根癌农杆菌介导苹果愈伤组织遗传转化体系的优化

【目的】以‘王林’苹果愈伤组织为转化研究的材料,在已经建立的遗传转化基础上,优化根癌农杆菌介导的‘王林’愈伤组织的遗传转化系统。【方法】在遗传转化的过程中,通过对根癌农杆菌的侵染时间、共培养以及抗性的选择,优化遗传转化体系并且增加转化效率。【结果】选择生长20 d的愈伤组织,在根癌农杆菌OD 600=0.8时侵染20 min,共培养3 d、转入卡那霉素30 mg/L和头孢噻肟250 mg/L的培养基上进行筛选,可显著提高遗传转化效率。【结论】将McmiR399d作为标记基因进行转化,优化苹果‘王林’愈伤组织的遗传转化系统,从而得到过表达和沉默的McmiR399d‘王林’愈伤组织。

过表达平邑甜茶MhbHLH122增强苹果愈伤组织耐盐性

本研究以苹果砧木平邑甜茶(Malus hupehensis var.pingyiensis)cDNA为模板,克隆出bHLH家族成员MhbHLH122;该基因编码区全长1314 bp,编码蛋白具有bHLH保守结构域,与桃PpbHLH122转录因子亲缘关系最近。将MhbHLH122转入‘王林’苹果愈伤组织,获得了MhbHLH122过表达的愈伤株系;在含200 mmol·L^(–1)NaCl的培养基上,过表达MhbHLH122的愈伤组织比野生型愈伤组织生长状态更好,其丙二醛(MDA)含量、细胞相对死亡率、过氧化氢(H_(2)O_(2))含量、超氧阴离子(O_(2)^(¯·))产生速率均低于野生型,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性均高于野生型,显示过表达MhbHLH122能增强苹果愈伤组织耐盐性。