SPE-HPLC测定复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量

目的:建立复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量测定方法。方法:采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对复方羊角颗粒进行净化,高效液相色谱法测定,色谱柱:SVEA^(TM)C_(18)Opal(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶12),流动相B为0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(含0.05%冰醋酸),梯度洗脱;检测波长:235 nm;柱温:25℃;流速:1.0mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的线性范围分别为2.27~98.61(r=1.0000)、0.61~26.53(r=1.0000)、1.00~43.50μg·m L^(-1)(r=0.999 9);平均回收率及RSD分别为93.9%及2.4%、95.0%及2.6%、91.0%及3.0%。结论:本方法可为复方羊角颗粒的质量控制提供依据。

苯甲酰乌头原碱对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞凋亡、炎症因子的影响

目的:探究苯甲酰乌头原碱(BAC)对类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡、炎症因子的影响及具体凋亡机制,为RA的临床治疗提供参考。方法:募集24例高度活动期RA患者(DAS28评分>5.1分),同期纳入性别、年龄匹配的16例健康体检者为正常对照组(HC组)。采用梯度离心法分离PBMC;分别检测加药前及最终质量浓度为0,150,300μmol·L^(-1) BAC干预RA组、HC组PBMC细胞24 h后,实时荧光定量PCR与Western blot法检测细胞中凋亡相关基因及蛋白的表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中炎症因子白细胞介素(IL)^(-1)、IL-6、IL^(-1)7、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:RA组PBMC细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量增加,Bax、Caspase-3/Cleaved Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量减少,与HC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。加入BAC干预后,150,300μmol·L^(-1) BAC加药组PBMC凋亡率增加,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。150,300μmol·L^(-1) BAC加药组PBMC中Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量明显降低,Bax、Caspase-3/Cleaved Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量明显增加,与0μmol·L^(-1) BAC组比较,除150μmol·L^(-1) BAC组Bax mRNA和蛋白表达外,其余差异均有统计学意义(P<0.05)。同时BAC可以降低PBMC培养液中的炎症因子IL^(-1)、IL-6、IL^(-1)7、TNF-α水平,300μmol·L^(-1) BAC组最为显著,与0μmol·L^(-1) BAC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RA患者血清中炎症因子IL^(-1)、IL-6、IL^(-1)7、TNF-α水平升高,PBMC凋亡减少,BAC可能通过Bcl-2/Bax、Caspase-3途径诱导PBMC细胞凋亡,并能降低PBMC中炎症因子水平。

基于代谢组学方法研究乌头碱和苯甲酰乌头原碱对BeWo细胞的毒性机制

以BeWo细胞建立体外胎盘模型,采用基于气相色谱与质谱联用技术(GC-MS/MS)的代谢组学方法,研究乌头碱及其代谢产物苯甲酰乌头原碱的生殖毒性机制。收集不同时间点(0,6,12,24和36 h)药物干预后的BeWo细胞裂解液,通过GC-MS/MS分析获得细胞代谢轮廓;正交偏最小二乘法-判别分析(OPLSDA)显示,BeWo细胞内代谢物在药物干预后呈动态变化。进一步通过变量重要性投影(VIP)值和单因素方差分析筛选差异性代谢物,最终鉴定出脯氨酸、甘氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、乙酰谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、葡萄糖、半乳糖、琥珀酸共11个差异性代谢物。经Metaboanalyst分析,主要涉及谷氨酰胺和谷氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,赖氨酸降解,精氨酸和脯氨酸代谢,组氨酸代谢等6条代谢通路。实验结果表明,乌头碱和苯甲酰乌头原碱主要通过影响氨基酸代谢对BeWo细胞产生生殖毒性作用。

苯甲酰乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱对照品的制备

目的建立苯甲酰中乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱对照品的制备方法。方法将乌头碱、中乌头碱和次乌头碱3种双酯型生物碱在高温下水解,再结合柱层析方法制备得到苯甲酰乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱3种单酯型生物碱,通过HPLC、MS、1H-NMR、13C-NMR等方法进行纯度、结构鉴定。结果制备得到的苯甲酰乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱质量分数分别为98.6%、98.5%、99.3%。结论该方法简单,制备所得的对照品可用于附子质量控制。

HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量的方法。方法色谱柱为Agilent XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）；流动相A为乙腈-四氢呋喃（25∶8）,B为0.1 mol/L醋酸铵溶液（每1000 mL加冰醋酸0.5 mL）,梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：235 nm；柱温：25℃。结果乌头碱在0.072～0.648μg具有良好的线性关系（r＝0.9995）,平均回收率为99.29%,RSD＝1.25%；新乌头碱在0.062～0.648μg具有良好的线性关系（r＝0.9995）,平均回收率为99.12%,RSD＝0.85%；次乌头碱在0.064～0.384μg具有良好的线性关系（r＝0.9998）,平均回收率为99.57%,RSD＝1.07%；苯甲酰乌头原碱在0.056～0.672μg具有良好的线性关系（r＝0.9992）,平均回收率为98.11%,RSD＝0.61%；苯甲酰新乌头原碱在0.055～0.993μg具有良好的线性关系（r＝0.9999）,平均回收率为99.27%,RSD＝1.10%；苯甲酰次乌头原碱在0.078～0.702μg具有良好的线性关系（r＝0.9998）,平均回收率为99.08%,RSD＝1.38%。结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为复方藤乌软膏中乌头类生物碱的含量测定方法。

应用高速逆流色谱技术从附子中分离制备苯甲酰新乌头原碱

利用高速逆流色谱技术,一次进柱即可实现从附子粗提物中分离得到苯甲酰新乌头原碱。两相溶剂系统用氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸三元系统,上相为固定相,下相为流动相,转速为892rpm,流速为1.2ml/min。通过ESI-MS、13C-NMR、1H-NMR鉴定,确认了其化学结构。经HPLC分析,纯度达98%以上。

基于苯甲酸HPLC定量分析的制草乌氨基醇型乌头原碱类水解产物的含量测定

目的建立推算乌头碱氨基醇型水解产物含量的方法。方法通过控制苯甲酰乌头原碱水解条件,分别获得不同阶段的水解产物,确定苯甲酰乌头原碱降解率与苯甲酸转化率之间的关系,建立通过苯甲酸HPLC定量分析推导氨基醇型乌头原碱类水解产物含量的方法,并利用该方法对药典法制草乌生物碱含量进行测定。结果苯甲酰乌头原碱降解率与苯甲酸转化率约为1∶1,通过测定苯甲酸含量计算氨基醇型乌头原碱类含量的公式为:氨基醇型乌头原碱类含量≈(苯甲酸的含量×529)/122。药典法制草乌的双酯型生物碱、单酯型生物碱和氨基醇型乌头原碱类含量分别为0.0025%、0.16%和0.005%。结论通过定量分析苯甲酸含量推导乌头碱氨基醇型水解产物含量的方法可行,操作简单。

