荜茇酰胺调控STAT3/HIF-1α通路诱导乳腺癌和乳腺细胞凋亡的机制

目的:探究荜茇酰胺对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺细胞MCF-10A增殖、凋亡和细胞周期的影响及其潜在的分子机制。方法:采用不同浓度荜茇酰胺干预MDA-MB-231、MCF-7、MCF-10A细胞,MTT法检测细胞增殖能力;细胞克隆形成法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western Blot检测细胞中cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin D1、p53、p-JAK2、p-STAT3、HIF-1α、Survivin蛋白表达。结果:荜茇酰胺可呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,而对MCF-10A细胞无明显抑制作用;荜茇酰胺可下调MDA-MB-231细胞p53、Bcl-2、Cyclin D1、p-STAT3、Survivin、HIF-1α及MCF-7细胞p53、p-STAT3、Survivin、HIF-1α蛋白表达,上调MDA-MB-231细胞cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达。结论:荜茇酰胺能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7增殖并诱导其凋亡,其机制可能与负向调控STAT3/HIF-1α通路有关。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路激活自噬通路研究荜茇改善小鼠肺纤维化的机制

目的 研究荜茇是否可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路诱导自噬改善小鼠肺纤维化。方法 将50只小鼠随机分为5组即空白组、博来霉素模型组(BLM组)、低剂量组(LD组)、高剂量组(HD组)、雷帕霉素组(RAPA组)。空白组予等容积生理盐水,其余小鼠通过气管内滴注博来霉素(5mg/kg)诱导建立PF模型,造模2周后开始灌胃给药,LD和HD组给予荜茇(5g/kg、10 g/kg)灌胃,RAPA组予自噬诱导剂雷帕霉素(5 mg/kg),连续给药4周。使用Anires2005系统测量小鼠肺功能即用力肺活量(FVC)和动态顺应性(Cdyn),并检测羟脯氨酸(HYP)含量水平。苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察小鼠肺组织纤维化,免疫组化法和RT-qPCR测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测巨噬效应蛋白(Beclin-1)、自噬相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达水平,并检测通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR相对蛋白表达量。结果 与空白组比较,BLM组FVC和Cdyn水平显著降低,HYP含量升高(P<0.01),α-SMA、TGF-β1蛋白表达增加(P<0.01),自噬蛋白LC3Ⅱ蛋白表达增加(P<0.05),而Beclin-1蛋白含量表达无显著差异,通路蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达增加(P<0.01);肺组织重度异常,大量肺泡萎缩塌陷,上皮细胞数量增多,肺实质化,肺实质内可见炎症细胞浸润,及粉红色纤维组织增生。与模型组比较,荜茇组及RAPA组FVC和Cdyn水平增高,HYP含量下降(P<0.05)。α-SMA、TGF-β1蛋白表达减少(P<0.05),Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加(P<0.05),p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达减少(P<0.05);肺泡结构较为清晰,少量区域上皮细胞增多,肺泡壁增厚,炎症细胞数量明显减少。结论 荜茇可减少胶原纤维沉积,缓解肺纤维化进程,其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活细胞自噬,从而缓解肺纤维化。

