9种杀菌剂对苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌的抑制效果

为明确能有效防控苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌的杀菌剂,本文从田间发病叶片中分离得到了苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌,借助形态学观察和分子生物学手段进行了鉴定,测试了9种常见杀菌剂对苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌的抑制效果,同时选取初筛抑制率高的杀菌剂进一步测试了EC50值。结果表明,抑制复合体Ⅲ细胞色素bc1氧化酶的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂吡唑醚菌酯可有效防治苹果炭疽病菌,抑制甾醇生物合成脱甲基化酶的三唑类杀菌剂戊唑醇可有效防治黄瓜灰霉病菌。

农杆菌介导苹果炭疽病菌的遗传转化及转化子鉴定

【目的】优化农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化苹果炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)的技术体系,并对转化子进行筛选鉴定,比较其生物学特性和致病性差异。【方法】以苹果炭疽病菌LXS010101分生孢子为转化受体,利用携带重组双元载体的农杆菌进行转化;对获得的转化子进行遗传稳定性测定、PCR检测及Southern blot分析;选取一定数量的转化子,比较其菌落形态、生长速率及分生孢子发育等主要生物学性状及致病性的差异。【结果】苹果炭疽病菌的最优转化体系为:病菌分生孢子悬浮液浓度1×105个/mL,共培养温度和时间分别为22℃和24 h,共培养基中添加200μmol.mL-1乙酰丁香酮,其转化效率达到1×105个孢子可获得439个转化子。随机选取30个转化子进行鉴定,发现T-DNA已整合进炭疽病菌基因组中,在所检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合,且能够稳定遗传。与野生型菌株相比,转化子的菌落形态没有发生明显变化,但23.33%的菌株生长速率显著减低;转化子ATJ-3和ATJ-15不能产生分生孢子,在28个产孢菌株中,分生孢子萌发率显著减低的菌株占39.29%,附着胞形成比例显著减低和形态异常的菌株占25.00%。致病性测定结果显示,11个转化子的致病力显著降低,其中菌株ATJ-19完全丧失致病能力。【结论】优化的苹果炭疽病菌遗传转化技术体系,可用于炭疽病菌致病相关基因的克隆及致病分子机理的研究。

大蒜鳞茎浸提液活性成分及对苹果炭疽病菌的抑制作用

为开发新型天然杀菌剂用于苹果炭疽病的无害化防治,以新鲜大蒜为原料,通过GC-MS分析和室内抑菌试验,研究大蒜鳞茎浸提液中活性成分及其对苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抑菌作用。结果表明,大蒜鳞茎浸提液中主要含有6种活性成分,即二烯丙基二硫化物(DADS)、二烯丙基三硫化物(DATS)、二甲基二硫醚(DMDS)、苯甲酸乙酯(ELB)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和二烯丙基一硫化物(DAS),其含量分别为20.28%、15.96%、5.28%、2.78%、2.48%、2.30%。其中,二烯丙基三硫化物、二甲基二硫醚、二烯丙基二硫化物、苯甲酸乙酯以及二烯丙基一硫化物对苹果炭疽病菌均具有抑菌活性。二烯丙基三硫化物和二甲基二硫醚的抑菌活性最强,在质量浓度为200 mg·mL-1时其对病原物菌丝生长和孢子萌发的抑制率均达到了100%,而苯甲酸乙酯则对病原物菌丝生长表现为低质量浓度促进和高质量浓度抑制的作用。二烯丙基三硫化物和二甲基二硫醚对苹果炭疽病具有较好的抑菌活性。

9种杀菌剂对苹果炭疽病菌的毒力比较

采用菌丝生长速率法测定了9种杀菌剂对苹果炭疽病菌的抑制活性。结果表明,苹果炭疽病菌对三唑类杀菌剂戊唑醇、己唑醇、氟硅唑、苯醚甲环唑、腈菌唑的敏感性依次下降,EC50值均在2.2μg/ml以下,EC90值均低于21μg/ml;甲基硫菌灵对苹果炭疽病菌毒力EC50值为1.9008μg/ml,与腈菌唑毒力相当;而福美锌、醚菌酯和代森联抑制病菌生长的毒力显著低于三唑类杀菌剂。

