茄假单胞菌寄主花生特异性毒性基因的定位

通过对从茄假单胞菌中克隆的 p GX12 52进行亚克隆分析 ,发现含 p GX12 52右边4 .5kb K pn I/ Eco RI片段的亚克隆 p GX140 4仍象 p GX12 52一样能使对花生不致病菌株 T2 0 14在花生上致病 .用转座子 Tn5- lac对 p GX140 4进行了饱和插入诱变 ,一共分离得到 6个在 p GX140 4上不同位置的独立插入突变 ,其中离 p GX140 4右末端约 1.4 kb、2 .2 kb的两个 Tn5- lac插入使p GX140 4丧失了扩大 T2 0 14寄主范围的能力 ,证实 hsv基因位于 p GX140

茄青枯假单胞菌毒性基因的功能分析

分离自花生的茄青枯假单胞菌(Ralstonia solanacearum,R.s)T2015的一段4.5 kb DNA中ORF2和ORF3位于同一个操纵子中.ORF2和ORF3 DNA序列与GeneBank同源性比较分析和T2015及其突变体T2136(ORF2)、T2135/R(ORF3)、T2135(ORF3极性突变体)和互补株T2136/R(ORF2)、T2145(T2135)的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)SDS-PAGE带型比较分析表明:ORF2参与LPS完整的核心的合成;ORF3编码产物在LPS完整的生物合成中起脂质A核心区—O-antigen连接酶作用.菌落形态和植株实验结果表明LPS与病菌菌落形态和其对寄主的致病性有关,而与其在非寄主上引起过敏反应能力无关.

茄青枯假单胞菌T2015致病相关基因突变体的构建

分离自花生植株的茄青枯假单胞菌(Ralstonia solanacearum)T2015的Tn5-lacZ插入突变体T2135是极性突变体.采用现代分子生物学实验技术,首先构建了同一操纵子中ORF2的表达质粒pGX6191,并进行生物学验证,然后采用三亲本结合技术导入极性突变体T2135,得到茄青枯假单胞菌T2015中与致病相关基因ORF3的突变体T2135/R.

茄青枯假单胞菌一个毒性基因突变体的表型分析

花生植株致病性试验表明分离自花生的茄青枯假单胞菌菌株T2015的ORF3突变体T2135/R在花生上的致病性显著降低,说明该基因与病菌在花生上致病有关。T2135/R在培养基中生长繁殖与野生型T2015没有显著差别,T2135/R产生的胞外植物细胞壁降解酶类如纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶与T2015相比没有显著区别,说明该基因与病菌在培养基中的生长繁殖、病菌的胞外植物细胞壁降解酶的产生无关。