云南昭通苹果产区苹果花叶病毒的鉴定

研究通过电镜、免疫捕获RT-PCR的方法,对云南昭通表现花叶的苹果病样进行鉴定,电镜观察到直径为26～35 nm,无包膜二十面体的准等轴对称病毒颗粒,与苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)相似。根据苹果花叶病毒的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,提取病毒病样品总RNA,进行扩增、克隆和测序。序列分析表明侵染云南昭通的苹果花叶病病原为ApMV。把本试验鉴定的苹果花叶病毒与已报道的31个苹果花叶病毒分离物进行序列比对和分析。所有的ApMV分离物可以划为3个亚组。其中,亚组Ⅰ、亚组Ⅱ中均有侵染苹果的ApMV分离物。亚组Ⅰ寄主分化较多,亚组Ⅱ多为苹果分离物,而梨分离物单独聚在亚组III。本研究的云南昭通ApMV分离物(ZT)与昆明斗南月季分离物(Kmi2),美国分离物(NCGR9026)、捷克共和国分离物4个分离物(Cz1,Cz2,Cz3,Cz5)、德国分离物(G1)聚为寄主分化较多的亚组Ⅰ,与昆明斗南月季分离物Kmi2的核苷酸序列同源性最高,相似性达到99.8%。本研究为研究云南ApMV分子变异、与寄主的互作和指导防控提供依据。

桃树苹果花叶病(APMV)的RT-PCR检测

本试验比较了4种桃叶片RNA提取方法,建立了RT-PCR桃苹果花叶病检测体系。结果表明:凯基TR-Izol试剂法简便快捷,提取的RNA质量较好,可用于RT-PCR。RT-PCR最适反应体系为MgC l21.5 mmol/L,引物0.5μmol/L,模板1.0μg/50μl,退火温度为43.5℃。采集桃主产区北京、陕西、山东、河北、河南、新疆以及江苏的徐州、无锡、南京等地带叶芽的桃枝样品作为试材,利用RT-CR进行苹果花叶病检测。结果显示,在河北重阳红、山东春雪、无锡朝晖、新疆2号、新疆3号、新疆5号、徐州朝晖发现苹果花叶病毒(APMV)。

中国苹果花叶病病原研究现状分析

我国是世界上最大的苹果生产国,苹果花叶病是苹果栽培中最常见的病毒性病害,在我国各大苹果产区发生普遍。感病苹果叶片常表现花叶、坏死、沿脉形成不均匀分布的条纹等症状,栅栏组织细胞排列松散、叶绿体畸变、膜结构遭到破坏,最终影响叶片光合能力和果实品质形成,严重威胁苹果产业的可持续健康发展。近年来的研究表明,从感花叶病苹果叶片中新鉴定的苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)与我国苹果表现花叶病的相关性较高,可能是引起我国苹果花叶病的主要病原。但也有研究指出,同属于雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus)的苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)和李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)也被认为可能是引起我国苹果花叶病的重要病原。为此,笔者依据前人研究基础及本研究室前期研究结果,系统综述了ApNMV与我国苹果花叶病的关系及其研究进展,并分析了ApMV和PNRSV在我国表现苹果花叶病的苹果样品中的侵染状况,旨在进一步明确引起我国苹果花叶病的主要病原,为该病害的科学防控提供参考。

植保所专家发现苹果花叶新病毒

近日,中国农业科学院植物保护研究所经济作物病毒病害研究团队与中国农业大学以及日本果树病毒专家合作,利用高通量测序技术从苹果花叶样品中鉴定出一种新的病毒,命名为苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV),并证实这种病毒跟我国苹果花叶病高度相关,颠覆了人们对苹果花叶病病原的常规认知。

苹果花叶病的诊断与防治实用技术

苹果花叶病在我国大部分苹果产区均有发生,是一种发生较普遍的病毒病。花叶病除为害苹果、花红、海棠果、沙果、槟子、山楂等果树外,还可为害梨、木瓜等果树。1田间症状该病害主要表现在叶片上,由于苹果品种的不同和病毒株系间的差异,可形成下列几种症状。

