向日葵黑茎病菌分离鉴定及其RFLP分析

【目的】对新疆近期发生的向日葵黑茎病进行病原菌分离鉴定,并对该菌进行RFLP分析。【方法】用常规分离培养法从田间采集的向日葵黑茎病病株获得致病菌,观察该菌的形态学特征;用PCR法对该菌ITS区进行扩增和测序,并与向日葵茎点霉黑茎病菌进行分子比对,明确二者的同源性;选取10种限制性内切酶对该菌的ITS区PCR产物进行RFLP分析。【结果】该菌的形态学特征为茎点霉属真菌,与向日葵茎点霉黑茎病菌的同源性达到99%以上,说明该致病菌为向日葵茎点霉黑茎病菌Phoma helianthi Taberosi。通过RFLP分析确定了该病菌的酶切位点。【结论】该致病菌的形态学和分子生物学鉴定结果表明,向日葵黑茎病由向日葵茎点霉黑茎病菌引起。

烟草空茎病的发生原因及防治技术

烟草空茎病,作为烟草种植业中的一大挑战,其广泛分布与严重危害对全球烟草生产构成了重大威胁。该病害主要由青枯雷尔氏菌引起,其复杂的发病机制和多样的传播途径使得病害防控成为一项复杂而艰巨的任务。本文旨在全面剖析烟草空茎病的发生根源,从病原菌的生物学特性、环境因素、栽培管理以及品种抗性等多个维度进行深入探讨,并结合当前的研究成果与实践经验,提出一系列综合性的防治技术策略,以期为烟草产业的可持续发展提供有力的技术支持。

烟草空茎病病原菌的分离与鉴定研究

烟草是云南省重要的经济作物。空茎病常发于烟草的成株期,病原菌从打顶造成的伤口侵入,首先导致伤口变黑腐烂,最终致使烟草髄部腐烂发臭,变成空腔,叶片脱落成空杆,造成大量经济损失。空茎病致病细菌种类较多,为明确云南省空茎病的致病菌种类,本研究以烟草茎杆为样品采用组织分离法获得病原细菌,然后根据柯赫氏法则,采用打顶造伤-喷湿病原菌的方法室内回接鉴定其致病性,并从回接的发病部位重新分离得到该病原菌,最后采用分子生物学手段对 16S rRNA 序列同源性进行分析确定病原菌种类。的菌落为灰白色,圆形或不定型。16S rRNA 基因序列同源性分析显示该病原菌为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种(Pectobacterium carotovorum subsp. carovorum)。该研究获得了一株临沧烟草空茎病病原细菌,为病害的防治提供重要参考。

国内新病害——向日葵茎点霉黑茎病在新疆伊犁河谷的发生初报

2005～2007年在新疆伊犁河谷发现一种蔓延迅速、危害严重的向日葵病害。经鉴定。确定其为国内新病害——向日葵茎点霉黑茎病。病原菌无性态分类地位为半知菌亚门，茎点霉属，种名为：Phoma macdonaldii Boerma；有性态分类地位为子囊菌亚门。小球腔菌属，种名为：Leqtosphaeria lindquistii Frezzi。该病目前已在伊犁河谷5县1市的向日葵产区普遍发生，造成严重危害。根据2007年在严重发病县的调查，该病在特克斯县发病面积达2625hm^2，田间发病率平均为47％，绝收面积达267hm^2；新源县发病面积达1333hm^2，平均田间发病率为35％；绝收面积达133hm^2。严重受害的向日葵品种有瑞特姆、JN-2519，M0314，KWS303。

向日葵黑茎病发生规律及综合防治技术研究

【目的】向日葵黑茎病Leptosphaeria lindquistii Frezzi,无性态:Phoma macdonaldii Boerma是国内新发生的检疫性病害,严重威胁着我国向日葵产业的发展。对新疆向日葵黑茎病发生分布、危害、病原菌、症状及发病规律等进行了综述,提出了防控对策。【结果】明确了向日葵黑茎病在新疆的发生分布范围、症状特征、病原形态和发病规律。【结论】向日葵黑茎病现分布新疆伊犁哈萨克自治州、博尔塔拉蒙古自治州、昌吉回族自治州9县3市;田间症状为叶柄处黑色椭圆形病斑,造成植株死亡;日照时数与病情指数呈负相关,与降雨次数无关,与降雨量呈正相关,与日照时数呈负相关;加强以植物检疫和种植抗病品种为主的防控措施,能控制其发生蔓延危害。

