基于多指标综合评分法优选茅莓根水提工艺

目的:优选茅莓根的水提工艺。方法:建立茅莓根水提液中表儿茶素含量的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定方法,采用正交设计法,以干膏得率和表儿茶素含量的综合评分为评价指标,考察浸泡时间、加水量、煎煮次数及煎煮时间4个影响因素对茅莓根水提工艺的影响,确定最佳的水提工艺并进行工艺验证。结果:表儿茶素浓度在15.044~300.88μg/mL内线性关系良好(r2=0.9998),平均回收率为101.7%,RSD为2.57%;茅莓根的最佳水提工艺为加10倍量水,浸泡0.5 h,煎煮3次,每次0.5 h;3份茅莓根饮片水提工艺验证试验的综合评分分别为0.78、0.76、0.77分,干膏得率和表儿茶素含量的RSD均小于2%(n=3)。结论:建立的表儿茶素含量测定方法准确、稳定、重复性好,优选的茅莓根水提工艺稳定可行,可为茅莓根的制剂研究与质量控制提供参考。

茅莓根化学成分研究

目的:研究茅莓根的化学成分。方法:采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱和制备高效液相色谱等方法对茅莓根的化学成分进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从茅莓根的95%乙醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为:3β-乙酰氧基-11α,12α-环氧-齐墩果烷-28,13β-内酯(Ⅰ)、3-O-乙酰坡模酸(Ⅱ)、熊果酸(Ⅲ)、3β-乙酰氧基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅳ)、蔷薇酸(Ⅴ)、β-谷甾醇(Ⅵ)。结论:其中,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ为首次从该植物中分离得到。

茅莓根挥发性成分的气相色谱-质谱联用分析

目的建立顶空静态进样快速分析茅莓根挥发性成分的方法。方法采用顶空静态进样,提取茅莓根挥发性成分,对其进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析。结果经GC-MS分析结合NIST数据库检索,鉴定出茅莓根中17个挥发性化学成分。结论茅莓根低温易挥发性成分中,戊醛、乙酸、3-苯基-2-丙烯酸甲酯3种成分约占茅莓根挥发性化学成分的50%以上。

茅莓根和叶挥发油抑菌活性的研究

通过最小抑菌浓度试验,研究茅莓根和叶挥发油的抑菌活性。结果表明,茅莓叶对大肠杆菌、巴氏杆菌有明显的抑菌活性,最小抑菌浓度(MIC)分别为10^(-7)g/mL、10^(-6)g/mL,优于链霉素(10^(-3)g/mL、10^(-5)g/mL)和黄胺类(10^(-4)g/mL、10^(-6)g/mL)。

茅莓根提取物的体外抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶抑制能力研究

为进一步深入了解茅莓根的功能活性,以茅莓根为原材料,利用超声波辅助甲醇溶液提取制备茅莓根提取物(Rubus parvifolius L.root extract,RRE)。测定RRE中的总酚、总黄酮含量,采用DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、超氧阴离子自由基清除能力和铁还原能力评价其体外抗氧化能力,并利用荧光光谱法和紫外光谱法测定其α-葡萄糖苷酶抑制能力和乙酰胆碱酯酶抑制能力。结果如下,RRE的总酚含量为446.392 mg GAE/g,总黄酮含量为638.337 mg Rutin/g;RRE的DPPH自由基清除能力为871.878 mg Trolox/g,ABTS阳离子自由基清除能力为1177.854 mg Trolox/g,超氧阴离子自由基清除能力为419.928 mg Trolox/g,铁还原能力为1827.378 mg FeSO_(4)/g;RRE抑制α-葡萄糖苷酶的IC_(50)值为1.314 mg/mL,抑制乙酰胆碱酯酶的IC 50值为403.347μg/mL。说明RRE具有一定的体外抗氧化能力和抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶的能力,具有开发成天然抗氧化剂、降血糖和防止老年痴呆药物的潜力。该研究可为茅莓资源的开发利用提供科学依据。

茅莓根化学成分研究

目的研究茅莓根的化学成分。方法利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱、半制备高效液相色谱等分离技术。结果从茅莓根的乙醇提取物中分离鉴定19个化合物。通过理化性质及波谱数据分析，其化合物结构分别鉴定为：对羟基苯甲酸（1），4-羟基-3，5-二甲氧基苯甲酸（2），3-甲氧基4-羟基苯甲酸（3），β-谷甾醇（d），齐墩果酸（5），乌苏酸（6），2-OXO-坡模酸（7），坡模酸（8），对羟基苯乙醇（9），psiguaninA（10），2α-羟基熊果酸（11），委陵菜酸（12），2α，3α，19α，23-四羟基乌苏-12-烯-28-羧酸（13），表儿茶素（14），2α，3α，19α，24-四羟基齐墩果-12-烯-28-羧酸（15），2α，3α，19α，24-四羟基乌苏-12-烯-28-羧酸（16），2α，3β，19α-三羟基齐墩果-12-烯-23，28-二羧酸（17），悬钩子皂苷R1（18）和β-胡萝卜苷（19）。结论化合物1—3，5，7—10，12，15～17为首次从茅莓根中分离得到，化合物7，9为首次从悬钩子属植物中分离得到，化合物10，15—17为首次从蔷薇科植物中分离得到。

HPLC法测定茅莓根中表儿茶素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定茅莓根中表儿茶素的含量。方法：采用HPLC法,色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-水溶液（12∶88）,等度洗脱;柱温为25℃;检测波长为280 nm。结果：表儿茶素浓度在0.01～0.6 mg·mL^-1（r=1）范围内与其峰面积线性关系良好。平均回收率（n=9）为97.9%,RSD为1.92%。结论：本方法简便准确,快速可靠,可用于茅莓根药材的质量控制。

茅莓根及其混伪品的DNA条形码鉴定研究

目的茅莓根与同科属其他物种存在混用现象,为保证安全用药,本实验利用ITS2序列对茅莓根及其混伪品进行鉴定研究。方法提取茅莓及其混伪品的DNA,经PCR扩增后测序,通过Codon Code Aligner V3.7.1对测序序列进行质量分析和拼接,基于MEGA5.1中的K2P模型计算茅莓根及其混伪品的种内、种间遗传距离并构建系统聚类树。结果茅莓ITS2序列比对后长度为212 bp,种内最大K2P遗传距离为0.014,存在3个变异位点,平均GC含量为57.42%。基于ITS2序列构建NJ树,茅莓及其混伪品能够表现出良好的单系性,均能相互明显区分。从药材市场购买的23份茅莓根样品,DNA提取和扩增成功率为100%,采用NJ树分析,其中13份药材样品与茅莓聚为一支,其余10份属于其他物种。结论茅莓及其混伪品鉴定难题可用ITS2条形码技术解决。

茅莓叶和根挥发油的主要化学成分

对茅莓根和叶挥发油中主要化学成分进行研究,并进行比较。用水蒸气蒸馏所得的油状物,通过气相色谱—质谱联用技术对其主要化学成分及其含量进行分析。鉴定了叶20种和根10种的主要化学成分。茅莓叶挥发油的主要化学成分除了含量较多的有机酸,还有醇、内酯、醛、酮等其它成分;而茅莓根的主要化学成分是有机酸酯和烷烃。因此推测叶的抑菌活性可能与酚性成分和内酯有关。