苹果花叶病病原鉴定中遇到的问题及其可能的病原探究

【目的】探究苹果花叶病的病原。【方法】从北京、陕西(延安、渭南)、山东临沂共采集140份苹果叶片样品,其中表现花叶症状的111份,无症状的29份。选取一个带有苹果花叶病的样品和一个不带任何症状的样品进行s RNA(small RNA)高通量测序分析。基于高通量测序分析和RT-PCR验证结果,对所有样品进行苹果花叶病毒、苹果茎沟病毒、苹果茎痘病毒、苹果褪绿叶斑病毒和李属坏死环斑病毒5种病毒的RT-PCR检测。【结果】高通量测序分析、验证与田间调查均未发现苹果花叶病毒。其中高通量测序分析结果中:对带有花叶病样品所构建的s RNA文库中与李属坏死环斑病毒同源的s RNA份数(194份)多于健康样品文库中同源的s RNA的份数(4份)。田间调查结果显示:李属坏死环斑病毒在花叶病的样品中带毒率为90%,远高于不带症状样品的7%。【结论】因此,苹果花叶病毒可能不是引起苹果花叶病的唯一病毒病原,李属坏死环斑病毒可能会引起苹果花叶病。

苹果坏死花叶病毒烟台分离物的鉴定与序列分析

采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对在山东省烟台市采集的31份表现花叶症状的苹果幼叶进行了苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)和苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)检测。结果表明,ApNMV的检出率为87.1%,ApMV未检出,表明ApNMV与烟台地区苹果花叶病高度相关。从‘红将军’苹果和‘长富2号’苹果花叶样品中分别克隆出2条ApNMVRNA3基因组序列,GenBank登录号分别为MN911185和MN911186,这2条分离物核苷酸序列长度分别为1783 nt和1785 nt。序列比对结果显示,2条分离物核苷酸序列相似性为91.71%,与已报道的ApNMV RNA3核苷酸序列一致性为89.88%~96.64%。系统进化分析显示,不同来源的ApNMV亲缘关系较近,分离物之间没有表现出寄主特异性和地域分布规律。研究结果为该病的防治、流行规律的判断以及致病机理研究提供了理论依据。

苹果花叶病的识别与防治

一、如何识别 本病的发生首先是从少数枝条开始发病,然后逐渐扩展至全株。症状主要表现在叶片上,由于苹果品种的不同和病毒株系间的差异,以及病势的轻重原因,症状可分为五种类型。 1.斑驳型 病斑呈不定形,产生大小不等的鲜黄色斑点,后期变白,边缘清晰。斑点彼此可联合成大斑,一般从小叶脉上开始发生。这一类型病斑出现最早,而且是最普遍的。

云南省苹果主要病毒与类病毒的调查与检测

系统调查了云南省昭通、马龙与丽江3个苹果产区主栽品种叶部病毒病与果实锈果病的发生情况。结果表明,苹果叶部病毒病与果实锈果病在云南省3个产区都有发生,不同产区与品种发生有明显差异。应用ELISA与RT-PCR方法检测来自以上3个产区苹果主栽品种的主要病毒与类病毒带毒率,结果显示:苹果花叶病毒(ApMV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)与苹果锈果类病毒(ASSVd)分布普遍,在昭通、马龙与丽江3个产区均检出,检出率最高的是苹果锈果类病毒(ASSVd),苹果茎沟病毒(ASGV)只在昭通、丽江产区检出;不同品种对不同病毒与类病毒具有不同的检出率,苹果锈果类病毒检出品种最多,检出率也最高,苹果花叶病毒次之,苹果茎沟病毒与苹果褪绿叶斑病毒分别只在少数品种检出,检出率不高。研究结果为云南省建立无病毒种苗检测体系、指导病毒病防控提供参考。