不同杀菌剂对苹果炭疽病菌的抑菌效果测定

在室内用生长速率法测定了11种杀菌剂对苹果炭疽病菌的活性,从EC50和EC90综合来比较,23%醚菌酯·氟环唑SC和450 g/L咪鲜胺EC效果最好;20%烯肟·戊唑醇SC、10%苯醚甲环唑微乳剂、12%苯醚·氟酰胺SC、70%甲基托布津WP和60%百泰WG效果次之;1.5%多抗霉素WP、70%代森锰锌WP、99%硫酸铜和50%醚菌酯WG效果最差。

地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌的抑制及其对贮藏期苹果轮纹病的防治作用

为了明确地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对苹果贮藏期重要病害的防治作用,进行了对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的抑制以及对轮纹病的防治试验。结果表明,W10菌液、培养滤液、抗菌蛋白对2种病菌的形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显的破坏或抑制作用,其中抗菌蛋白的作用最强,5倍稀释液可以完全抑制病菌菌丝生长,20倍液对病菌产孢或分生孢子萌发的抑制率均达100%。菌液、培养滤液与抗菌蛋白对病菌菌丝形态的破坏作用相似,都可以使菌丝细胞原生质收缩、肿大呈泡囊状、细胞壁破损导致原生质外泄,甚至菌丝断裂。W10细菌液或抗菌蛋白能够明显抑制果实病斑的扩展,用其浸果后接种病菌,贮藏90 d时,抗菌蛋白对轮纹病的防效仍达到50.0%,与多菌灵效果相当。

10种杀菌剂对苹果轮纹病菌和炭疽病菌毒力测定的研究

通过不同杀菌剂对苹果炭疽病菌和轮纹病菌的毒力测定分析,为田间高效的防治药剂筛选及配套的田间防病技术研究提供重要依据。利用菌丝生长抑制法测定了戊唑醇等10种杀菌剂对2种病原菌的抑菌毒力。结果表明:430g/L戊唑醇SC对2种病原菌的防效好,EC50分别为0.952μg/mL和0.411μg/mL,但对苹果轮纹病菌的EC90值93.836μg/mL明显低于对苹果炭疽病菌的EC90值487.738μg/mL。50%异菌脲WP和70%代森联WG对苹果轮纹病菌的抑制效果较好,EC50分别为0.586μg/mL和10.650μg/mL,但对苹果炭疽病菌的抑制效果并不理想;而250g/L嘧菌酯SC和75%百菌清WP对苹果炭疽病菌的抑制效果较好,EC50分别为0.0814μg/mL和7.313μg/mL,对苹果轮纹病菌的抑制作用不理想。

苹果炭疽叶枯病菌致病因素及综合防治措施

病虫害管理是果树种植过程中的重点工作,直接影响农户的经济收入和当地果业持续发展,因此不能忽视.近年来,在我国苹果主产区发现了一种新型病害——苹果炭疽叶枯病菌,此病害已在河南、陕西、山东、辽宁、山西等苹果主产省被发现,并有蔓延的趋势.该病害的特点是传播速度快、危害性强、快速导致落叶、严重影响产量.如果不高度重视,不及时采取有效的防治措施,将给果业生产造成较大的经济损失.

