2种车轮虫DNA抽提方法比较

[目的]比较研究了2种抽提车轮虫DNA的方法,苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法。[方法]采用苯酚-氯仿法与试剂盒抽提法对采自重庆地区淡水鱼外寄生的纤细小车轮虫进行了DNA抽提比较研究。通过琼脂糖凝胶电泳技术和核酸蛋白检测技术对所抽提的DNA及PCR扩增产物进行了分析。[结果]苯酚-氯仿法抽提的DNA中杂质含量较少,但需要的车轮虫个体数量多;而试剂盒则可有效地抽提极微量的车轮虫DNA,对于无法进行单克隆培养的生物或无法得到足量标本的种类,则具有更好的应用前景。[结论]在试验过程中可以根据研究的实际情况因地制宜地选择使用不同的方法,以达到高效、经济的目的。

牛胰脏RNA Ⅱ的制备

目的：改进从牛胰脏制备RNAⅡ的方法，以降低成本，减少污染排放，提高产品的质量和收率。方法：采用酶-苯酚-氯仿稀盐法，替代传统方法的大剂量苯酚多次萃取法从牛胰脏提取RNAⅡ。结果：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ，制剂A260／A230、A260／A280的比值分别达到2．1和1．9以上，传统工艺为1．44和1．63；DNA含量控制在2％以下，传统工艺为6．2％；有机试剂消耗降低明显，由传统工艺的18000mL苯酚·kg^-1牛胰脏降低到600和300mL氯仿·kg^-1牛胰脏；成本由原来的253元·g^1牛胰脏核糖核酸降到11～14元·g^1牛胰脏核糖核酸。结论：采用酶-苯酚-氯仿-稀盐法制备的RNAⅡ中蛋白、多糖含量较低，纯度较传统方法有较大提高；该方法可减少有机试剂用量，减少污染排放，使生产成本大幅度下降；本工艺适合大规模生产RNAⅡ。