茶菊茎尖分生组织高效脱毒再生体系优化

【目的】筛选适宜热处理时间和脱毒剂,优化茶菊茎尖分生组织高效脱毒再生体系,解决脱毒苗获得率低的问题。【方法】以6个茶菊品种无菌苗为材料,采用昼/夜40℃/32℃变温、化学脱毒剂及其组合预处理无菌苗,比较茎尖分生组织的出愈率、再生频率和平均再生芽数及不同方法脱毒效果。【结果】茎尖分生组织再生频率在不同品种茶菊间差异显著,并以‘婺源皇菊’最高(54.77%);茎尖分生组织再生在不同昼夜变温热处理时长间差异显著,以‘杭白菊’、‘七月雪’再生效果最好。‘婺源皇菊’茎尖分生组织再生在脱毒剂水杨酸、利巴韦林、脱落酸处理下均受到抑制,在水杨酸、利巴韦林结合变温热处理下得到促进,在高浓度脱落酸结合热处理下受到严重抑制,且10μmol/L水杨酸结合热处理的促进效果最好。在适宜热处理、化学脱毒剂结合热处理可获得茶菊完全脱毒苗。【结论】10μmol/L水杨酸浓度结合40℃/32℃昼/夜变温预处理40d能显著提高茎尖分生组织再生频率,获得脱毒苗。

激素及光照对甘薯茎尖分生组织培养的影响

根据不同基因型甘薯茎尖分生组织在不同激素水平的生长反应，将４个河南主栽甘薯品种分为３类：激素不敏感易成苗型、激素敏感易成苗型和激素不敏感难成苗型。光照时数不是甘薯茎尖培养成苗的限制因素，以不低于１４ｈ／ｄ为好。

以棉花茎尖分生组织为受体进行基因枪轰击转化的研究

以棉花茎尖分生组织为受体进行基因枪遗传转化,在不受宿主基因型范围和操作时间的限制等方面优于农杆菌介导法和花粉管通道技术。影响棉花茎尖分生组织基因枪遗传转化率的因素较为复杂,轰击前,外植体制备需考虑茎尖分生组织的取材时间、下胚轴保留的长度、外源生长调节剂及活性炭的使用量,以保证其正常生长;轰击后,抗生素筛选的浓度、筛选培养基的转换时间和抗性苗的壮苗也会影响转化效率;此外,DNA和钨粉或金粉的质量、基因枪参数及操作等对转化效果都有一定的作用。除对影响茎尖分生组织基因枪转化率的因素分析以外,还对近年来在棉花茎尖分生组织遗传转化中的最新动态进行了综述,并对目前存在的问题加以讨论。

提高甘薯茎尖分生组织培养诱导率的研究

本文试图通过添加植物激素来提高甘薯茎尖分生组织第二次培养的出苗率。试验结果发现，添加一定浓度的吲哚丁酸（ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ）和赤霉素（ＧＡ３１．０ｍｇ／Ｌ）可以明显提高植株再生率。

EMS诱变甘蔗茎尖分生组织的初步研究

为探索EMS对离体培养的甘蔗茎尖进行化学诱变的合适浓度和时间组合,以‘新台糖22’和‘粤糖93-159’甘蔗茎尖分生组织为材料,研究不同浓度(24、48、72μmol/L)、不同时间(2、4 h)诱变处理对茎尖分生组织的成活率、鲜重增重量、分化率及分化成苗情况的影响。结果表明:诱变处理后2个基因型的甘蔗茎尖分生组织成活率、每克鲜重增重量、分化率以及成苗的数量和质量都随着EMS处理浓度的升高和处理时间的延长而下降,2个基因型甘蔗茎尖经诱变处理后半分化EMS浓度均小于半致死浓度。综合成活和分化情况,适合‘新台糖22’茎尖分生组织的EMS诱变处理为48μmol/L处理2 h或24μmol/L处理4 h;适合‘粤糖93-159’茎尖分生组织的EMS诱变处理为72μmol/L处理2 h或48μmol/L处理4 h。

香石竹茎尖分生组织培养的研究

对香石竹(Dianthus caryophyllus)进行了茎尖分生组织快速繁殖培养及其影响因素的研究。结果表明,大花香石竹比散枝香石竹接种成活率高,且以顶芽为外植体,在MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.4 mg/L上培养的丛芽分化率最高,达到87.5%。将顶芽、带腋芽的茎节、不带腋芽的茎节或茎段分别接种在MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.4 mg/L上培养,顶芽分化的芽数最多。光照12 h/d对香石竹丛芽生长有利。