苹果炭疽叶枯病菌对3种杀菌剂的敏感性分析

【目的】了解我国苹果主产区苹果炭疽叶枯病菌(Colletotrichum gloeosporioides)对苯并咪唑类、甾醇脱甲基抑制剂类和咪唑类杀菌剂敏感性的现状,旨为苹果炭疽叶枯病的科学防治提供参考,以及为苹果炭疽叶枯病菌抗药分子机制研究提供理论依据。【方法】采用区分剂量法和菌丝生长速率法,对采自于我国苹果主产区的117个苹果炭疽叶枯病菌菌株进行甲基硫菌灵、戊唑醇、咪鲜胺的敏感性测定,并对随机抽测的28个菌株的β-微管蛋白基因(β-tubulin)进行序列分析。【结果】117个供试菌株对甲基硫菌灵的抗药性频率为100%,均为高水平抗性菌株(HR)。随机抽测24个菌株的β-tubulin基因,其中23个菌株的β-tubulin蛋白第198位氨基酸从谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala),另外1个菌株ZG4-7的第200位氨基酸从苯丙氨酸(Phe)突变成酪氨酸(Tyr)。苹果炭疽叶枯病菌对戊唑醇的敏感性检测结果表明,戊唑醇对供试菌株的EC_(50)值(ρ,后同)为0~0.843 0 mg·L^(-1),平均EC_(50)值为0.155 5 mg·L^(-1),75.21%的菌株对戊唑醇表现出低水平抗药性,设置质量浓度为5 mg·L^(-1)时,对供试群体的平均抑制率为92.72%。苹果炭疽叶枯病菌供试群体对咪鲜胺的敏感性较强,平均EC_(50)值为0.011 9 mg·L^(-1),设置质量浓度为0.5 mg·L^(-1)时,咪鲜胺对供试群体的平均抑制率为95.02%。【结论】苹果炭疽叶枯病菌对苯并咪唑类杀菌剂甲基硫菌灵表现出高抗性;对DMIs类杀菌剂戊唑醇表现出低水平抗性,但已产生高水平抗性菌株;对咪唑类药剂咪鲜胺敏感性较强。

9种生物源杀菌剂对苹果炭疽叶枯病菌的室内活性评价

为筛选出对苹果炭疽叶枯病菌具有较好抑菌效果的生物源杀菌剂,采用菌丝生长速率法,测定了9种生物源杀菌剂对苹果炭疽叶枯病菌的室内毒力.结果表明,除0.5%大黄素甲醚AS和青枯立克AS对苹果炭疽叶枯病菌没有抑菌效果外,其余7种供试药剂均有一定的抑菌效果.其中,100万/g寡雄腐霉菌WP和1%维大利DP的室内毒力最强,其次为大蒜油EC和5%香芹酚AS,2亿/g木霉菌WP、1%蛇床子素EW、0.3%丁子香酚SL抑菌效果相对较弱.

UV-C对苹果采后炭疽病的控制

应用UV-C辐射强度和辐射时间的乘积确定照射剂量,在不同的UV-C辐射剂量下,设不同的接种时间和不同的贮存温度和光照条件,测定了苹果采后炭疽病的发病率和发病指数。结果表明,控制苹果采后炭疽病的最适UV-C照射剂量为7.5kJ·m-2。UV-C照射2d后,人工接种发病指数最低,紫外照射结合13℃低温贮存,果实发病率、发病指数明显低于对照。低剂量UV-C照射能降低苹果炭疽病的发病率和发病指数,抑制苹果采后炭疽病的发生、发展。低剂量紫外线照射可诱导苹果的抗病性,且其诱导具有时间性。UV-C照射后光照与黑暗贮存控制炭疽病的效果差异不显著。