苯甲酰乌头原碱对人肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响

目的:研究苯甲酰乌头原碱(BAC)对人肺癌A549细胞自噬和凋亡的影响,探讨其用于非小细胞肺癌治疗的作用机制。方法:采用不同剂量的BAC(10、50、100、200、400μmol/L)分别对A549细胞进行处理后,观察细胞的形态变化,并采用CCK-8法测定细胞的增殖抑制率。将细胞分为对照组(不加药物)和BAC低、高剂量组(200、400μmol/L),分别加入相应药物处理后,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用聚合酶链式反应法和Western blotting测定细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2凋亡相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和自噬相关因子Beclin1、LC3、P62的基因及蛋白表达水平。结果:采用不同剂量的BAC处理后,细胞出现皱缩、排列稀疏、溶解等现象,BAC100、200、400μmol/L剂量组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,BAC低、高剂量组细胞凋亡率分别在药物作用24、48h时有不同程度的上升,且该促凋亡作用具有剂量、时间依赖趋势。与对照组比较,BAC各剂量组细胞中Bcl-2、P62的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的降低,Bax、Caspase-3、Beclin1、LC3的mRNA和Bax、Active Caspase-3、P62、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平均有不同程度的升高,其中BAC低剂量组Caspase-3的mRNA和Bcl-2、Active Caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达水平,以及BAC高剂量组各目标基因的mRNA和蛋白的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且上述影响均呈剂量依赖趋势。结论:BAC可抑制A549细胞的增殖、促进其凋亡,并且能促进Beclin1、LC3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、Bax、Caspase-3(Active Caspase-3)表达和抑制P62、Bcl-2等自噬/凋亡相关基因及蛋白的表达;其机制可能与BAC通过促进细胞发生过度自噬从而导致细胞凋亡有关。

RP-HPLC法测定五生饮中3种单酯型乌头类生物碱的含量

目的建立五生饮中3种单酯型乌头类生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法。方法采用YMC-Pack ODS-AMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温:35℃,以乙腈-四氢呋喃(25:15)为流动相A,0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液(每1000 m L加冰醋酸0.5 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速:1.0 m L·min^(-1),检测波长:235 nm,进样量:10μL。结果苯甲酰新乌头原碱在146.96~1469.60 ng范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.05%(RSD为1.87%);苯甲酰乌头原碱在16.78~167.80 ng范围内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为99.42%(RSD为1.94%);苯甲酰次乌头原碱在20.30~203.00ng范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为100.15%(RSD为1.53%)。结论本研究所建立的方法操作简单,稳定性好,准确度高,重复性好,为五生饮水煎剂的质量控制提供参考。

不同配伍对芍药甘草附子汤中苯甲酰类乌头碱含量变化的影响

目的探讨芍药甘草附子汤不同配伍对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱3种成分含量变化的影响。方法采用HPLC法对不同配伍样品煎液中的3种苯甲酰乌头碱进行含量测定,并分析比较不同煎煮时间不同配伍对其含量变化的影响。色谱条件:BDS Hydedsil C_(18)(250mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈∶四氢呋喃(25∶15)-0.1 mol·L^(-1)醋酸铵溶液梯度洗脱,检测波长235 nm,柱温35℃,流速1.0 mL·min^(-1)。结果芍药甘草附子汤中各配伍与单味附子相比,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量均升高。结论附子与甘草、白芍配伍后能有效地起到减毒增效的作用,体现了中医药配伍用药的合理性和科学性。