生长素类物质对甘薯茎尖分生组织培养成苗的影响

以豫薯4号和豫薯12号为试材,研究了生长素类物质(IBA和NAA)、温度和光照时间对转移后甘薯茎尖分生组织培养成苗的影响。结果表明,适宜甘薯茎尖分生组织培养成苗的温度为28℃,光照时间以不低于14h·d-1为好,培养基中加入0 1～0 5mg/L的IBA(或NAA)有利于甘薯茎尖分生组织培养成苗,IBA的效果优于NAA。与不加任何生长素类物质的MS培养基相比,添加IBA0 5mg/L的MS培养基可使甘薯茎尖分生组织培养成苗率提高9 9%～15 4%,平均成苗天数缩短3 3～8 5d。IBA(或NAA)浓度过高时(达到1 0mg/L),甘薯茎尖外植体形成大量的愈伤组织,导致成苗率降低,平均成苗天数延长。

百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立

以‘蓝色大花’百子莲（Agapanthus praecoxssp.orientalis‘Big blue’）茎尖分生组织为材料,对比研究了不同提取与裂解方法制备蛋白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋白双向电泳体系（Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）的干扰。提取过程采用TCA/丙酮沉淀法和超声波破碎法;蛋白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟（Phenylmethanesulfonyl Fluoride,PMSF）和乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA）、Cocktail（广谱性）蛋白酶抑制剂、核酸酶Nuclease Mix和2-D Clean-Up蛋白纯化试剂盒。制备的各蛋白样品经过7cm IPG（pH 3~10）胶条上样、电泳后发现,使用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白,裂解液中加入Cocktail蛋白酶抑制剂裂解后,用2-D Clean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶电泳图谱效果最好,获得蛋白点数量最多,且蛋白等电点pI主要分布于4~8之间。随后,应用分辨率更高的24cm IPG（pH 4~7）胶条进行电泳效果的验证,蛋白点在凝胶的2个方向上均得到了较好地分离,经过ImageMaster 2-D Platinum5.0软件分析后共检测到有效蛋白点820个。本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝胶电泳体系,为后续开展百子莲属植物蛋白质组学研究提供了重要的技术保障。

甘薯茎尖分生组织培养及快繁技术的研究

以甘薯品种豫薯12的茎尖分生组织为材料,研究了不同培养基对其组培快繁的影响.结果表明:豫薯12最适基本培养基为MS培养基;在诱导茎尖成苗单因子实验中,最适宜的6-BA浓度为0.5 mg/L,最适宜的NAA浓度为0.01mg/L;在双因子实验中,诱导成苗最适宜培养基是MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.01mg/L;在茎段增殖实验中,最适宜的增殖培养基是MS+GA30.1mg/L+NAA 0.5mg/L.

黄瓜矮化突变体营养芽茎尖分生组织分化动态

对黄瓜矮化突变体D0462进行了形态学观察和茎尖分化的动态显微观察。结果表明:D0462是多分枝的矮生植株,营养芽常着生于花序轴(簇)之上,营养芽一旦形成都能够伸长形成侧枝,不存在休眠或抑制伸长的现象;茎尖分生组织分化经历初生期、伸长期和结节期,部分结节期茎尖由营养顶端转变为生殖顶端,茎尖分生组织直径/高度的值在3个时期逐渐减小;D0462茎尖分生组织分化进程比普通蔓生黄瓜D9419快,子叶出土后15d茎尖分生组织进入生殖生长阶段。

羊草营养枝茎尖分生组织的分化动态研究

以石蜡切片法进行的研究结果表明,6月下旬以后的羊草营养枝茎尖分生组织处于初生期、伸长期和结节期。茎尖进入生殖生长期的比例占75%左右;初生期的茎尖是宽度大于高度的扁平拱形,进入生殖生长期后茎尖高度的发育速度明显快于宽度,使茎尖逐渐成为圆锥形。详细报道了羊草营养枝茎尖分生组织的分化状态,得出了部分茎尖分生组织已完成由营养生长向生殖生长的转变、部分羊草营养枝是"没有抽穗的生殖枝"的结论。

植物茎尖分生组织中的干细胞调控机制研究进展

茎尖分生组织干细胞是植物地上部分生长发育的基础。复杂的基因调控网络和信号传导途径使干细胞维持着细胞分裂和分化的平衡。对拟南芥的研究显示,WUS/CLV3反馈抑制调节机制在干细胞基因调控网络中发挥着重要作用,且在植物中具有一定保守性;大量转录因子和染色体重塑因子在转录水平通过调控WUS从而对干细胞活动进行调节;植物生长调节物质也参与调控茎尖分生组织的生长活动,主要通过KNOX基因家族发挥作用。茎尖分生组织的分子调控网络中存在大量反馈抑制调节途径,这种调节形式反映了植物体的动态调节能力和平衡维持机制。

