利用苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子方法的探讨

对利用Ｂｅｒｔｈｅｌｏｔ反应测定铵离子浓度进行了细致的研究。对苯酚、ＮａＯＨ和ＮａＯＣｌ等影响因素进行了探讨，通过正交实验确定了主次因素，运用响应面分析方法对试剂的配比进行了优化，并在尿素氮的测定中取得了满意的结果。

苯酚-次氯酸盐法测定空白脂质体透析液中铵离子浓度

目的建立空白脂质体透析液中硫酸铵的定量测定方法。方法将样品依次加入显色剂I、显色剂II显色后,在波长630 nm处比色,并进行了线性、精密度、稳定性和加样回收率等项考察。结果该方法线性方程为A=72 035ρ+4.4,质量浓度在1~20 mg·L–1内,线性关系良好(r=0.999 7),该方法精密度为2.65%;显色后2 h比色结果稳定;加样回收率为97.3%~99.5%。结论该方法适于空白脂质体透析液中硫酸铵含量的测定。

一种快速微量化测定蛋白质谷氨酰胺酶活性的方法及其初筛应用

通过对苯酚-次氯酸盐法(试管体系)反应体系微量化,借助酶标仪动态检测96孔板中蛋白质谷氨酰胺酶与底物产生氨的最大速度Δmaxv,对于不同浓度的标准PG样品与不同酶活的发酵液,Δmaxv与酶活间呈显著正相关(r=0.999、r=0.890),故用Δmaxv代替酶活进行快速测定。选用96孔板作为快速测量体系,标准PG样品与发酵液在96孔板内部60孔中Δmaxv变异系数分别为10%、18%。利用该方法进行亚硝酸钠(nitrite,NIT)诱变初筛,0.6 mg/m L的NIT处理10~9CFU/m L菌液20 min,涂板后筛选400株菌株样本,利用该方法最终得到1株是出发菌株酶活1.825倍且稳定性良好的菌株,可继续作为出发菌株应用于后续诱变筛选工作中。该方法可以准确、快速地提高诱变初筛的效率,为以后的育种工作奠定了基础。

土壤中腈水解酶产生菌的快速筛选

为了从土壤中快速筛选具有腈水解能力的微生物,建立了以苯酚-次氯酸盐比色法(又名Berthelot比色法)检测96孔板反应产物中氨离子浓度为基础的腈水解酶酶活快速分析方法。用该法从土壤样本中筛选获得了9个酶活力较高的菌株。用HPLC方法定量检测9个菌株对对羟基苯甲腈的转化率,证明苯酚-次氯酸盐比色法微孔板分光光度计的测定结果与HPLC结果对应良好,转化率最高为49.9%。经16s rDNA鉴定,菌株分别属于金黄杆菌属、芽胞杆菌属、葡萄球菌属、寡养单胞菌属等。