关于红富士苹果发生花叶病的调查报告

近年,红富士苹果在各地发展很快,但我们调查发现有相当大的部分带有毒病,如花叶病正在发生蔓延,应引起高度重视,及时采取措施,防止其扩大发展。

苹果花叶病毒的RT-PCR检测及其在我国苹果产区的分布

为了开发苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,ApMV)田间样本RT-PCR检测方法和揭示我国ApMV的发生情况,以田间染病苹果组织为材料,对ApMV RT-PCR检测体系中总RNA提取方法、反应体系及程序进行了选择和优化,并利用优化的检测方法对我国苹果主产区13个省的23个市(县)ApMV发生情况进行了检测。以RNA提取改良法提取的田间样本总RNA为模板,RT-PCR优化体系的灵敏度达到能够检测15μg田间样本组织中的ApMV,且在果树整个生长发育时期能够检测1年生枝条树皮组织的带毒情况;ApMV在我国普遍发生,13个省的23个市(县)均检测到了ApMV,采集的327个样本带毒率为80.1%,其中未显花叶症状样本205个,ApMV阳性率为68.3%;在23个地区中,只有河北张家口、河南三门峡和陕西白水样本带毒率低于50%。

果树栽培趋势——无病毒化生产

苹果是多年生植物,一旦受病毒侵染就终身带毒,持久为害。可导致果树生长衰退,产量下降,品质变劣。我国现有果树栽培品种中带毒株率都在60％～80％以上,有些品种如金冠和元帅达100％。

果树病毒病害及解决途径—无病毒苗木的应用

果树病毒病严重危害果品生产,资料表明,目前已报导的苹果、葡萄病毒病,各有30余种。其中,在国内、外,公认的造成严重危害的种类,苹果中有:苹果花叶病、苹果锈果病、苹果绿皱果病、苹果褪绿叶斑病、苹果苦痘病、苹果沟槽病;葡萄中有:葡萄扇叶病、葡萄卷叶病等。根据调查,我国苹果、葡萄的病毒病,已普遍发生。或单一或复合侵染,病株率几近饱和。其共同特点是:树体衰弱,严重时枯死,产量由此锐减,品质变劣,着色不良,糖分下降,不耐贮藏,造成经济效益的严重损失。在苹果中的表现是:产量降低16.9％—40％,果面粗糙,需肥量增加;在葡萄中的表现是:产量下降20％左右,严重时可导致毁园、绝产,同时出现青红粒、大小粒、或熟期不一致,糖度下降3度左右。

基于宏病毒组测序技术的苹果病毒病鉴定与分析

采用宏病毒组测序技术(Virome Sequencing Technology)对河南地区染病苹果树进行病毒检测与分析,从建库测序的苹果叶片中共检测出13种病毒,其中有5种苹果病毒:苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(apple stem pitting virus,ASPV)、苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leafspotvirus,ACLSV)、苹果坏死花叶病毒(applenecroticmosaicvirus,Ap NMV)和苹果绿皱缩相关病毒(apple green crinkle associated virus,AGCa V)。对病毒检测结果中的5种苹果病毒进行RT-PCR验证,扩增后均获得目的条带,与宏病毒组测序检测结果一致,表明宏病毒组测序检测结果精准可靠。根据测序结果设计特异性引物对ASPV全长进行扩增,得到1条长度为9246 nt的ASPV-HN分离物基因组,与NCBI数据库中已报道的19个ASPV分离物的基因组核苷酸序列一致性为75.48%~79.85%;宏病毒组测序拼接所得的两条长度均为6475 nt的ASGV基因组全长基因ASGV-HN1和ASGV-HN2,与NCBI数据库中已报道的18个ASGV分离物的基因组核苷酸序列一致性为79.98%~98.08%。对53份河南不同产区的苹果叶片样品进行苹果花叶病毒(apple mosaic virus,Ap MV)和Ap NMV的检测,结果显示花叶病症样品中均检测出Ap NMV,未检测到Ap MV,表明Ap NMV可能是引起河南地区苹果花叶病的主要病原。

蔬菜、果树的病毒病

蔬菜、果树上的病毒病对生产的影响是很大的。由于人们这方面的知识较少,有时以为是栽培生理上的问题而错诊。如秋季栽培的大白菜播种过早,遇干旱蚜虫大发生,苗长得矮小且皱缩花叶,发病率在60％则影响冬菜的贮藏和销售。这就是蚜虫传播的芜菁花叶病毒(TuMV)引起大白菜花叶病的流行和为害。