灰茶尺蠖核型多角体病毒对两种尺蠖的致病性

灰茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis grisescens Nucleopolyhedrovirus,EgNPV)是灰茶尺蠖幼虫的重要病原微生物。为明确其对茶树重要害虫尺蠖类的两个近缘种灰茶尺蠖Ectropis grisescens Warren和茶尺蠖E.obliqua Prout的致病性,进行了一系列的生物测定。结果表明,EgNPV对2龄灰茶尺蠖和茶尺蠖幼虫的剂量对数-死亡机率值回归方程和LC50分别为y=0.943x+0.3582,LC50=8.3×10^(4) PIB/mL;y=0.663x+1.614,LC50=1.3×10^(5) PIB/mL。当使用不同浓度EgNPV处理不同龄期灰茶尺蠖和茶尺蠖幼虫时发现,两种幼虫致死率趋势大致相同;在虫龄一致时,达到相同的致病率,灰茶尺蠖所需的时间比茶尺蠖平均短一天。使用2×106 PIB/mL浓度处理不同代别灰茶尺蠖和茶尺蠖2龄幼虫,在第1、2和第6代,EgNPV对两种幼虫的致死率均大于80%。上述结果表明灰茶尺蠖核型多角体病毒对灰茶尺蠖、茶尺蠖的幼虫都比较敏感,具有致死能力。这为灰茶尺蠖核型多角体病毒的合理应用提供理论基础。

茶尺蠖核型多角体病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nucleopoly hedrovirus,EoNPV)基因序列设计一对引物,并从感染该病毒的虫体中提取EoNPV基因组DNA,进行PCR扩增,将该基因片段与载体pMD18-T连接,转化入大肠杆菌TG1中,经单克隆菌落筛选及测序鉴定后得到重组质粒,以该质粒为荧光定量PCR标准品模板稀释后建立标准曲线。构建的标准曲线线性关系良好,相关系数为0.989,检测范围为103～108拷贝/μL,特异性和重复性较好。该方法可以准确地判断出病毒拷贝数,为茶尺蠖核型多角体病毒在虫体内增殖动态的研究和病毒制剂的质量检测提供了方法依据。

茶尺蠖核型多角体病毒湖北分离株的分子鉴定

运用PCR技术扩增茶尺蠖核型多角体病毒安徽分离株(EcobNPV-AH)和湖北分离株(EcobNPV-HB)的同源重复序列2(hr2),并对湖北分离株的hr2进行克隆和序列测定.结果表明,茶尺蠖核型多角体病毒安徽分离株hr2扩增产物为2条DNA片段,大小约1300bp和1800bp,湖北分离株的hr2扩增产物为1条DNA片段,大小约1800bp,由基因型组成判断,EcobNPV-HB是新的地区分离株,其hr2全长1761个核苷酸,GC含量21.7%,编码540个氨基酸,具有重复性回文序列,较GenBank中登录的EcobNPV-AH的hr2多362个核苷酸.

灰茶尺蠖核型多角体病毒(EgNPV)安全性试验

用20亿PIB/mL灰茶尺蠖病毒(EgNPV)对成年SD大鼠进行急性经口、经皮毒性试验,对白色家兔进行眼刺激和皮肤刺激试验,对豚鼠进行皮肤致敏试验以及进行小鼠急性致病性试验。结果表明20亿PIB/mL灰茶尺蠖病毒(EgNPV)水剂对SD大鼠的急性经口毒性(其LD50雌雄大鼠均>5 000 mg/kg)属于低毒;对SD大鼠的急性经皮毒性(其LD50雌雄大鼠均>2 000 mg/kg)属于低毒;对家兔的皮肤无刺激性;对家兔的眼睛也无刺激性:在染毒后24 h内不洗眼情况下,眼刺激积分最高为0;对豚鼠的皮肤致敏率为0,其致敏性分级为Ⅰ级,属弱致敏物;病理组织学检查结果表明,各实验组小鼠内脏组织均未见有病理改变,无急性致病性。

氧苦·内酯、荧光增白剂等对茶尺蠖核型多角体病毒杀虫活性的增效作用

采用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)分别与5%鱼藤酮、10%烟碱、5%除虫菊素、0.6%氧苦.内酯、荧光增白剂BA混配饲喂茶尺蠖2龄幼虫的方法进行杀虫活性增效研究。结果表明:EoN-PV与0.6%氧苦.内酯混配,增效比达到1.57,表现出良好的杀虫增效作用;与荧光增白剂BA混配,缩短了致死中时间,提高了茶尺蠖幼虫的染毒致死率。