荜茇提取物对CCl_(4)诱导大鼠肝纤维化的影响

目的探究荜茇提取物对四氯化碳(CCl_(4))诱导大鼠肝纤维化的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分成空白组、模型组、荜茇提取物低剂量组(16.6mg/kg)、荜茇提取物中剂量组(33.3mg/kg)和荜茇提取物高剂量组(66.7mg/kg),每组各12只。除空白组外,其余各组均给予皮下注射50%CCl_(4)-菜籽油溶液干预8周,建立肝纤维化模型。造模的同时给予模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,荜茇提取物低、中、高剂量组连续灌胃治疗8周。实验结束后,测定大鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷氨酰基转移酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6);苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)、Masson染色观察大鼠肝组织病理变化。提取RNA并采用qPCR技术检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、TNF-αmRNA表达水平;提取蛋白采用Western blot法检测大鼠肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、TNF-α蛋白表达水平。结果HE染色和Masson染色结果可观察到模型组大鼠肝脏纤维增生明显,大鼠血清中ALT、AST、γ-GT升高,血清中炎性介质TNF-α和IL-6分泌增多,CollagenⅠ、α-SMA和TNF-αmRNA和蛋白表达增高,荜茇提取物可明显改善肝纤维化程度,血清中ALT、AST、γ-GT下降,血清中炎性介质TNF-α和IL-6下降,肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、TNF-αmRNA和蛋白水平明显下降。结论荜茇提取物对CCl_(4)诱导的大鼠肝纤维化有明显治疗作用,可通过抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-6表达,可能通过抑制肝星状细胞激活,从而减少CollagenⅠ和α-SMA合成发挥抗纤维化的药效。

基于网络药理学与实验验证研究荜茇抗肺纤维化的作用机制

目的:通过网络药理学及分子对接技术初步预测荜茇抗肺纤维化的活性成分、作用靶点及信号通路,并通过体外实验进行初步验证荜茇抗肺纤维化的作用机制。方法:从TCMSP、Swiss Target Prediction和Pub Chem等数据库中获取药物的有效成分及对应靶点。使用Gene Cards和OMIM数据库收集疾病的相关靶点。利用jvenn在线工具筛选出药物与疾病的交集靶点,通过String数据库及Cytoscape3.9.1软件构建“药物-成分-靶点”与PPI网络图。使用微生信平台对交集靶点进行GO及KEGG富集分析,将富集KEGG前20条通路、核心靶点、药物成分,构建“成分-靶点-通路”网络并进行可视化。利用分子对接技术将药物成分与靶点进行对接,并对其部分对接结果可视化。培养HFL-1细胞,采用MTT法检测各浓度对细胞活力的影响,计算抑制率,从而筛选出最佳的药物浓度。将体外培养的HFL-1细胞分为4组,即对照组、TGF-β1组、TGF-β1+LD组(联合LD组)、TGF-β1+HD组(联合HD组)。采用CCK-8试剂检测24、48、72 h的细胞增殖活性。采用平板克隆形成实验来观察药物对HFL-1细胞克隆形成能力的影响。采用RT-qPCR和Western blot实验观察各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COI-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(COI-Ⅲ)的m RNA和PI3K-Akt信号通路蛋白表达水平。结果:共获得荜茇与抗肺纤维化交集靶点为197个。经拓扑学分析获得核心PPI网络,包含29个节点与199条边;GO功能分析显示,荜茇治疗肺纤维化(PF)生物学过程包括:凋亡过程负调控、信号转导、蛋白质磷酸化等。细胞成分包括:细胞质、核浆、等离子体膜。分子功能包括相同的蛋白结合、丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶活性、蛋白结合等。KEGG信号通路被155条富集,而其中已被证实,与PF密切相关为PI3K-Akt信号通路,富集排名第四“。成分-靶点-通路”网络中PIK3CA、MAPK3、MAPK1、MTOR、SRC、CCND1、EGFR、PRKCA、BCL2、GSK3B链接度最高。荜茇宁、N-(2,5-二甲氧基苯基)-4-甲氧基苯甲酰胺、四氢丹参酮、豌豆素和胡椒碱是关键化合物。分子对接结果显示,除N-(2,5-二甲氧基苯基)-4-甲氧基苯甲酰胺外,其余化合物与10个链接度高的蛋白质结合活性较好。体外实验显示,48、72 h联合LD组增殖能力明显低于TGF-β1组(P<0.05),24、48、72 h联合HD组又显著低于联合LD组。各药物组克隆数量显著减少(P<0.05)。联合LD和联合HD组α-SMA、COl-I、COl-Ⅲm RNA和蛋白表达水平明显低于TGF-β1组。与TGF-β1组相比,两个剂量组中p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:荜茇抗PF作用,其机制可能通过调控PI3K-Akt信号通路而发挥治疗PF作用。