多药耐药蛋白1a对苯甲酰新乌头原碱的效-毒-体内暴露的调控研究

目的探究多药耐药蛋白1a(Multidrug resistance protein 1a,Mdr1a)对苯甲酰新乌头原碱(Benzoylmesaconine,BMA)的镇痛和抗炎活性、神经和心脏毒性以及体内暴露的调控作用。方法Mdr1a^(-/-)和野生型FVB小鼠分别灌胃20 mg·kg^(-1)BMA后,采用醋酸致疼痛扭体模型和角叉菜胶诱导急性炎症模型来考察Mdr1对BMA的镇痛和抗炎活性的调控作用,同时采用脑和心脏组织病理切片和ELISA法考察Mdr1对BMA神经和心脏毒性的调控作用。Mdr1a^(-/-)和野生型FVB小鼠静脉注射1 mg·kg^(-1)或灌胃20 mg·kg^(-1)BMA后,采用超高效液相-质谱(UHPLC-MS/MS)技术测定小鼠各组织和血浆中BMA的浓度,考察Mdr1a对BMA组织分布及药动学特征的影响。采用在体单向肠灌流模型考察Mdr1a对BMA肠道吸收的影响。结果口服20 mg·kg^(-1)BMA后,Mdr1a^(-/-)小鼠的疼痛扭体次数较野生型FVB小鼠下降60.82%(P<0.05),足肿胀率无明显变化。与野生型FVB小鼠相比,Mdr1a^(-/-)小鼠口服BMA 8 h后海马DG区和CA区可见明显的锥体细胞核固缩,S100B钙结合蛋白水平增加了0.60倍,脑和心脏中BMA的含量分别增加了3.12和2.64倍(P<0.05),但心肌组织未见异常,肌酸激酶水平也无明显变化。组织分布结果显示,静注BMA 0.5和2 h后,与野生型FVB小鼠相比,Mdr1a^(-/-)小鼠的脑、心脏、肾脏、结肠和血浆中BMA的含量均显著上升(P<0.05)。药动学实验结果表明,与野生型FVB小鼠相比,BMA在Mdr1a^(-/-)小鼠上的生物利用度(F)增加了4.53倍,同时,口服20 mg·kg^(-1)BMA后,药时曲线下面积(AUC_(0-t))和AUC_(0-∞)分别增加了1.46和2.63倍,清除率(Cl)和表现分布容积(V_(d))分别降低了66.13%和78.85%(P<0.05)。肠灌流实验结果表明,与野生型FVB小鼠相比,BMA在Mdr1a^(-/-)小鼠十二指肠上的有效表观渗透系数,吸收率和吸收量分别显著增加了4.00、3.96和3.96倍(P<0.05)。结论Mdr1a通过改变BMA的组织蓄积、体内暴露量和肠道吸收,参与调节BMA的镇痛作用和神经毒性,但BMA的抗炎作用和心脏毒性可能与Mdr1a的缺失无关。

反相高效液相色谱法检测风湿骨痛胶囊中盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸的含量

目的:建立反相高效液相色谱法检测风湿骨痛胶囊中盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸含量的方法。方法:风湿骨痛胶囊样品经乙腈-甲醇(V∶V=60∶40)溶液提取后进样测定,Shim-pack CLC ODS-C 18色谱柱分离;流动相A为乙腈-甲醇(V∶V=60∶40),流动相B为0.1 mol/L乙酸铵溶液(每1000 ml加0.5 ml冰乙酸),梯度洗脱;检测波长为221 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为25℃;进样量为25μl;外标法测定。结果:盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸在该色谱条件下分离良好,阴性样品溶液无干扰峰;盐酸麻黄碱、苯甲酰乌头原碱和齐墩果酸分别在0.4~40.0、0.496~49.6和0.991~99.1μg/ml范围内具有良好的线性关系,r均>0.995,平均加标回收率分别为98.50%、96.94%和98.28%,重复性RSD分别为4.21%、3.08%和3.17%,仪器精密度良好。结论:本方法具有样品处理简单、检测效率高和结果准确等特点,适用于风湿骨痛胶囊的质量控制。

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响.方法:将对数期生长RPMI8226细胞随机分为空白对照组、BMA(0. 1、0. 5、1、10、100μmo L)组,24 h后用CCK8测定各组光密度(A),根据A值计算出半数抑制质量浓度(IC50);根据所测IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组、阴性对照组、BMA(4、6、8μmo L)各组,作用12～48 h,用CCK8测定不同作用时间下各组RPMI8226细胞A值,计算出各组增殖抑制率;根据BMA对RMPI8226增殖抑制率的影响规律再设空白对照组、BMA(4、8μmo L)组,作用24、48 h,用Annexin V/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:作用24 h后,各组BMA换算成质量浓度,在13～13 000 ng/m L(即1～10μmo L)质量浓度,各组A值随药物质量浓度的增加而减少,P <0. 05,其IC50质量浓度为1 040 ng/m L;作用12～48 h,各组细胞增殖抑制率随加入的BMA的增加、作用时间的增加而增加,各组P <0. 05;作用24、48 h后各组细胞凋亡率随加入BMA的增加、作用的增加而增大,各组P <0. 05.结论:BMA能抑制RPMI8226增殖并使其凋亡.