法国向日葵种子中向日葵黑茎病菌的首次截获与检测

从法国进境向日葵种子中分离到3株疑似向日葵黑茎病的菌株,对所有菌株进行形态学、致病性测定和分子序列比对分析。分离菌菌落乳白色或象牙色至灰白色,有大量黑褐色分生孢子器产生,分生孢子器球形至扁球形,内含无色单胞、卵圆形分生孢子,有明显或不明显油球;针刺接种4片真叶向日葵幼苗的下胚轴,7～9d后茎部产生典型黑茎病黑色椭圆形病斑,病斑上着生黑色分生孢子器;菌丝DNA用ActF1/R1和ITS1/ITS4扩增,序列与NCBI基因库中P.macdonaldii序列相似性为98%～100%。形态学、分子生物学及致病性检测结果显示,截获的3株菌均为向日葵黑茎病菌。

新疆伊犁河谷发现向日葵黑茎病

2005～2007年在新疆伊犁河谷发现一种蔓延迅速、危害严重的向日葵病害，典型症状是病斑最初发生于叶柄基部，在茎秆上形成黑色椭圆形大病斑。经病原鉴定，病原菌无性态分类地位为半知菌亚门，茎点霉属，种名为Phoma macdonaldii Boerma；有性态分类地位为子囊菌亚门，小球腔菌属，种名为Leqtosphaeria lindquistii Frezzi，确定其为国内新病害——向日葵黑茎病。该病目前已在新疆伊犁河谷5县1市的向日葵产区普遍发生，造成严重危害。

基于ITS基因、Actin基因和EF-1α基因序列的新疆向日葵黑茎病菌亲缘关系分析

对不同地理来源的向日葵黑茎病菌的ITS基因、Actin基因和EF基因进行测序,结合GenBank中的同源序列,对这3种基因的序列进行比对分析和系统进化分析,探讨ITS、Actin以及EF基因用于向日葵黑茎病菌的种内鉴定以及其系统进化的可行性。结果表明:ITS序列和Actin序列比较保守,无法作为种内鉴定的依据。EF基因序列其变异几率比较高,不同地理来源的菌株在EF-1α基因序列上表现出了比较大的差异,可以用于种内亲缘关系的研究。

3种杀菌剂拌种防治向日葵黑茎病药效试验研究

进行了3种杀菌剂对向日葵黑茎病的拌种药效试验,结果表明,3种药剂拌种后对向日葵出苗安全,不产生药害;各个处理的防效均随着向日葵生育进程的推进而下降,以出苗后35 d防效最为理想,此时2.5%咯菌腈FS 11.25 mL/hm2、2.5%咯菌腈FS 9 mL/hm2和50%多菌灵WP 13.5 g/hm2的防效为71.7%～83.4%,显著高于50%多菌灵WP 9 g/hm2、70%甲基硫菌灵WP 13.5 g/hm2和70%甲基硫菌灵WP 9 g/hm2,经方差分析证明处理间差异达到显著水平。

马里兰烟空茎病防治技术研究

为探索适宜湖北省五峰烟区马里兰烟空茎病的防治方法,从移栽方式、药剂施用、施肥配比等多方面开展了马里兰烟空茎病的田间防治试验。结果表明,膜下移栽和井窖式移栽马里兰烟空茎病的病情指数较常规大田移栽分别降低了7.84和9.00,而膜上移栽效果不佳。在参试药剂中,凡士林涂抹、甲基托布津750倍喷雾效果较好,防效分别为82.18%、82.95%,农用链霉素2 000倍喷雾和塞菌铜600倍喷雾效果略差,防效分别为80.02%和79.76%;农用链霉素40倍涂抹防治效果不理想,仅为34.87%。在施纯氮180kg/hm2时,空茎病的病情指数最低,为0.83,此时适宜的氮磷、氮钾配比分别为1∶1、1∶3。在大田生产中,采用膜下移栽和井窖式移栽方式,通过合理施肥,再配合甲基托布津750倍和农用链霉素2 000倍喷雾的化学防治手段,可以达到综合防治马里兰烟空茎病的目的。