荜茇酰胺抗肿瘤机制的研究进展

近些年,随着一些现代抗肿瘤药物的毒副作用日渐显露,天然植物药逐渐被大家熟知及重视,如紫杉、喜树果、长春花等,其中在植物荜茇中提取的荜茇酰胺,因其独特的药理活性,能广谱杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞无明显毒性作用,逐渐获得众多研究学者的关注,但目前荜茇酰胺具体抗肿瘤机制尚未明确。通过以“荜茇酰胺”“活性氧(ROS)”“抗肿瘤”“Piperlongumine(PL)”“anti-tumour”“JNK”“miRNA”等为相关关键词,在万方数据库、中国知网、PubMed等数据库中查询近10年相关文献,对其抗肿瘤机制进行研究,为临床药物研发及其临床应用奠定基础。

荜茇酰胺诱导胶质瘤细胞铁死亡的机制

目的:通过体外实验探索荜茇酰胺(piperlongumine,PL)对胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的增殖抑制作用及GBM细胞死亡的主要方式、分子机制。方法:用CCK-8试剂盒检测PL对胶质瘤LN229和A172细胞活力的影响;平板克隆实验检测PL对胶质瘤细胞增殖的抑制作用;电子显微镜观察线粒体结构变化;免疫荧光Ki67染色实验检测细胞增殖能力;免疫荧光实验检测4-HNE水平;用相应化验试剂盒检测GSH、MDA水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;CCK-8实验检测各种细胞死亡抑制剂对PL抑制胶质瘤细胞增殖的回复效果;流式细胞术凋亡试剂盒检测Fer-1的回复效果;生信分析寻找靶基因及分子对接评价;WB检测铁死亡相关蛋白;RT-qPCR检测mRNA水平;质粒转染过表达EZH2基因;CHIP实验及qPCR检测H3K27me3蛋白与Keap1 DNA之间的相互作用。结果:PL能抑制胶质瘤细胞LN229和A172的细胞活力;抑制胶质瘤细胞增殖;超微结构显示细胞内线粒体变小,双层膜密度增高;细胞内GSH水平下降,ROS、MDA、4-HNE水平增高;铁死亡抑制剂Fer-1及Lip-1能够回复PL对胶质瘤细胞增殖的抑制作用;荜茇酰胺小分子配体与靶蛋白大分子EZH2结合稳定;铁死亡相关蛋白PTGS2水平增高,Nrf2、xCT、GPX4水平降低。PL靶蛋白EZH2降低,其下游蛋白H3K27me3降低,Nrf2的上游蛋白Keap1增加;EZH2和Nrf2的mRNA水平无明显变化,而Keap1的mRNA水平增加;过表达EZH2后,H3K27me3、Keap1和Nrf2水平呈现相应的变化;CHIP实验表明H3K27me3蛋白与Keap1 DNA存在相互作用。结论:荜茇酰胺通过一个新的EZH2/H3K27me3/Keap1/Nrf2通路诱导胶质瘤细胞铁死亡,有望为GBM的治疗提供一个有潜力的药物。

超声波辅助亚临界水提取荜茇总黄酮工艺优化及其抗氧化活性评价

采用超声波协同亚临界水技术进行荜茇中黄酮类成分的提取条件研究,并对其不同部位的总黄酮提取物进行抗氧化性对比分析。结果表明,超声波协同亚临界水提取荜茇整株总黄酮最佳工艺条件为超声温度50℃,超声功率240 W,超声时间40 min,料液比1∶30(g/mL),亚临界水提取温度125℃,亚临界水提取时间为40 min,在此工艺条件下荜茇整株总黄酮最高提取量为(30±0.05)mg/g。不同部位总黄酮提取物对DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力的大小顺序为果穗>叶>根>茎,DPPH自由基清除率和超氧阴离子自由基清除率的IC50值分别为荜茇果穗37.96、304.33μg/mL,荜茇叶44.55、384.36μg/mL,荜茇根47.68、461.54μg/mL,荜茇茎130.60、487.80μg/mL。采用超声波协同亚临界水提取荜茇整株总黄酮的工艺条件合理,提取得到的总黄酮具有良好的抗氧化性。

