HPLC测定D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐中的手性异构体

目的 建立测定D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐中手性异构体(L-苯甘氨酸甲酯盐酸盐)含量的高效液相色谱(HPLC)方法。方法 采用CHIRALPAK IA手性色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以正己烷-异丙醇-二乙胺(920:80:1)为流动相,检测波长为230 nm,流速0.8 ml/min,柱温30℃。结果 空白溶剂无干扰,分离度符合规定。检测限为0.6μg/ml,定量限为1.3μg/ml。L-苯甘氨酸甲酯在1.3~37.6μg/ml范围内,溶液的浓度与峰面积呈良好的线性关系(y=0.119x-0.046,r=0.998>0.99),平均回收率为104.3%(RSD<10.0%,n=9)。结论该方法操作简便,专属性强,灵敏度高,可有效检出D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐中手性异构体的含量,适用于其手性杂质的控制。

脂肪酶催化外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯水解制备对映体纯D-对羟基苯甘氨酸的新方法

基于在反应体系中添加碳酸氢铵可有效地促进酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解这一有趣现象的发现 ,探讨了利用有机介质中酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解制备对映体纯 D 对羟基苯甘氨酸及其衍生物的可能性 ,研究了不同来源的酶、摇床转速、水含量、对羟基苯甘氨酸甲酯浓度、反应介质及温度等因素对该反应的影响 .结果表明 ,在所研究的 11种酶中脂肪酶Novozym 4 35对该反应的催化活性和对映体选择性较高 ,叔丁醇为最合适的反应介质 ,最适水含量为0 4 % (V/V) ,对羟基苯甘氨酸甲酯的适宜浓度为 2 0mmol/L ,最适摇床转速和反应温度分别为 130r/min和 30℃ .在此优化条件下反应 2 6h后 ,底物转化率和产物ee分别为 39 8%和 95 2 % .

含离子液体介质中脂肪酶高效催化对羟基苯甘氨酸甲酯不对称氨解

利用离子液体C_6MIm·BF_4(20%,v/v)/叔丁醇混合介质中脂肪酶Novozym 435催化对羟基苯甘氨酸甲酯不对称氨解反应,高效地制备了对映体纯D-对羟基苯甘氨酸酰胺。该反应的最适氨源为氨基甲酸铵,其较佳浓度为120~160mmol·L^(-1);最适水活度、反应温度、pH值、对羟基苯甘氨酸甲酯浓度分别为0.55~0.75、35~40℃、7.5~8.0和40mmol·L^(-1)。在上述条件下,反应初速度和对映体选择比分别为5.88mmol·L^(-1)·h^(-1)和83(E值),反应6h,产率为47.6%,产物e.e.值为92.9%。与有机溶剂叔丁醇相比,脂肪酶Novozym 435在C_6MIm·BF_4(20%,v/v)/叔丁醇混合溶剂中的操作稳定性显著提高,反应7批次后,仍能维持90%以上的催化活性,而在叔丁醇反应介质中,仅能维持41%的催化活性。

有机介质中脂肪酶催化外消旋苯甘氨酸甲酯的对映体选择性氨解反应

A novel reaction\|enzymatic ammonolysis discovered in the mid of 1990s has been demonstrated to be a very promising alternative in the preparation of optically pure compounds. The effects of organic solvent, initial water activity, temperature and additives on lipase Novozym435\|catalyzed enantioselective ammonolysis of racemic phenylglycine methyl ester were investigated systematically in this paper. Enzymatic reaction of ammonolysis showed higher activity and enantioselectivity than the corresponding reaction of hydrolysis and alcoholysis.

对映选择性氢化法合成苯甘氨酸甲酯

以α 肟基苯乙酸甲酯为原料,硫酸奎宁为修饰剂,通过Pd/C催化氢化合成苯甘氨酸甲酯。考察了反应温度、溶剂、修饰剂的量对对映选择性的影响。最佳反应条件:25～28℃、乙醇为溶剂、氢气压力101 325kPa、n(修饰剂)∶n(底物)=1∶10,苯甘氨酸甲酯的光学产率达51 3%。

有机介质中酶促 (R)-及(S)-苯甘氨酸甲酯的氨解反应(英文)

酶促氨解反应是近年来发现的一类新反应 .脂肪酶Novozym4 35在催化苯甘氨酸甲酯的氨解反应中表现出较高的酶活性和对映体选择性 .本文系统地研究了氨基甲酸铵浓度、温度、溶剂及初始水活度对酶促氨解反应的影响 ,结果表明酯的酶促氨解反应不仅是酰胺合成的有效方法 ,也是手性酸、手性醇及手性酯拆分的有效途径 .

