广东口岸首次截获美国苹果牛眼果腐病

苹果牛眼果腐病(Bull’s Eye Rot on Apple)是欧美苹果产区存在历史达百年、我国尚未分布的进境植物检疫性真菌病害,寄主植物包括苹果、梨等多种蔷薇科果树。2009年4月29日广东检验检疫局在全国首次从经高明口岸入境的美国苹果中截获该病,至2009年9月初,广东局累计有4个口岸从美国进口苹果中截获该病,共计8次。本文归纳了苹果牛眼果腐病的发生分布、寄主范围、病原菌及其形态特征、侵染为害特点及症状,提出了操作性强的检疫鉴定方法和程序,分析评估了该病的风险和经济意义。

进境美国苹果牛眼果腐病病原真菌(Neofabraea perennans)的鉴定

【目的】探明进境截获的美国苹果牛眼果腐病的病原真菌种类,为评估病菌的入侵风险提供科学依据。【方法】对苹果（Malus domestica）腐烂果实的症状特点、病菌的形态特征与培养特性进行观察,对分离物的致病性和DNA序列进行分析。【结果】32批次腐烂果实均表现果梗凹腐烂症状,病部较坚硬,病斑圆形褐色,中央色浅形似牛眼状。累计从病果上分离46株菌株,菌落圆形,气生菌丝稀少,白色至乳白色,加深至黄褐色至黑褐色,并形成深浅褐色相间同心轮纹,菌丝体最适生长温度15~20℃,经柯赫法则证实为病原菌。在病果及PDA上,病菌形成奶油色胶质状分生孢子盘,分生孢子梗瓶梗状,大型分生孢子及小型分生孢子圆柱形、直或下部稍弯曲、无色透明、单胞。基于β-微管蛋白基因序列的系统发育分析,8个代表性的分离物与已知的苹果牛眼果腐病菌Neofabraea perennans聚在同一簇。【结论】根据症状学、形态学与致病性及系统发育分析,将屡次从进境美国苹果中截获的苹果牛眼果腐病病原真菌鉴定为Neofabraea perennans,是我国高度关注的进境植物检疫性有害生物,对我国果树的生产存在安全隐患。

苹果牛眼果腐病菌3个致病种LAMP检测方法的建立

目的:建立引起苹果牛眼果腐病的明孢盘菌属3个致病种的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法:以苹果牛眼果腐病菌3个致病种为目标菌进行LAMP引物设计,根据明孢盘菌属β-tublin基因设计引物对1、2;根据真菌通用ITS序列设计引物对3,并进行LAMP试验,从中筛选出最佳引物组合,并进行最适宜反应温度的筛选。结果和结论:经验证得出,由ITS序列得到的引物组合3对苹果牛眼果腐病菌的3个致病种有特异性的扩增,扩增最适温度为64℃。

微滴式数字PCR技术快速精准检测苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌

为了建立苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌Neofabraea perennans微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,实现苹果检疫性病原菌的高效率、高精度的检疫鉴定和疫情监控,为口岸外来有害生物防控和保护我国生态安全提供技术服务和支持。本研究以N.perennans为研究对象,通过生物信息学分析确定β-微管蛋白基因(TUB2)作为靶标进行特异性引物与探针设计,通过引物和探针浓度以及退火温度的优化,构建N.perennans的ddPCR特异性检测体系。研究结果表明,N.perennans的ddPCR检测体系的绝对定量检测低限为0.16 copies/μL,最低基因组DNA检测浓度为10.0 pg/μL,与qPCR方法一致,在定量检测范围内的线性相关系数R2大于0.999,RSD小于25%,说明该检测体系的重复性较好,能够用于进口水果样品中苹果牛眼果腐病原多年明孢盘菌N.perennans的快速精准检测。

PCR检测引起苹果牛眼果腐病的明孢盘菌属3个致病种

苹果牛眼果腐病是由明孢盘菌属真菌(Neofabraea alba、N.perennans、N.malicorticis和Neofabraea undescribed species)引起的,被中国列为禁止入境的检疫性真菌病害。该病菌的寄主植物包括苹果、梨在内的多种蔷薇科果树。根据症状特点和病菌形态特征很难鉴定到种。本研究根据明孢盘菌属β-tublin基因的高度保守性,设计针对明孢盘菌属3个致病种(Neofabraea alba、N.perennans、N.malicorticis)的特异性引物,进行PCR扩增及电泳检测,表明该引物对3个致病种均可扩增出554bp片段,而对其他参试菌株无特异扩增。此外,对PCR产物进行回收、测序及Blast分析,可根据序列比对结果准确地鉴定到3个致病种的水平。

智利首次报道由Neofabraea perennans引起的苹果牛眼果腐病

苹果牛眼果腐病病原包括明孢盘菌属多种真菌:Neofabraea perennans、N.malicorticis、N.kienholzii和N.vagabunda(Phlyctema vagabunda),在欧美苹果产区广泛存在,我国尚未发现。根据《Plant Disease》2020年3月发表的文章,2018年7月,智利中部奥希金斯地区(O'Higgins)的苹果('Cripps Pink')上观察到苹果牛眼果腐病症状,经鉴定引起苹果牛眼果腐病的病原为苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea perennans)。