茶尺蠖核型多角体病毒制剂的研制

茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)是茶尺蠖的主要病原微生物。试验研制了3种EoNPV制剂,分别是EoNPV乳剂、EoNPV-Bt乳剂、EoNPV-溴氰可湿性粉剂。3种制剂在室内和田间对茶尺蠖的防治效果均在90%以上。茶园示范应用1万hm2,经济效益和生态效益明显。并对3种制剂的田间使用技术进行了研究和讨论。

茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体的制备及检测应用

以纯化的茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis obliqua nucleopolyhedrovirus,EcobNPV)作为抗原免疫大耳白兔,获得多克隆抗体,Indirect-ELISA效价为1∶51 200;工作浓度分别为EcobNPV 1∶1 600、兔抗血清1∶3 200。用所制备的多克隆抗体对提纯的多角体进行Western-blot分析表明制得的抗体对茶尺蠖核型多角体病毒有良好的特异性。应用于不同来源茶园昆虫多角体病毒分离株的检测,取得了理想的检测效果。

温度对茶尺蠖核型多角体病毒形态发生的影响

电镜观察结果表明,26℃下茶尺蠖核型多角体病毒形态发生正常,其过程可分成病毒发生基质的形成—核衣壳的形成—病毒粒子的形成—多角体成熟四个阶段,一个细胞核切面可见1～50,甚至更多的多角体,30℃下则其形态发生受阻,开始饲毒后168小时内,宿主中肠上皮细胞和脂肪体细胞核中均未见病毒有关结构,仅观察到染色质凝集块,这应是高温季节该病毒防治效果差的重要原因之一。 此外,在26℃下饲毒所得宿主细胞切片中,还观察到了核内的大量管状物,特长病毒粒子及内含纤维物的具双层膜的囊状物,核内和细胞质中具侧膜的成束纤维状物等特殊结构。

茶尺蠖感染核型多角体病毒后病死时间分布的数学模拟

本文观察了１４℃、１８℃、２２℃、２６℃４种恒温和杭州５一６月自然变温下，茶尺蠖各龄初幼虫感染核型多角体病毒后的病死时间分布。结果表明，各恒温下幼虫累计相对病死频率的时间分布（Ｔ－分布）趋于一致。病死时间正规化后；同龄幼虫在各恒温下的病死时间分布可用公共Ｔ－分布代表，并可用Ｗｅｉｂｕｌｌ函数很好地加以拟合。采用此法，也可较好地模拟自然变温下幼虫的病死时间分布。

茶尺蠖核型多角体病毒制剂的防治效果

茶尺蠖核型多角体病毒（Ectropis obliqua nuclear polyhedrosis virus,简称 EONPV）的两种制剂 EONPV 2H2 的 Lc50为2.5×104 PIB/m1、EONPV 2H4的Lc50为2×104 PIB/ml,以1×107 PIB/ml的 EONPV 2H2感染寄主3龄虫的 Lt50为5.5天,EONPV 2H4 的 Lt50为5.7天。两制剂均有一定的防紫外光能力,对寄主的致病性强,室内试验校正死亡率都在96%以上,大田每亩用200亿 PIB,对第1、2、5（年发生5代区）和6代防治效果多在90%以上。在茶园中使用安全,对异色瓢虫等茶园天敌组织细胞的电镜检查,未发现有该病毒的多角体和病毒粒子,对单白绵绒茧蜂没有直接的致病性。

茶尺蠖核型多角体病毒对宿主幼虫食物摄取与利用的影响

报告了茶尺蠖核型多角体病毒对宿主食物摄取与利用的影响，发现４龄初幼虫自开始饲毒后第３天起，其取食量和排粪量均极显著低于对照；第４天起体重也极显著低于对照．相对摄食速率、相对生长速率一般随饲毒后时间的推移而下降并低于对照。消化量、近似消化率和粗生长效率高于对照，而纯生长效率则低于对照。

高温条件下茶尺蠖核型多角体——病毒对茶尺蠖繁殖的影响

本文报告了高温季节茶尺蠖核型多角体病毒对其宿主繁殖的影响。结果表明,免于病死的雌性蛹、成虫的卵巢发育进度与对照相比,无显著性差异;3龄末和4、5龄初饲毒后,化蛹率与羽化率极显著下降,交配率一股明显下降,而羽化成虫的产卵前期、寿命、产卵量、总怀卵量及卵孵化率与对照相比并无显著差异。成虫饲毒后,繁殖力不受影响。