添加剂对酶促外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解反应的影响

系统探讨了通过添加剂(β-环糊精、牛黄胆酸钠、6种表面活性剂、Ca2+、Mn2+)来调控Novozym435催化外消旋对羟基苯甘氨酸甲酯水解反应的酶活性和对映体选择性。结果表明在所研究的10种添加剂中,Mn2+(浓度大于3mg/ml)和表面活性剂CTAB可提高该酶促反应速度却降低对映体选择性,牛黄胆酸钠与Ca2+(浓度大于2mg/ml)对该反应有负面影响,其余6种添加剂(β-环糊精、吐温40、吐温80、司盘60、司盘80、十二烷基磺酸钠)则无任何影响。

氯吡格雷中间体——邻氯苯甘氨酸甲酯的化学拆分过程中的结晶过程研究

研究了(S,R)邻氯苯甘氨酸甲酯与拆分剂L-(+)-酒石酸的成盐过程,分别测定了S-(+)-邻氯苯甘氨酸甲酯-L-(+)-酒石酸(简称Ⅰ)与R-(-)-邻氯苯甘酸甲酯-L-(+)-酒石酸(以下简称Ⅱ)的单晶衍射数据,DSC与极性情况。数据表明,在拆分过程中,非对映异构体"盐对"与溶剂的作用很不相同。一般析出的为晶体,并且不溶于溶剂;另一个非晶体Ⅱ,则"溶剂化"很明显。

头孢克洛活性侧链苯甘氨酸甲酯盐酸盐合成

D-(-)-苯甘氨酸在二氯亚砜-甲醇溶液中进行甲酯化反应,生成的标题化合物直接从反应体系中析出无需再进行精制,纯度99.5%以上,而且反应母液可以直接循环套用,总收率95%以上。

D—（—）—苯甘氨酸甲酯的合成

论述了以Ｄ－（－）－苯甘氨酸和甲醇在浓硫酸的催化下缩合成酯的方法，产品用于酶法合成氨苄青霉素，含量为９９．７０％，收率达８６．００％。

二苯基硅烷用于D-对羟基苯甘氨酸甲酯制备的新技术

为开发一种对设备腐蚀性小、生产成本低、产能大的D-对羟基苯甘氨酸甲酯生产新技术,尝试用二苯基硅烷作用于D-对羟基苯甘氨酸的甲酯化进程,效果较好。当V(无水甲醇):m(D-对羟基苯甘氨酸)=8.97 mL/g,反应温度为70℃,n(二苯基硅烷):n(D-对羟基苯甘氨酸)=1,反应时间为8 h时,实验结果最佳。目标产物摩尔收率为80.97%,外观为白色颗粒状晶状固体,含量(HPLC归一法)为99.16%,比旋光度为-150.23°,水分为0.21%,吸光度为0.013 AU,D-对羟基苯甘氨酸残留(HPLC归一法)为0.23%。

脂肪酶催化苯甘氨酸甲酯两对映体的氨解反应

从 6种脂肪酶中筛选出对苯甘氨酸甲酯具有较高氨解反应活性及较高对映体选择性的脂肪酶Novozym435 ,并研究了铵盐量、温度、有机溶剂及初始水活度对两种对映体的氨解反应的影响 .当以叔丁醇为反应介质 ,反应温度为 30℃ ,铵盐量为 15 .6 mg,初始水活度为 0 .75时 。

HPLC测定D-对羟基苯甘氨酸甲酯中的手性杂质

目的建立HPLC测定D-对羟基苯甘氨酸甲酯中潜在的手性杂质[杂质1:L-对羟基苯甘氨酸,杂质2:L-对羟基苯甘氨酸甲酯,杂质3:D-对羟基苯甘氨酸]的含量和限度。方法采用Crownpak CR(-)手性色谱柱(150 mm×4.0 mm,5μm);流动相:高氯酸溶液(pH 1.7)-甲醇(90︰10);检测波长为226 nm;流速:0.7 m L·min^(-1);柱温:25℃。结果杂质1、杂质2和杂质3均在其定量限浓度~2.400μg·m L^(-1)内线性良好(r分别为1.000 0,0.999 9,0.999 9),平均回收率分别为99.97%,100.30%和103.18%,RSD分别为0.30%,0.64%和0.62%(n=9)。结论该方法专属性强,准确、方便,可以作为D-对羟基苯甘氨酸甲酯中手性杂质1、杂质2和杂质3的液相分析方法。

