溶性浸出物的化学组成。结果表明,30批茯苓样品碱溶性浸出物在46.98%~73.86%;茯苓碱溶性浸出物的主要成分为β-(1→3)-葡聚糖,相对分子质量约为1.093×10^(5)。进一步,分别采用紫外-可见分光光度法(UV-Vis)和高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),建立了茯苓碱溶性多糖的含量测定方法,并测定30批样品。结果表明,UV-Vis测定茯苓碱溶性多糖在73.70%~92.57%,不同产地样品含量为湖北略高于云南、安徽、湖南。HPLC-ELSD测定茯苓碱溶性多糖为51.42%~76.69%,不同产地样品含量为湖南略高于湖北、安徽、云南。可见,UV-Vis测定的碱溶性多糖含量偏高;HPLC-ELSD的测定结果与碱溶性浸出物的含量较为接近,能够较准确地表征茯苓碱提多糖的含量,且方法简便,重复性好。因此,建议将碱溶性浸出物和碱溶性多糖HPLC-ELSD定量分析方法纳入茯苓质量标准控制项目,作为其《中国药典》标准的补充。