茎环RT-PCR检测马立克氏病毒感染鸡相关miRNA方法的建立

本研究旨在建立一种检测马立克氏病毒人工感染鸡相关miRNA表达变化的RT-PCR方法,探讨该方法在miRNA定量检测方面的应用价值。试验选择6个具有典型肿瘤结节的马立克氏病毒感染脾脏样品作为研究材料,同时采用6个正常鸡的脾脏样品作为对照材料。利用特异的茎环反转录引物以及miRNA上下游引物对gga-miR-181a进行基于SYBR GreenⅠ的荧光定量PCR检测,并以U6为内参基因、2-ΔΔCt法检测gga-miR-181a的相对表达量。结果,在马立克氏病毒人工感染鸡的脾脏和正常鸡的脾脏中成功检测出gga-miR-181a-1的表达。证明茎环RT-PCR法能用于检测马立克氏病毒人工感染鸡的相关miRNA,并具有准确、快速、节约成本的优点。

茎-环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计

本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.

陆地棉种子发育过程中microRNA的挖掘与功能研究

microRNAs(miRNAs)广泛参与调控植物的生长和发育,但这类分子是否对棉花胚珠和纤维的生长发育起到重要的作用,还有待验证。对这些小分子的认识,一般先要从序列信息的获得上开始。应用基因芯片对TM-1+5 DPA(开花后5 d)胚珠总RNA进行了miRNA的筛选研究。结果显示,含有352个探针的芯片成功钓取到199个陆地棉miRNA,其中绝大多数为首次报道。此外,对miR399研究发现,它与纤维中磷的含量变化相关;miR169可能与干旱应激反应有关。