向日葵黑茎病双重PCR检测实用化研究

本研究采用从新疆田间分离经ITS序列扩增、测序鉴定了的黑茎病菌株BXC1为供试菌,对其双重PCR分子检测、灵敏度试验以及模拟带菌组织的分子检测,再将此菌株采用不同接种方式人工接种2种向日葵品种幼苗,待其出现典型症状时,对其进行双重PCR实际检测。结果表明,无论是黑茎病菌基因组DNA、还是其与向日葵基因组的混合DNA都能扩增出真菌的ITS区特异带(580 bp)和黑茎病菌Actin基因的特异带(255 bp),且混合DNA还能扩增出向日葵的ITS特异带(约740 bp),说明向日葵黑茎病菌的此种双重PCR分子检测方法具有很好的特异性;梯级稀释真菌DNA或向日葵基因组DNA或其混合DNA模板的双重PCR检测表明,在20μl PCR反应体系中,黑茎病菌DNA的检测灵敏度均为0.05 ng/μl;接种了BXC1的向日葵,其带菌组织DNA均能检测出向日葵与黑茎病的ITS序列以及黑茎病Actin基因特异条带。这些结果表明,此向日葵黑茎病菌的双重PCR检测体系特异、可靠、便捷,可对带菌向日葵组织进行直接快速分子检测。

播期和种植密度对伊犁地区向日葵黑茎病及白锈病发生的影响

以向日葵油用型品种S606为试验材料,在自然发病条件下,2012~2013年连续两年在新疆伊犁地区新源县种植不同播期和不同密度的向日葵,通过调查向日葵发病情况,研究不同播种时期和不同种植密度对检疫性新病害――向日葵黑茎病、白锈病发生的影响。结果表明新疆伊犁地区向日葵最佳种植时间为5月中旬,此期间播种的向日葵产量较高,黑茎病病情指数较低;播期与白锈病的发生程度未见相关性。伊犁地区向日葵最佳种植密度为株距30 cm,行距50 cm（4500株/667m2）,此密度下种植的向日葵产量较高,白锈病病情指数较低;种植密度与黑茎病的发生程度未见相关性。

外来入侵有害生物——向日葵黑茎病发生与气象因子关系的研究

通过分析向日葵黑茎病发生与气象因子的关系,确定影响向日葵黑茎病的主要气候生态因子。结果表明:由已知的病情指数和气象资料建立回归方程,得出降雨量与病情指数呈正相关(y=-28.2+0.55x);得出气温与病情指数呈负相关(y=191.57-7.67x);得出日照时数与病情指数呈负相关(y=198.41-0.551x)。当天气晴朗、日照充足、空气交换加快不利于向日葵黑茎病发生发展。当种子带菌量、重茬种植、品种抗性、地块选择、栽培管理等可控条件一定时,气象因子是向日葵黑茎病发生发展的主导因素,同时建立了向日葵黑茎病发生程度气候预测模型Y=-36.52-4.9x1+0.708x2+0.04x3,对向日葵黑茎病在新疆的预测发生有重大意义。

4种杀菌剂对向日葵黑茎病的田间防治效果

选用4种杀菌剂对向日葵黑茎病进行田间防效试验,结果表明,10%苯醚甲环唑WG1000倍液、50%多菌灵WP500倍液、70%甲基硫菌灵WP800倍液的防效较高,分别为77%、73.4%、72.6%;经方差分析显著优于防效次之的50%嘧菌酯SC2000倍液(防效65.5%)和其他2种药剂。建议生产上使用10%苯醚甲环唑WG1000倍液、50%多菌灵WP500倍液、70%甲基硫菌灵WP800倍液。

青花菜花球黑茎病发生的影响因素初步研究

通过实施不同土壤肥力条件、施硼与否以及不同施硼方式、不同栽培品种和采收时期等田间试验处理 ,研究了这些因素对青花菜 (BrassicaoleraceaL .var.italicaPlench)花球黑茎病发生的影响 ,结果提示该病可能属病理性病害 ,在生产中应注意保持土壤较高肥力 ,将有助于降低黑茎病发生和危害 ,此时不做施硼推荐 ;而在较低土壤肥力条件下 ,追施硼肥可降低此病危害。此病对不同品种间的危害不同 ,可考虑进一步鉴定筛选品种间的抗、耐病差异 ,选用抗、耐病品种。另外 ,适当推迟播种期 ,相应延长采收期可能有利于降低黑茎病危害。