苯甲酰乌头原碱对HBV-ACLF阳黄证和阴黄证患者外周血树突细胞功能的影响

目的:研究苯甲酰乌头原碱(Benzoylaconine,BAC)对HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)阳黄证和阴黄证患者外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)功能的影响。方法:体外诱导培养HBV-ACLF阳黄证与阴黄证患者DCs,CCK-8法检测BAC安全用药范围,流式检测BAC干预HBV-ACLF阳黄证与阴黄证患者DCs表面CD80、CD86、CD83和HLA-DR表达率变化情况,ELISA法检测DCs分泌IL-12水平。结果:与健康对照组比较,阳黄证、阴黄证空白组DCs表面CD80、CD86、CD83、HLA-DR表达降低(P<0.01),IL-12分泌减少(P<0.01);与阳黄证、阴黄证空白组比较,阳黄证、阴黄证BAC干预组DCs表面CD80、CD86、CD83、HLA-DR表达升高,IL-12分泌增多(P<0.01)。结论:BAC可以促进HBV-ACLF阳黄证和阴黄证患者DCs功能恢复,间接促进T细胞活化。

基于液质联用法测定乌头碱类生物碱在大鼠体内药代动力学研究

目的:建立同时测定大鼠血浆样品中乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱含量的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,并用于制草乌给药后,3种成分在大鼠体内的药代动力学研究。方法:以小檗碱为内标,采用Shim-pack Velox SP-C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm)色谱柱,流动相为水-甲醇-乙腈(0.05%甲酸),流速0.3 mL/min,质谱采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,选择反应监测(MRM)方式。血浆样品采用有机试剂沉淀蛋白法。结果:乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱成分的线性关系良好(r≥0.9990),日内和日间精密度符合生物样品分析要求,相对标准偏差(RSD)均小于15%。结论:此方法灵敏度高、专属性强,适用于测定乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱的浓度以及药代动力学研究。

HPLC同时测定人血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量

目的：采用HPLC建立附子中4种生物碱类成分在人血浆中含量测定方法。方法：色谱条件为迪马钻石C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：A为乙腈-四氢呋喃（62∶38）,B为10 mmol/L醋酸铵水溶液,梯度洗脱;流速：1.0 mL/min;检测波长：240 nm;柱温：30℃。结果：新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的线性范围分别为1.69~1 690μg/mL、1.58~1 582μg/mL、2.56~2 563μg/mL和3.60~3 597μg/mL（r〉0.9985）,加样回收率RSD〈4.5%。结论：该方法灵敏度高、精密度好,可用于附子中4种生物碱成分的药物动力学研究。