荜茇明碱类似物合成与抗宫颈癌HeLa细胞活性研究

本文设计合成了8个荜茇明碱类似物,评价了它们体外抗宫颈癌HeLa细胞增殖活性.发现将荜茇明碱中的Michael加成受体单元部分还原(PL-1和PL-2),抗宫颈癌HeLa细胞增殖活性降低7~8倍;将Michael加成受体单元完全还原(PL-3),基本无活性;而肉桂酸上取代基的改变对活性影响较小.但是,采用碳碳键将荜茇明碱中的Michael加成受体单元与内酰胺连接的类似物PL-8,48 h抗宫颈癌HeLa细胞增殖的IC_(50)值为0.61μM,比荜茇明碱活性高近12倍.这些结果为阐明荜茇明碱抗宫颈癌作用的构效关系提供了一定的基础.

桑黄酚A和荜茇明宁碱的合成和纯度检测

以乙酰丙酮和3,4-二羟基苯甲醛为原料通过Pabon反应合成得到桑黄酚A;以胡椒碱为原料,经水解酸化后得到胡椒酸,后者在偶联剂HATU的作用下与异丁胺缩合得荜茇明宁碱,总产率分别为70%和50%,目标分子的结构得到了NMR和HR-ESI-MS的表征。薄层色谱和高效液相色谱检测其纯度都在99%以上。按上述方法合成桑黄酚A和荜茇明宁碱具有起始原料易得,反应条件温和,后处理简单,纯度高的特点。

Box-Behnken响应面法结合BP神经网络多指标优化胡椒荜茇提取工艺

目的:基于谱效关联及熵权法赋值的Box-Behnken响应面法结合BP神经网络多指标优化胡椒荜茇提取工艺。方法:采用Box-Behnken响应面法考察料液比、提取次数、超声时间对胡椒荜茇超声提取工艺的影响,计算干膏得率、DPPH·清除率,建立胡椒荜茇HPLC指纹图谱并采用灰关联度法确定指纹图谱和DPPH·清除率之间的谱效关系,计算关联度。以关联度对胡椒碱峰面积和指纹图谱共有峰总峰面积进行校正,获得校正后的峰面积。通过熵权法为各评价指标所占的权重赋值,计算综合评价指标。建立BP神经网络模型对试验结果进行目标寻优,最终获得胡椒荜茇的最佳提取工艺。结果:通过Box-Behnken响应面法和BP神经网络模型预测得到的胡椒荜茇最佳提取工艺为:料液比为1∶30(g/mL),提取次数为4次,超声时间为40 min。结论:基于谱效关联及熵权法赋值的Box-Behnken响应面法结合BP神经网络模型可用于优化胡椒荜茇的提取工艺,为胡椒荜茇提取物的制备及相关剂型的研究奠定了基础。

荜茇酰胺抑制肝星状细胞焦亡发挥肝保护作用及关键分子对接研究

目的 探究荜茇提取物中有效成分荜茇酰胺(piperlongumine, PL)在体外对肝星状细胞损伤的保护作用及机制。方法 通过加入脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)造模激活,用不同浓度的荜茇酰胺处理肝星状细胞,采用Western blot法和qPCR法检测细胞中IL-18、GSDMD、NLRP3、caspase-1的蛋白及mRNA表达水平;免疫荧光染色技术显示IL-18、GSDMD、NLRP3、caspase-1在细胞中定位及表达情况;采用分子对接技术分析荜茇酰胺作用的靶点分子。结果体外实验显示,荜茇酰胺能抑制IL-18、GSDMD、NLRP3、caspase-1的蛋白及mRNA表达,呈现浓度依赖性;分子对接的结果验证了其相关性,荜茇酰胺可与IL-18、GSDMD、caspase-1结合发挥作用,与NLRP3结合效果较差。结论 荜茇酰胺可通过阻遏HSC-T6细胞的caspase-1信号通路阻止细胞焦亡发生,从而发挥肝脏损伤的保护作用。