苯甘氨酸肽固定相制备及其色谱性能评价

利用"点击化学"(Click Chemistry)合成了一系列L-苯甘氨酸为母体结构的疏水固定相(L-苯甘氨酸甲酯、L-苯甘氨酸二肽、L-苯甘氨酸三肽);合成过程中,一个结构稳定的重氮转移试剂——磺酰叠氮咪唑被用于在温和条件下将甘氨酸中的氨基转化为叠氮基的试剂。初步的色谱评价表明,随着氨基酸单元的增加,其对模型化合物的保留时间增加;元素分析、红外和13C固体核磁对固定相的结构表征显示,苯甘氨酸、苯甘氨酸二肽及苯甘氨酸三肽都成功键合到硅胶表面。

离子液体的组成及溶剂性质与木瓜蛋白酶催化特性的关系

离子液体的组成及溶剂性质对木瓜蛋白酶催化D,L-对羟基苯甘氨酸甲酯不对称水解反应有重要的影响.木瓜蛋白酶在含CnMIm·BF4(n=2～6)介质中表现出较高的活性、对映体选择性及稳定性,而在含有C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3,C4MIm·CH3COO的介质中表现较低的对应值.在含有CnMIm·BF4(n=2～6)的介质中,酶活性随离子液体的极性增大而提高,但在含有C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3,C4MIm·CH3COO的介质中随离子液体的极性增大反而降低.木瓜蛋白酶的对映体选择性和稳定性均随着离子液体的疏水性增大而提高.荧光分析结果表明,离子液体对酶分子构象具有显著的影响.在CnMIm·BF4(n=2～6)的介质中,木瓜蛋白酶的最大荧光发射波长(λmax)均蓝移,而在含有C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3或C4MIm·CH3COO的介质中,λmax均红移.与CnMIm·BF4(n=2～6)相比,在C4MIm·HSO4,C4MIm·Cl,C4MIm·NO3或C4MIm·CH3COO中,酶分子构象的变化较大,暴露的疏水区域较多.

固定化酶催化合成头孢羟氨苄

以7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)为母核,对羟基苯甘氨酸甲酯(HPGME)为酰基供体,在磷酸缓冲液体系中,利用固定化青霉素酰化酶催化合成头孢羟氨苄(cefadroxil).通过对头孢羟氨苄酶法合成过程中的影响因素的考察,以选取较佳的合成工艺条件.实验结果表明,在反应温度为25℃,反应体系pH6.5,7-ADCA,HPGME和固定化酶用量分别为2.5%,7.5%,1.5%的反应条件下,合成反应转化率可达到80.3%.

固相PGA酶催化一步法合成氨苄西林的工艺研究

采用吸附法将青霉素酰化酶(PGA)固定于AB-8树脂上,通过固相酶催化D-苯甘氨酸甲酯与6-氨基青霉烷酸(6-APA)反应制备氨苄西林,对酰化反应中的最适pH条件、溶剂体系、反应温度、反应时间、底物浓度进行实验研究。以氨苄西林收率和水解比为评价条件,固相酶最适催化pH值为6.5,通过正交实验分析表明,在异丙醇-PBS缓冲体系中,350mg PGA/AB-8(固定化酶活性113U·g^(-1))催化下,反应温度10℃,底物浓度(D-PGME∶6-APA)为3.5∶1,反应时间8h,氨苄西林收率达到71.3%。固相PGA酶重复回用6次,氨苄西林收率由71.3%降至63.6%。

HPLC-多波长法同时测定三种医药中间体的研究

目的通过HPLC等度洗脱多波长法对乙醛酸、D-对羟基苯甘氨酸、D-对羟基苯甘氨酸甲酯等三种医药中间体进行同时测定。方法将样品用流动相进行处理,采用ZORBAX Extend-C1_8色谱柱(4.6×150 mm,5μm)分离,流动相为0.1%磷酸二氢钠溶液∶乙腈(95∶5),流速:1mL·min^(-1),柱温25℃。并用外标法定量。结果三种成分在0.01～0.06mg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,各成分相关系数r分别为0.999 1、0.999 5、0.999 9,平均回收率在98.40%～99.17%之间,精密度良好(RSD均低于1.2%)。结论高效液相色谱法测定乙醛酸、D-对羟基苯甘氨酸、D-对羟基苯甘氨酸甲酯的含量灵敏度高,重现性好,精密度和准确度高,可对该三种组分同时分析,并有望应用于相关医药产品的合成工艺和质量控制。