烟草空茎病发生动态的地统计学分析

运用地统计学方法研究了各生育期烟草空茎病的发生动态。结果表明,各生育期烟草空茎病田间分布的最佳拟合模型均为线性有基台模型,表现为聚集分布。烟草空茎病在苗期、团棵期、旺长期的变程保持在15.53 m,成熟期变程迅速增至35.66 m,表明该病害在烟草生长过程中没有蔓延,而是在成熟期暴发。

五峰马里兰烟空茎病病原鉴定

在实验室对从五峰马里兰烟空茎病病株分离的病原菌进行了形态学观察、致病性鉴定和部分生物学特性研究。结果表明,分离物在LB培养基上的菌落淡黄色,圆形或不定形,表面光滑,微凸起,半透明,边缘整齐。在电镜下观察,菌体短杆状,大小（0.5~1.0）μm×（2.2~3.0）μm,周生鞭毛2~8根,无荚膜,不产生芽孢,革兰氏染色阴性。在结晶紫果胶酸盐（CVP）培养基上产生杯状凹陷。病菌能在5%盐浓度下生长,能在37℃下生长,能利用蔗糖发酵产酸,兼性厌氧,能利用柠檬酸盐,但不能产生吲哚。结合该菌形态学特征、致病性和部分生物学特性,初步确定引起五峰马里兰烟空茎病的病原为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种（Pectobacterium carotovora subsp.carotovora）。

新疆新源县32个向日葵品种对黑茎病和白锈病抗性鉴定

向日葵白锈病和黑茎病是近年来外来入侵的两种检疫性新病害,国内对种植的向日葵品种抗病性鉴定研究较少。在自然发病条件下,通过对2011年新疆伊犁河谷新源县向日葵种植产区的32个向日葵品种(油葵16个品种,食葵16个品种)发病程度的调查结果表明:向日葵品种间存在明显的抗病性差异,向日葵两种外来入侵检疫性病害-向日葵黑茎病、白锈病的抗性调查结果,32个品种无一免疫品种。油葵品种对黑茎病的相对抗病性无免疫品种,有6.25%表现为高抗,68.75%表现为中抗,18.75%表现为中感,6.25%表现为高感;对白锈病的相对抗病性无免疫品种,37.5%表现为高抗,50%表现为中抗,6.25%表现为中感和高感。供试油葵品种中CK3-KWS303、TK555、TK601三个品种向日葵黑茎病、白锈病的病情指数相对较低,抗病性强,产量高;CK3-KWS303、TK555二个品种产量较高。食葵品种对黑茎病的相对抗病性无免疫和高抗品种,25%表现为中抗,50%表现为中感,25%表现为高感;对白锈病的相对抗病性无免疫品种,6.25%表现为高抗,62.5%表现为中抗,12.5%表现为中感,18.75%表现为高感。供试食葵品种中CK1-5009向日葵黑茎病、白锈病发病较轻,对黑茎病表现为中感,白锈病表现为中抗。

青花菜褐茎病的症状及其病原鉴定

青花菜褐茎病是近年来浙江省青花菜产区发生的一种新病害。对全省青花菜褐茎病的症状进行调查研究,对典型症状样本的病原菌进行了分离培养、镜检,发现青花菜褐茎病的病原菌不可分离培养,为专性寄生菌;病样镜检后发现病原菌孢囊梗呈二叉状分枝,小枝末端尖细,孢子囊椭圆形或卵形,大小为（24~27）μm×（15~20）μm,卵孢子球形,黄褐色,厚壁,直径30~40μm;用青花菜的褐色发病组织对健康青花菜花球和植株进行人工接种能引起与田间青花菜褐茎病相同的症状;PCR扩增该病原菌的rDNA ITS序列并进行序列比对分析,发现该菌与寄生霜霉Hyaloperonospora parasitica相似度达95%以上,结合组织培养获得的病原形态特征,明确青花菜褐茎病病原为寄生霜霉（H.parasitica）。

几种药剂组合处理对向日葵黑茎病的防治增产效果

为探索防治向日葵黑茎病的有效措施及药剂,2014年在新疆新源县向日葵黑茎病常发地进行了3种药剂拌种结合2种药剂茎叶处理的多组合防治试验。结果表明:各处理对向日葵黑茎病均有明显的防效以及增产效果。其中使用25 g/L咯菌腈FS拌种,22.5%啶氧菌酯SC进行茎叶处理,以及使用25 g/L咯菌腈FS拌种,10%氟硅唑EW进行茎叶处理的组合防治效果较好,增产效果显著。