解淀粉芽胞杆菌TS-1203对苹果炭疽叶枯病菌的抗生作用

为明确解淀粉芽胞杆菌TS-1203对苹果炭疽叶枯病菌的抗生作用,采用平板对峙法和菌丝生长速率法以及孢子萌发法测定了解淀粉芽胞杆菌TS-1203对苹果炭疽叶枯病菌菌落生长和孢子萌发的抑制作用。结果表明:菌株TS-1203对苹果炭疽叶枯病菌具有显著的抑制作用,其菌液对病菌的抑制率高达70.4%;其发酵液对苹果炭疽叶枯病菌的抑制率随着发酵液浓度的增加而升高,尤其当发酵液浓度为15%时,其抑菌率为59.0%;发酵液处理苹果炭疽叶枯病菌孢子24 h后,其萌发抑制率与芽管生长抑制率分别为78.2%与64.3%,且芽管出现畸形;利用TS-1203发酵液处理苹果离体叶片后接种炭疽叶枯病菌,其防效为70.1%。综合分析表明,解淀粉芽胞杆菌TS-1203对苹果炭疽叶枯病菌具有良好的抑制作用。

腈菌唑与甲基硫菌灵对苹果轮纹病等3种病菌混配增效作用研究

为明确腈菌唑与甲基硫菌灵混配对苹果斑点落叶病菌、轮纹病菌、炭疽病菌增效作用及最佳配比,采用菌丝生长速率法测定了腈菌唑、甲基硫菌灵及其5种不同配比对3种病菌的毒力。结果表明,腈菌唑对3种病菌的毒力均高于甲基硫菌灵,其中甲基硫菌灵对苹果斑点落叶病菌的毒力最低;腈菌唑:甲基硫菌灵1:8和1:12两种配比对苹果轮纹病菌、炭疽病菌均有显著增效作用,以1:8配比最佳,其增效系数分别是2.88和2.21。5种不同配比对苹果斑点落叶病菌增效系数均小于0.5,表现为拮抗作用。

苹果炭疽菌DNA改良提取法及PCR体系的优化

以苹果炭疽病胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为试材,采用改良的SDS法、改良的CTAB法和改良的尿素法等对基因组DNA进行了提取和比较,并对ITS1-5.8S-ITS2区基因PCR扩增体系中模板的添加量以及退火温度进行了调整和优化。结果表明:采用这3种方法均能提取得到目的 DNA,但采用改良的SDS法提取的基因组DNA产率最高、质量最好;当在25μL PCR体系中添加0.75μL粗提DNA 10倍稀释液以及退火温度设定为51℃时PCR产物的质量最高。

苹果树主要病害内生拮抗真菌的筛选及拮抗特性

【目的】筛选苹果树腐烂病菌Valsa malimiyabe与苹果树炭疽病菌Glomeralla cingalata的内生拮抗真菌,并研究其抑菌效果。【方法】分离发病地区健康苹果树的根、茎及其根际土壤中的拮抗内生真菌,室内抑菌试验测定其对苹果树腐烂病菌和苹果树炭疽病菌的抑制作用;发酵培养试验检测其内生真菌中抑菌物质的耐热性。【结果】分离到的18株内生真菌分属3个属,其中茎分离到的内生真菌的种类和数量较多;对峙试验表明,对苹果树腐烂病菌和炭疽病菌的抑菌率高于60%的有8株,其中菌株J2、J16、J17对苹果树腐烂病的抑制率分别为82.75%、84.31%和82.35%,菌株T1对苹果树菌株炭疽病的抑制率为80.67%。拮抗真菌J2、J16、J17、J24、T1发酵液对2种病原菌分生孢子萌发的抑制率均不小于39.55%,最高达69.75%;在121℃时,J11和T1无菌滤液的热稳定性较好,而J2无菌滤液在100°C时就失去了生物活性。【结论】拮抗真菌J2、J11、J16、J17、T1均对苹果树腐烂病菌及苹果树炭疽病菌有较强拮抗作用,可为开展这2种病害的生物防治研究提供潜在资源。