荜茇酰胺通过miR-132-3p调控FOXO1改善脓毒症肾损伤机制研究

目的探究荜茇酰胺(PPL)对脓毒症肾损伤的作用及其可能机制。方法24只雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为四组:Sham组、盲肠结扎穿刺(CLP)组、CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组,每组6只。使用CLP法构建脓毒症小鼠模型,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠分别按5、10 mg/kg剂量灌胃PPL溶液,CLP组和Sham组小鼠灌胃等量生理盐水。随后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)表达情况以评估模型构建,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织形态。使用脂多糖(LPS)刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)构建体外脓毒症细胞模型,随后使用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞活性和凋亡水平,qRT-PCR检测miR-132-3p表达量,蛋白免疫印迹法检测叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白的表达情况。使用双荧光素酶实验检测miR-132-3p与FOXO1靶向结合关系。结果小鼠体内实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠TNF-α[(13.26±2.15)ng/mL比(2.61±0.33)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(6.56±0.84)ng/mL比(1.20±0.13)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(55.35±5.13)ng/mL比(20.85±2.09)ng/mL,P<0.01]表达上升,病理显示肾损伤显著,miR-132-3p表达显著上升[(2.84±0.24)比(1.00±0.03),P<0.01],FOXO1蛋白表达下降;与CLP组比较,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠TNF-α[(9.55±0.57)ng/mL、(6.69±1.13)ng/mL比(13.26±2.15)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(4.79±0.35)ng/mL、(3.24±0.35)ng/mL比(6.56±0.84)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(44.68±3.80)ng/mL、(29.79±4.10)ng/mL比(55.35±5.13)ng/mL,P<0.01]表达下降,病理显示肾损伤有所缓解,miR-132-3p表达显著下降[(2.36±0.28)、(1.44±0.18)比(2.84±0.24),P<0.05或P<0.01],FOXO1蛋白表达上升。在体外细胞模型中,PPL能显著提高LPS刺激下肾小管细胞活性[(67.11±3.48)%、(88.53±4.42)%比(50.23±4.44)%,P<0.05或P<0.01],抑制凋亡水平,并且过表达miR-132-3p会抑制PPL对LPS刺激下细胞的影响。同时,在体外细胞中证实了miR-132-3p对FOXO1的靶向调控作用。结论PPL可能通过miR-132-3p调控FOXO1的表达从而缓解脓毒症肾损伤。

基于灰色关联分析的荜茇体外抗氧化活性谱效关系研究

目的研究荜茇不同极性部位高效液相色谱(HPLC)图谱与其体外抗氧化活性的谱效关系,明确荜茇抗氧化物质基础。方法建立荜茇不同极性部位的HPLC图谱,并采用HPLC-Q-Orbitrap HRMS对共有峰进行识别分析;对INS-1胰岛β细胞进行高糖损伤,建立细胞氧化损伤模型,通过荜茇不同部位干预,并采用荧光酶标仪检测细胞内的活性氧(ROS)水平,筛选荜茇的体外抗氧化活性部位;采用灰色关联度分析荜茇各极性部位HPLC特征峰与抗氧化活性之间的谱效关系,寻找对抗氧化作用贡献较大的成分。结果分别得到石油醚部位1.70 g,乙酸乙酯部位5.18 g,正丁醇部位51.21 g,水提部位3.16 g,得到胡椒碱单晶;细胞内抗氧化活性实验结果表明正丁醇部位的抗氧化活性较好,HPLC图谱表明荜茇共有18个特征峰,灰色关联度结果表明荜茇图谱中峰1(荜茇宁,piperlonguminine),峰7(荜茇环碱,pipernonaline),峰5(pipercallosine),峰6(荜茇壬三烯哌啶,dehydropipernonaline),峰4(墙草碱,pellitorin),峰3(胡椒碱,piperine),峰8(假荜茇酰胺B,retrofractamide B),峰12(brachystamide B),峰11[(2E,4E,13E)-14-(benzo[d][1,3]dioxol-6-yl)-Nisobutyltetradeca-2,4,13-trienamide]和峰10(几内亚胡椒碱,guineensine)与体内抗氧化活性密切。结论本文采用方法科学严谨,能较为全面和准确地反映荜茇中具有抗氧化活性的有效成分,为荜茇的进一步开发利用提供科学依据和理论支持。