野生枸杞茎尖分生组织再生研究

以茎尖分生组织为外植体,在MS附加各种不同浓度激素组合的培养基上诱导丛生芽,进而诱导生根,建立了枸杞茎尖分生组织高效再生快繁体系。IAA+6-BA激素组合较IAA+KT组合的直接萌发率和成苗率高,分别达94.0%,81.3%,最高组合为MS+IAA 0.10 mg/L+6-BA 1.00 mg/L;MS+IAA 0.50 mg/L+6-BA0.10 mg/L适于丛生芽的诱导及增殖,增殖倍数达7.5;1/2MS+IAA 1.50 mg/L有利于生根,生根率最高达100%。

植物茎尖分生组织分化调控机制研究进展

茎尖分生组织是位于植物顶端具有持续分化能力的组织,通过细胞分裂、分化产生茎、叶和花等器官,形成植株地上部分。茎尖分生组织在分化过程中受外界环境因素、内源激素水平和分子调控等影响,表现出明显变化。该文综合国内外近年来有关茎尖分生组织分化调控的研究进展,从茎尖分生组织的形态结构和环境影响因素,以及激素调控和分子调控等方面,对茎尖分生组织分化活动的研究进行综述,并对目前研究现状存在问题及未来研究方向进行了分析和展望。

基因枪轰击转化棉花茎尖分生组织影响因素的探讨

以农大KB18的茎尖分生组织为受体材料,利用基因枪轰击法将植酸酶基因(PhyA)导入棉花茎尖分生组织,经过再生、筛选、分子检测等过程获得若干转基因植株。通过研究碳源、外源激素、活性炭、轰击距离和轰击次数以及茎尖的恢复培养与抗性筛选等,建立了较为完善的棉花基因枪茎尖转化体系。结果表明,植株再生率与再生培养基的成分,如激素的有无、活性炭的含量和碳源等有关,轰击距离以及筛选程序中卡那霉素的起始筛选时间、筛选浓度和浓度梯度等因素对转化周期和转化率有直接影响。

甘薯茎尖分生组织培养

以豫薯7号为材料研究甘薯茎尖分生组织培养技术，结果表明，甘薯茎尖分生组织培养受茎尖微切叶原基多少和培养基类型的影响较大。做切2个对原基比1个叶原基有利于成苗．在MS附加IBAO．5mg／1和GAO．5mg／1的培养基上进行二次培养．能显著提高甘薯再生植株的成苗率。

紫甘薯茎尖分生组织诱导培养基的优化研究

甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)是重要的粮食及工业原料作物,同时也是生产燃料乙醇的理想原材料。我国是甘薯种植大国,种植面积居世界首位,据联合国粮食及农业组织(FAO)统计资料显示,2020年我国甘薯收获面积达到225万公顷,其在国家的粮食安全和能源安全中扮演着重要角色。紫甘薯,又称“黑红薯”,是一种薯皮紫黑色、薯肉紫红色的甘薯品种。其富含丰富的花青素类色素、多糖、蛋白质、维生素、矿质元素等多种营养成分,具有清除自由基抗氧化、抗肿瘤、预防和治疗心血管疾病、抑菌等多种药用功能,国内外越来越关注对紫甘薯的研究。甘薯属于营养繁殖,在种植过程中容易受到病毒侵染。目前,国内外尚未培育出高抗病毒病的优良品种,也无行之有效的化学防治方法,利用茎尖分生组织离体培养技术生产脱毒种薯(苗)是目前防治甘薯病毒病最有效的措施。而在茎尖脱毒培养过程中,培养基中添加的植物生长调节剂种类和配比是影响茎尖成活重要因素。本研究以紫甘薯“京薯6号”为供试材料,采用正交试验方法,比较了植物激素6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)和吲哚乙酸(IAA)不同组合及浓度对紫甘薯茎尖诱导的作用及影响。

高唐栝楼茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究

[目的]采用茎尖分生组织培养脱毒技术培育高唐栝楼的脱病毒试管苗。[方法]对添加不同浓度外源生长调节剂的培养基进行一系列优化试验,筛选出高唐栝楼脱毒试管苗最佳繁殖培养基。[结果]在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.10 mg/L KT培养基中诱导效果较好,技术上达到了快速繁殖规模生产的要求。经反复的病毒检测,证明脱毒试管苗脱病毒彻底。[结论]最终获得了高唐栝楼茎尖培养脱毒与诱导、增殖和生根的培养基,及其生长所需要的外部环境条件和相关配套技术。