柱切换液相色谱法快速定量检测参附注射液中乌头碱类生物碱和人参皂苷

利用柱切换液相色谱,建立了参附注射液中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱6种乌头碱类生物碱,以及Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Ro、Rb2、Rb3、Rd 9种人参皂苷的分析方法。首先利用强阳离子交换的在线固相小柱选择性富集和净化样品中生物碱类成分,优化了色谱条件;并采用EC-C_(18)柱作为人参皂苷的分析柱,通过优化实验条件,结合柱切换方式,去除了样品中辅料等大极性基质成分对色谱柱的污染,实现了生物碱分析和人参皂苷分析的自动切换。结果显示,样品中的生物碱和人参皂苷分离良好,线性相关系数(r^(2))均大于0.999,连续进样精密度的相对标准偏差(RSD)<2.0%,重复性的RSD<2.0%;其中6种生物碱的平均回收率为95.1%~98.6%,检出限为4.0~8.2 ng/mL;9种人参皂苷的平均回收率为91.7%~104%。所构建的基于柱切换液相色谱技术的在线固相萃取方法能够有效去除样品中的基质干扰,快速完成参附注射液中3种单酯型生物碱和9种人参皂苷的快速定量,同时也可对3种双酯型生物碱进行限量检测,可应用于药物的质量评价。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆苯甲酰新乌头原碱浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS法)测定大鼠血浆苯甲酰新乌头原碱浓度的方法,并初步研究其在大鼠体内的药代动力学(药动学)行为。方法以甲基叔丁基醚液-液萃取大鼠血浆样品,采用UltimateAQ-C18column(3.0μm,2.1mm×100.0mm)色谱柱进行色谱分离,柱温40℃,以流动相乙腈(A,含体积分数0.001甲酸)-体积分数0.001的甲酸溶液(B)梯度洗脱(0~0.5min,体积分数0.25A;0.5~3.5min,体积分数0.25~0.70A;3.5~4.0min,体积分数0.70A),流量0.4mL/min,进样量10μL,分别以质子数/电荷数的比值(m/z)590.5→540.4和m/z646.7→587.0为待测成分及内标的质谱检测条件。大鼠灌服5、10、20mg/kg苯甲酰新乌头原碱后,分别在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、9.0、12.0和24.0h取样,测定其血浆中苯甲酰新乌头原碱的浓度,应用药动学数据处理软件DAS2.0计算药动学参数。结果苯甲酰新乌头原碱质量浓度为0.1~1000.0μg/L范围内线性关系良好,定量下限为0.1μg/L;苯甲酰新乌头原碱和内标的提取回收率均高于93%,日内和日间相对标准差(RSD)均<10.7%;苯甲酰新乌头原碱样品在室温和低温长期放置稳定性、冻融稳定性、预处理后供试液稳定性RSD分别小于10.2%、4.6%、10.9%、3.4%;苯甲酰新乌头原碱在大鼠体内吸收较快,达峰时间约2h,但是吸收较差,绝对生物利用度仅有0.76%。结论本文建立的LC-MS/MS法操作简便,稳定可靠,适用于苯甲酰新乌头原碱的药动学研究。

高效液相色谱法测定复方夏天无片中原阿片碱和苯甲酰乌头原碱含量

目的建立同时测定复方夏天无片中原阿片碱和苯甲酰乌头原碱含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为1%冰乙酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~5 min时94%A,5~27 min时94%A→58%A,27~30 min时58%A→94%A,30~35 min时94%A),柱温为30℃,测定波长为265 nm,流速为1.0 m L/min,进样量为25μL,外标法定量。结果原阿片碱和苯甲酰乌头原碱质量浓度在0.25~10.0μg/m L范围内与峰面积线性关系良好(r>0.995,n=6);平均加样回收率分别为97.47%和100.50%,RSD分别为4.37%和4.31%(n=6)。结论该方法操作简便、快速、准确、重复性好,可用于同时测定复方夏天无片中原阿片碱和苯甲酰乌头原碱的含量。

苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖及凋亡的影响

目的:探究苯甲酰新乌头原碱(benzoylmesaconine,BMA)对骨髓瘤细胞RPMI8226(RPMI8226)增殖及凋亡的影响。方法:将RPMI8226细胞随机分为空白对照组和BMA不同浓度组,用CCK8测定BMA对细胞活性的影响,根据结果计算出半数抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC50);根据IC50将对数期生长RPMI8226细胞分为:空白对照组、阴性对照组以及BMA不同浓度组测定BMA对RPMI增值抑制率随浓度及时间的变化;根据增值抑制率情况将对数期生长RPMI8226细胞分为空白对照组及BMA不同浓度组,用AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测BMA对RPMI8226凋亡率的影响随时间浓度的变化。结果:作用24小时,BMA浓度为13～13000ng·ml^(-1)范围内,RPMI8226细胞活性随浓度增加而减小,各组P<0.05,差异有统计学意义,其IC50约为1040ng·ml^(-1);BMA对RPMI8226细胞的增值抑制率随作用浓度、作用时间的增加而增大,各组P均<0.05,差异有统计学意义;RPMI8226细胞凋亡率随BMA作用浓度、作用时间的增加而增大,各组P均<0.05,差异有统计学意义。结论:BMA能抑制RPMI8226增值并促进其凋亡。