茶多酚锰合成、表征及络合和诱导肿瘤细胞凋亡的研究

合成了茶多酚锰(TP-Mn)和茶多酚锗(TP-Ge),并采用红外光谱法及液相色谱质谱联用技术表征TP-Mn的理化特性.选用反向液相色谱(RP-HPLC)和电感藕合等离子体质谱(ICP-MS)技术研究牛血清白蛋白(BSA)络合TP-Mn的能力,指出BSA可直接络合于TP-Mn.采用MTT法研究TP和TP-Mn诱导Hela卵巢癌细胞的凋亡率.结果表明,TP和TP-Mn均能诱导Hela卵巢癌细胞凋亡,但TP-Mn诱导凋亡率约为TP的2倍.比较TP-Ge和TP-Mn诱导Raji人B淋巴瘤细胞凋亡率发现,两者诱导肿瘤细胞的凋亡率几乎相同,均高达86%左右.人血清白蛋白(HSB)可作为输送TP-Ge和TP-Mn的药物载体.

茶多酚锰络合物诱导肝癌细胞凋亡的差异蛋白质表达

目的研究茶多酚锰络合物(TP-Mn)诱导肝癌细胞HepG2凋亡过程中差异蛋白质的表达。方法 HepG2细胞分别与茶多酚(TP)700 mg·L-1,TP-Mn 700 mg·L-1,茶多酚锗(TP-Ge)700 mg·L-1作用48 h后,光学显微镜法观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)法分离HepG2细胞表达的差异蛋白;肽质量指纹法鉴定差异蛋白质。结果光学显微镜检查发现,TP和TP-Mn组HepG2细胞数量明显减少,细胞皱缩变形,并出现死亡细胞;TP-Ge组HepG2细胞数量无明显减少。流式细胞仪检测发现,TP-Mn组细胞凋亡率为(30.1±0.7)%,明显高于TP组(12.3±0.4)%(P<0.05)。2D-PAGE结果显示,TP-Mn诱导HepG2细胞凋亡过程中表达了多种差异蛋白质;肽质量指纹法鉴定结果显示,其中匹配率较高的差异蛋白质为γ-肌动蛋白和酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白。结论 TP-Mn具有诱导HepG2细胞凋亡的能力,并有差异蛋白质表达。

RP-HPLC和MALDI-TOF质谱技术研究茶多酚锰的组成、结构及稳定性

选用C18色谱柱对茶多酚锰的组分进行RP-HPLC分离,并用MALDI-TOF质谱技术鉴定其组成与分子结构.用弱酸性介质(pH3.0)作为分离条件,可明显改善茶多酚锰色谱分离的分离度,但却使表没食子儿茶素没食子酸酯-Mn(EGCG-Mn)分解成表没食子儿茶素-Mn(EGC-Mn)和没食子酸(棓酸)-Mn(GA-Mn),说明EGCG-Mn化合物对弱酸体系呈现出不稳定特性.当分离介质的酸度降低到pH4.0时,EGCG-Mn金属有机化合物表现出分子结构的稳定性.实验结果表明:在恰当的酸性介质条件下,建立的茶多酚锰分离技术,可获得质谱纯多酚化合物.

茶多酚锰-壳聚糖微球的制备、控释和诱导肝癌细胞凋亡的研究

选用壳聚糖为微米粒包被材料,制备茶多酚锰(Tea Polyphenol Manganese,TPMn)-壳聚糖微球.用荧光显微技术研究了TPMn-壳聚糖微球的荧光特性,用扫描和透射电子显微镜证实TPMn-壳聚糖微球尺寸和分布规律.RP-HPLC定量分析TPMn-壳聚糖微球包封率为68%,符合微米级微粒控释药物包封率的要求.动力学研究结果表明,茶多酚(TP)-壳聚糖和TPMn-壳聚糖的微球均有控释TP的能力,控释时间高达40h以上,但前者释放速率稍快于后者.TPMn和TPMn-壳聚糖微球均能诱导肝癌细胞凋亡,但TPMn-壳聚糖微球诱导肿瘤细胞的凋亡速率稍高于TPM.实验结果证实,以TPMn-壳聚糖微球方式控释TPMn有利于提高诱导肿瘤细胞凋亡速率.TPMn-壳聚糖微球具有研发成注射型抗肿瘤新药的可能性.