高效液相色谱法测定苹果炭疽叶枯病菌培养液及染病寄主中的尿嘧啶

建立了病菌培养液及染病寄主苹果叶片中尿嘧啶的高效液相色谱分析方法。优化条件下,病菌培养液和叶片基质中方法的检出限(LODs)分别为0.10 mg/L和0.25 mg/kg,添加回收率范围为83.7%~94.7%。测定了Richard和PDB 2种病菌培养液以及接种病菌染病后寄主叶片中尿嘧啶的含量变化。结果显示:接种病菌后1~7 d, Richard培养液和PDB培养液中尿嘧啶含量均随时间延长逐渐上升,含量范围分别为1.18~5.58 mg/L和3.13~8.26 mg/L;健康叶片、病症较轻和较重叶片中尿嘧啶含量分别为:低于LOD、 4.18 mg/kg和58.49 mg/kg。

芽孢杆菌发酵液的抑菌活性及葡聚糖酶的基因克隆、表达分析

通过液培法和菌丝生长速率法,探究茯苓粉培养基(ABP培养基)诱导芽孢杆菌CmRh1产葡聚糖酶的发酵上清液对苹果炭疽病菌的抑制作用;采用PCR技术克隆葡聚糖内切酶基因,异源表达并初步验证其功能;采用在线生物信息学对芽孢杆菌葡聚糖酶的理化性质、信号肽、跨膜区、保守结构域、二级和三级结构、亚细胞定位等进行预测。结果表明:茯苓粉培养基(ABP培养基)诱导的芽孢杆菌CmRh1发酵上清液对苹果炭疽病菌具有一定的抑菌效果,抑菌率分别为16.07%和14.03%;从芽孢杆菌CmRh1菌株克隆到1个葡聚糖内切酶基因(Glu4),开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为1500 bp,编码499 aa。生物信息学预测,Glu4是1个含有信号肽和1个跨膜结构域稳定的亲水性蛋白质,其分子量约为55 kDa,理论等电点为7.14;保守结构域预测,Glu4属于GH5型纤维素酶家族;二级结构元件主要包括α螺旋、延伸链、β转角和无规则卷曲,三级结构为典型的β-三明治结构,符合葡聚糖内切酶的结构特征;Glu4亚细胞定位于细胞外,是一个典型的分泌蛋白。SDSPAGE结合Western blot结果显示,Glu4能在大肠杆菌中表达,其蛋白大小与理论值55 kDa基本相符。重组工程菌具有分泌葡聚糖内切酶能力,为后期葡聚糖内切酶的纯化、酶学性质分析及探究Glu4对苹果炭疽病菌的抑菌活性奠定基础。

斑蝥素对植物病原菌抑制作用的研究

研究了斑蝥素对植物病原菌的抑菌活性,结果表明:500mg L的斑蝥素溶液对所测的9种植物病原细菌均无抑制作用,对所测的8种植物病原真菌中的水稻纹枯病菌、棉花立枯病菌、蚕豆菌核病菌、油菜菌核病菌、苹果炭疽病菌、棉花枯萎病菌等6种有明显的抑制作用.其中,500mg L的斑蝥素对水稻纹枯病菌、棉花立枯病菌、苹果炭疽病菌的生长抑制作用较强.以不同的斑蝥素提取物浓度处理水稻纹枯病菌,实验结果表明:斑蝥素抑制水稻纹枯病菌生长的EC90=4.80mg L,EC50=1.84mg L,且10mg L的斑蝥素对水稻纹枯病菌菌核萌发的抑制率为100%.

新狼毒素B及其混剂对植物病原菌的毒力测定

测定了新狼毒素B单剂及其分别与3种对照药剂混配对常见的3种植物病原真菌的室内毒力。结果表明,新狼毒素B对水稻稻瘟病病菌的EC50为36.14μg/mL,与三环唑混配的EC50为5.10μg/mL;新狼毒素B对辣椒疫霉菌的EC50为277.45μg/mL,与烯酰吗啉混配的EC50为0.74μg/mL;新狼毒素B对苹果炭疽病病菌的EC50为71.88μg/mL,与丙环唑混配的EC50为0.40μg/mL。新狼毒素B的加入,对3种对照药剂的毒力均具有明显的增效作用。