番茄miRNA的茎环qRT-PCR方法验证

本研究采用SYBR Green染料的茎环q RT-PCR方法,以mi R159和mi R172为例,利用番茄叶片的总RNA作为模板,设计mi RNA的茎环引物、特异上游引物、通用下游引物,使用茎环荧光定量PCR法定量检测mi RNA表达量在番茄中的可行性。通过分析扩增曲线、熔解曲线,制作标准曲线,以及对PCR产物的克隆测序,结果表明该方法可以用于番茄mi RNA的定量检测,并且具敏感性高、特异性好、操作简单、节约成本、模板用量少的优点。Trizol法和试剂盒法提取的总RNA在后续实验中几乎没有差异,但Trizol法更为经济,有效率。Mi RNAs在植物的生长发育过程中起着重要的作用,本研究为番茄mi RNA的深入研究奠定了基础。