荜茇提取物中5个生物碱的含量测定与对垂体后叶素所致大鼠实验性心肌缺血的影响

目的建立荜茇提取物中5个生物碱含量测定方法,并评估该提取物对垂体后叶素所致大鼠实验性心肌缺血的影响。方法采用HPLC法同时测定5个生物碱的含量;采用经舌下静脉注射垂体后叶素造成急性心肌缺血模型,以造模前后T波变化绝对值、心率及其变化百分率为观测指标,评估荜茇提取物大、中、小三个剂量组对大鼠实验性心肌缺血的影响。结果3批荜茇提取物中胡椒碱平均含量为56.1%、49.7%、51.6%;N-异丁基-2E,4E-十八烷二烯酰胺平均含量为4.48%、4.21%、4.28%;几内亚胡椒碱平均含量为0.461%、0.378%、0.396%;荜茇明碱平均含量为1.73%、1.67%、1.70%;胡椒酰胺平均含量为0.554%、0.461%、0.493%。荜茇提取物大、中、小剂量组均有降低T波变化绝对值的作用;除大剂量组在个别时间点有降低心率的作用之外,其它各实验组在各时间点对心率变化率无显著影响。结论所建立的生物碱含量测定分析方法可准确测定荜茇提取物中5个生物碱的含量;药效试验证明荜茇提取物具有较好的抗心肌缺血活性。

荜茇酰胺调控STAT3/HIF-1α通路抑制三阴性乳腺癌细胞增殖

目的探究荜茇酰胺(PL)在体外和体内对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法采用不同浓度PL干预MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(CDKN1A/p21)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、存活素(Survivin)蛋白表达水平;以MDA-MB-231细胞构建裸鼠荷瘤模型并给予PL干预,Western blot检测肿瘤组织中PCNA、p-STAT3、STAT3、HIF-1α、Survivin蛋白表达水平。结果体外实验结果显示,PL呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡;PL下调MDA-MB-231细胞中PCNA、Bcl-2、p-STAT3、HIF-1α及Survivin蛋白表达水平,上调p21蛋白表达水平。体内实验结果显示,PL可抑制裸鼠肿瘤增殖,下调肿瘤组织中PCNA、p-STAT3、HIF-1α、Survivin蛋白表达水平。结论PL能够在体外和体内抑制MDA-MB-231细胞增殖,其机制可能与负向调控STAT3/HIF-1α通路有关。

荜茇的本草考证

荜茇是一味经典的中草药,味辛,性热,具有温中散寒、下气止痛的功效。通过查阅历代本草、现代文献,从荜茇出处、名称、植物形态、产地、性味归经、炮制、功效、主治用量及禁忌等多方面进行梳理考证,以便为现代临床医师和研究者提供理论依据和研究方向。