茶尺蠖核型多角体病毒茶园应用研究

本文报告了应用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)在茶园防治茶尺蠖的研究结果。在茶尺蠖发生的第一、五代和有些年份的第二代(气温低于28℃左右),可以EoNPV单独使用,用量为7.25×10~9～1.5×10^(10)PIB/亩;而第三、四代和有些年份的第二代(气温高于28℃)则以EoNPV与20％杀灭菊酯乳油混用,用量各为1.5～3.O×l0^(10)PIB/亩和3ml/亩。布毒器具宜用雾滴较细的喷雾器;使用时期以幼虫2、3龄前为适,提倡于卵孵化期使用。采取上述措施的茶园示范试验中,第一、二和五代防治后第14天死亡率为96.67—100％;第三、四代为77.75—100％。

日龄对茶尺蠖核型多角体病毒毒性的反应

室内生测表明 ,1～ 6日龄的茶尺蠖幼虫感染 Eo NPV 9～ 10天后均 10 0 %死亡 ,日龄对最终毒性无影响。但不同日龄幼虫的起始死亡时间和 L T50 有明显差异。 L T50 为 4 .3± 0 .2 0天～ 6 .7± 0 .14天 ,各日龄虫的 L T50按从低到高排列次序为 :1日龄 <5日龄 <4日龄 <2日龄 <3日龄 <6日龄。

灰茶尺蠖核型多角体病毒对灰茶尺蠖的致病性研究

采取室内毒力测定和田间防效调查相结合的方法,对灰茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis grisescensnucleopolyhedrovir-us)的致病力进行了研究。毒力测定结果表明,该病毒对2龄灰茶尺蠖幼虫的剂量对数-死亡机率值回归方程为y=-0.8774+0.9498x,LC50=1.5417×106PIB.mL-1;田间用浓度为1×107、1.5×107和2×107PIB.mL-1的EgNPV防治灰茶尺蠖,防效分别达58.81%、89.51%和94.81%。

菊花叶片作为茶尺蠖饲料并用于其核型多角体病毒增殖的研究

本文报道了以菊花叶片饲养茶尺蠖获得成功的试验结果.经连续三代饲养表明:以菊花叶片为饲料,幼虫取食量、蛹期、蛹重,成虫寿命、产卵量、种群特征参数与以茶树叶片为饲料的相比均无显著性差异,但其幼虫历期延长1-2天.用它作饲料,饲养茶尺蠖增殖其核型多角体病毒,产量也不受显著影响.故可用于茶尺蠖的大量饲养及其病毒的增殖.

理化因子对茶尺蠖核型多角体病毒活性的影响

研究了pH、温度、紫外线和化学试剂处理对茶尺蠖核型多角体病毒活性的影响。结果表明,茶尺蠖核型多角体病毒在pH7的环境中,活性最强,pH值升高或降低,茶尺蠖核型多角体病毒感染的茶尺蠖幼虫的死亡率都会下降;当水浴温度达80℃时,病毒几乎完全失活;紫外线处理32h可明显降低病毒活性;在4种化学试剂中,0.1%CuSO_4对病毒活力影响较小,经过乙醚和75%乙醇处理后的病毒活力有下降趋势。

茶尺蠖核型多角体病毒与农药混用试验

本文测定了茶尺蠖核型多角体病毒（EoNPV）与几种杀虫剂混用的杀虫效果。生物测定结果表明，苏云金杆菌（Bt）与EoNPV混用时，表现有一定的颉颃作用，而且Bt浓度越高，往往颉颃作用越强。敌灭灵、喹硫磷与EoNPV混用，虽然有协同作用，但无增效作用。

茶尺蠖核型多角体病毒SalI 1·1 k片段的克隆及gp41部分序列分析

茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)是尚未完成基因组测序的一种杆状病毒。为了解其基因组的信息,从病虫中分离纯化了茶尺蠖NPV,提取基因组DNA,构建了EoNPV DNA的SalI酶切片段文库,并对阳性克隆进行测序,获得了EoNPVgp41基因的部分序列。序列同源性分析结果表明,EoNPV与LdMNPV之间gp41基因的同源性较高,而与AcMNPV及BmNPV的同源性较低。