UPLC-MS/MS法测定茯苓、茯苓皮和茯神中茯苓新酸B、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定茯苓、茯苓皮和茯神中茯苓新酸B、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸。方法采用Shim-pack GIST C18AQ色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm),以乙腈–0.1%甲酸为流动相,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温40℃,进样量5μL。质谱采用离子源:ESI,负离子模式采集,采集模式:多反应监测(MRM),离子源温度150℃,毛细管电压2.5 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气流量900 L/h,去溶剂气温度500℃。结果茯苓新酸B、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸在各自的线性范围内线性关系良好,平均回收率分别为97.80%、99.65%、97.32%、102.82%、99.57%,RSD值分别为3.46%、1.29%、3.01%、3.11%、1.89%。茯苓皮中5种三萜类成分含量均高于茯苓和茯神。结论本法具有分析速度快、准确度高的优点,可为茯苓、茯苓皮和茯神的质量标准提高和开发利用提供依据。

UPLC-QTRAP-MS分析不同产地茯苓药材中8个三萜酸类成分

目的:建立超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱法(UPLC-QTRAP-MS法)同时测定不同产地茯苓药材中8个三萜酸类成分(茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸、去氢齿孔酸)的含量,并比较其差异。方法:采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1,柱温25℃,以多反应监测(MRM)方法进行质谱扫描,并利用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)绘制得分图。结果:8个化合物线性范围良好,相关系数(r2)均大于0.9969,平均加样回收率在98.1%~101.1%范围内,RSD≤3.2%,经PLS-DA分析,茯苓样品按产地被聚集为3组,并通过变量权重重要性排序(VIP值)图发现茯苓新酸A、去氢土莫酸、去氢茯苓酸、猪苓酸C为3个产地茯苓样品间的主要差异成分。结论:所建立的茯苓药材UPLC-QTRAP-MS质量评价方法可用于茯苓药材的多成分的快速测定及质量控制。

茯苓中6个活性成分含量的TOPSIS综合分析法考察

目的建立HPLC法同时检测不同主要产地茯苓中去氢土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸和松苓新酸6个活性成分的含量,为茯苓的质量标准研究提供参考依据。方法采用色谱柱:北京慧德易SP ODS-AQ C18分析柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(0-50 min, 48%A;50-53 min, 48%A→42%A;53-60min, 42%A;60-70 min, 42%A→35%A;70-80min, 35%A→29%A;80-100min, 29%A;);流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长:210nm、243 nm;柱温:30℃。运用TOPSIS综合分析法对不同主要产地茯苓的活性成分含量进行综合评价。结果去氢土莫酸、茯苓新酸A、猪苓酸C、去氢茯苓酸、茯苓酸和松苓新酸分别在2.26-9.40,2.36-94.40,2.16-86.40,3.02-120.80,6.60-264.00和2.32-92.80μg·mL^(-1)内与峰面积呈现良好线性关系(r=0.999 7-0.999 9),平均加样回收率(n=6)在98.2%-99.0%之间,RSD为0.70%-1.63%之间。TOPSIS综合分析法结果表明,不同主要产地茯苓中6个有效成分含量由高到低的排序为:湖北>四川>云南>安徽>贵州>湖南>福建。结论不同产地茯苓的质量存在明显差异,其中湖北茯苓质量最佳,该研究可为进一步完善茯苓的质量控制提供依据。

基于“体外-体内”多维化学物质组关联网络的茯苓质量标志物发现及质量评价研究

目的 以“体外-体内”多维化学物质组关联网络为基础,结合体内药动学研究,明确茯苓药效质量标志物,并建立质量标志物的高效液相色谱-串联质谱定量方法,进行茯苓药材质量评价。方法 以薯蓣皂苷为内标,建立茯苓三萜类成分的超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UHPLC-MS/MS)定量分析方法,绘制体内药效成分的药动学曲线,以此为依据明确茯苓药效质量标志物主要包括去氢土莫酸、土莫酸、茯苓新酸B等7种成分。检测10批茯苓药材中含量较高的成分和质量标志物的质量分数,并分别以质量分数较高成分、质量分数较高或药效质量标志物为变量进行10批茯苓药材的聚类分析。结果 以不同指标为变量进行聚类分析评价茯苓药材质量时,结果存在差异。结论 仅以质量分数较高的成分进行茯苓质量控制的方法在一定程度上存在片面性。为了全面精准的控制茯苓质量,需要充分考虑茯苓体内外成分变化和体内动力学过程,选取真正与药效相关的药效质量标志物用于其质量控制。

基于阿尔茨海默症模型大鼠的开心散药动学研究

目的 表征开心散各成分在寡聚态β淀粉样蛋白1-42(β amyloid protein 1-42,Aβ_(1-42))诱导阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠体内的药动学行为,建立并验证同时测定大鼠血浆中开心散各成分含量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法。方法 采用双侧海马注射寡聚态Aβ_(1-42)的方法建立AD大鼠模型,开心散单次ig给药,于不同时间点取血,测定各成分的血药浓度。采用DAS 2.0软件以非房室模型拟合,计算药动学参数。结果 建立的UPLC-MS/MS方法的精密度、准确度、提取回收率、基质效应和稳定性等方法学考察结果均符合生物样品分析的测定要求。Morris水迷宫实验证实成功构建AD大鼠模型(P<0.05)。AD模型大鼠给予开心散后,按中药化学结构分类的同型化合物具有相似的药动学特征,如属于同分异构体的α-细辛醚和β-细辛醚、同属于羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜的去氢土莫酸与松苓新酸以及同属于3,4-开环-羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜的茯苓新酸A和茯苓新酸B等。α-细辛醚和β-细辛醚的达峰时间(t_(max))和消除半衰期(t_(1/2))均较短,表明二者在AD模型大鼠体内吸收迅速,消除也快;茯苓新酸A和茯苓新酸B的达峰时间(t_(max))较短,但二者的半衰期(t_(1/2))却较长,表明它们吸收迅速,但消除缓慢。去氢土莫酸和松苓新酸达峰时间(t_(max))和半衰期(t_(1/2))均较长,吸收和消除缓慢。此外,去氢土莫酸的药时曲线存在双峰现象,其平均滞留时间(MRT)也较长,这可能源于较强的肝肠循环,延长了其作用时间。结论 揭示了AD疾病状态下开心散的体内药动学过程,为阐明开心散成分体内过程及其后续研究开发提供参考。