荜茇酰胺抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨荜茇酰胺对破骨细胞分化的影响及机制。方法通过CCK-8法评估荜茇酰胺对小鼠骨髓来源单核巨噬细胞(BMMs)增殖活性的影响,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评估其对BMMs破骨分化的影响,利用Osteo Assay Surface骨细胞表面培养板研究其对破骨细胞骨吸收能力的影响,并采用qRT-PCR法验证荜茇酰胺处理下BMMs破骨分化过程中核心转录因子活化T-细胞核因子1(NFATc1)和相关破骨特征基因在转录水平的变化。结果2μmol/L及以下浓度的荜茇酰胺对BMMs增殖无明显毒性反应,并且荜茇酰胺可浓度依赖性地抑制BMMs破骨分化过程,在1μmol/L荜茇酰胺干预下几乎无成熟破骨细胞生成。与此同时,荜茇酰胺可显著抑制破骨细胞的骨吸收功能。在机制上,荜茇酰胺可通过抑制NF-κB受体活化因子配体(RANKL)刺激BMMs破骨分化过程中核心转录因子NFATc1的表达,从而下调下游耐酒石酸酸性磷酸酶(ACP5)、破骨细胞相关受体(OSCAR)、组织蛋白酶K(CTSK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)等破骨特征基因的转录,抑制破骨分化过程。结论荜茇酰胺可通过下调RANKL刺激BMMs破骨分化过程中NFATc1的表达,抑制BMMs破骨分化过程及破骨细胞的骨吸收能力。

荜茇明碱抗乳腺癌研究进展

目的探讨近年荜茇明碱抗乳腺癌活性与机制研究进展,为其在乳腺癌中基础研究及临床应用提供新思路。方法以“荜茇明碱”“荜茇酰胺”“乳腺癌”“抗肿瘤”“Piplartine”“Piperlongumine”“Breast cancer”“Antitumor”等为关键词,在中国知网、维普网、万方数据库、谷歌学术、PubMed等数据库中查询2013年1—6月发表的相关文献。结果荜茇明碱可通过上调乳腺癌细胞内ROS水平,介导乳腺癌多个重要的细胞通路及调控因子表达,发挥其促进乳腺癌细胞死亡、阻滞细胞周期、抑制上皮-间质转化(EMT)、抑制血管生成,以及乳腺癌放化疗增效减毒活性。结论荜茇明碱对乳腺癌具有多重特异性杀伤及抑制作用,是一个值得深入研究的抗肿瘤中药单体。

基于UPLC-Q-Exactive-MS技术鉴定蒙药荜茇的化学成分

目的建立一种快速分析荜茇化学成分的方法,初步揭示荜茇的药效物质基础,为该药后续研究提供参考。方法采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)对荜茇提取物进行分析。色谱条件:色谱柱为Welch Ultimate C18(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~5 min,55%A,5~25 min,55%~90%A,25~50 min,90%~100%A);流速1 mL·min^(-1);检测波长272 nm;柱温30℃;进样量20μL。质谱条件:离子源为HESI源;正、负离子模式同时检测;检测方式均为Full-MS/dd-MS2;扫描范围m/z 110~1000。使用Compound Discoverer 3.0软件对质谱数据进行初步筛查,获得化合物的保留时间、准分子离子峰的精确质量数及二级碎片等信息,再查阅相关数据库和文献与之比对分析,以此推断化合物结构。结果根据保留时间和多级质谱碎片比对,初步鉴定出荜茇中的57个化学成分,包括16个A型酰胺类生物碱、13个B型酰胺类生物碱、9个C型酰胺类生物碱、10个D型酰胺类生物碱、3个E型酰胺类生物碱、6个O型化合物。结论该方法有助于揭示荜茇的药效物质基础,可为进一步的药理学和活性机制研究提供参考。

荜茇酰胺抗肿瘤研究进展

大量体内及体外研究发现荜茇酰胺(piperlongumine)可抑制乳腺癌、胃癌、肺癌、头颈部鳞状细胞癌等多种癌细胞的生长,此外还具有抗炎、抗真菌、抗血小板聚集、抗焦虑和抗抑郁等多种药理活性。荜茇酰胺对肿瘤细胞具有特异性毒性作用,但几乎对正常细胞、组织和器官无毒,也因此荜茇酰胺的抗肿瘤及相关机制研究是当前的热点。该文对荜茇酰胺抗肿瘤作用及分子机制进行综述,以期为该活性成分的药理学研究提供参考。