PCR技术在快速筛选DNA文库中的应用

目的探讨运用PCR (polymerase chain reaction)方法快速筛选DNA文库的可行性。方法以猪α-1,3GT cDNA片段为探针,用cDNA上的特异性序列合成的引物,采用噬菌斑原位杂交和PCR相结合的方法,对猪的gDNA文库进行α-1,3GT基因筛选,经酶切、Southern Blot、测序和荧光原位杂交定位。结果经过两次杂交和一次PCR即得信号很强的7个阳性单克隆,插入子均在8 kb以上,且包含第三内含子,其中3个片段测序证实含第三、第四外显子;荧光原位杂交证实该基因位于染色体1q2.10-q2.11。结论PCR可以应用于快速筛选DNA文库。

健康教育对学龄前儿童口腔健康行为的影响

目的探讨健康教育在学龄前儿童口腔保健中的作用。方法成立由口腔科副主任医师和主管护师组成的儿童口腔保健小组,对35名儿童实施1年的口腔卫生健康教育,内容包括评估口腔卫生状况,制订针对性口腔健康教育计划,与幼儿园教师共同举办爱牙月主题活动,参观口腔医院等。结果实施1年后,儿童坚持早晚刷牙、刷牙方法正确人数较教育前显著增加(均P<0.01)。睡前进甜食、看牙恐惧人数及餐前牙菌斑指数均较教育前显著降低(均P<0.01)。结论对学龄前儿童开展口腔卫生保健知识教育,有助于培养儿童养成良好的口腔卫生习惯,改善口腔卫生状况。

菌斑固相消耗糖后缓冲容量的变化与龋易感性的关系

目的研究牙菌斑固相代谢糖后缓冲容量的变化与龋易感性的关系。方法选择成年高龋者（DMFS≥10，DS≥5）及无龋者（DMFS=0）各10名，分别取4种糖消耗情形下的牙菌斑，即基线菌斑、一次漱糖后即刻菌斑、持续耗糖菌斑和漱糖后恢复期菌斑。样本经离心干燥获得菌斑固相成分，以25mmol／LKCl制备10mg／ml的混悬液。用0.1mmol／LHCl滴定以测定初始pH至pH4的缓冲总量和pH5.2-4区段的缓冲容量，同时对各组进行细菌计数。结果消耗糖后菌斑固相的缓冲总量均比基线值（208.793±73.338μmolH^＋／g）低，在pH5.2-4区段，一次耗糖即刻和漱糖前的缓冲容量相同，分别为112．243±28．124μmolH^＋／g和124．773±27．886μmolH^＋／g，持续耗糖后下降至93．358±18．356μmolH^＋／g。恢复期菌斑固相的缓冲容量（144．905±36．857μmolH^＋／g）显著上升。不同龋易感个体缓冲容量间的差异并无显著性。结论糖消耗过程影响菌斑固相的缓冲力，缓冲容量可能不是一个指示龋易感性的敏感指标。

类风湿关节炎患者龈下菌斑精氨酸脱亚胺酶活性研究

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者牙周状况及龈下菌斑产生的精氨酸脱亚胺酶(arginine deiminase,ADI)活性,明确RA与慢性牙周炎的相关性是否与ADI有关。方法采用病例对照研究,患者入组时间为2014年1月至2016年12月。RA组:选择在中国医科大学附属第四医院风湿免疫科确诊为RA的患者34例,其中男2例,女32例;年龄40~60岁。对照组:选择同期在本院体检中心进行体检者29例,符合基线入选标准,无关节炎症状和脊柱疾病史;其中男1例,女28例;年龄40~60岁。采集入选者的龈下菌斑制成混悬液,采用二乙酰一肟-氨基硫脲比色法测定ADI活性。采集静脉血留取血清,用ELISA法测定抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体。检查入选者全部牙齿的菌斑指数(PI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)和缺失牙数。对两组患者牙周状况以及龈下菌斑ADI活性和血清抗CCP抗体阳性率进行比较分析。结果 RA组PI值3.03±1.97、PD值(2.52±0.89)mm,对照组PI值3.52±0.92、PD值(2.63±0.45)mm,两组差异均无统计学意义(均P>0.05)。RA组AL(1.41±1.21)mm、人均缺失牙齿(4.29±5.85)颗,对照组AL(0.40±0.33)mm、人均缺失牙齿(0.56±0.80)颗,两组差异均有统计学意义(均P<0.05)。RA组ADI活性[(1.59±1.05)IU]明显高于对照组[(0.68±1.08)IU],差异有统计学意义(t=3.38,P<0.01)。抗CCP抗体阳性率(≥20 RU/m L):RA组为55.9%,对照组为0,两组差异有统计学意义(χ~2=21.91,P<0.01)。结论 RA患者牙周状况差且龈下菌斑ADI活性高,提示ADI活性增高可能是RA与慢性牙周炎相关联的关键环节。