茶树菇多糖对小鼠脾脏淋巴细胞免疫调节的影响

【目的】试验旨在揭示茶树菇多糖(Agrocybe aegerita polysaccharid,AAP)对小鼠脾脏淋巴细胞免疫调节的影响,为阐明AAP的作用机制及其临床应用提供依据。【方法】以小鼠脾脏淋巴细胞为研究对象,用噻唑蓝(MTT)比色法测定AAP对淋巴细胞的安全浓度,以安全浓度进行后续试验;用MTT法检测不同浓度AAP对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响,同时设置细胞、脂多糖(LPS)和植物血凝素(PHA)3个对照组,筛选出对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力较强的浓度,用流式细胞仪检测其对T淋巴细胞亚型CD4^(+)/CD3^(+)和CD8^(+)/CD3^(+)比值的影响,利用ELISA法检测其对淋巴细胞上清液中白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)含量的影响。【结果】低于1000μg/mL AAP对小鼠脾脏淋巴细胞不产生毒性作用。与对照组相比,不同浓度AAP均可极显著协同LPS和PHA刺激淋巴细胞增殖(P<0.01);125和250μg/mL AAP可极显著提高CD4^(+)/CD3^(+)和CD8^(+)/CD3^(+)比值(P<0.01),显著或极显著升高淋巴细胞分泌的细胞因子IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ含量(P<0.05;P<0.01)。【结论】AAP可协同LPS和PHA刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞表面CD4^(+)/CD3^(+)和CD8^(+)/CD3^(+)比值及淋巴细胞释放细胞因子的能力,进而提高机体免疫功能。

茶树菇多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响

为了揭示茶树菇多糖(AAP)在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响,本试验以RAW264.7为研究对象,将其分为空白对照(CON)组、AAP低剂量(AAPL)组、AAP中剂量(AAPM)组、AAP高剂量(AAPH)组和脂多糖(LPS)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测AAP对巨噬细胞RAW264.7的安全浓度;流式细胞仪检测巨噬细胞RAW264.7表面协同刺激分子抗原分化簇80(CD80)和86(CD86)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的浓度。结果显示,AAP浓度低于250μg/mL,不会对小鼠巨噬细胞RAW264.7产生毒性作用;与CON组相比,AAPM组和AAPH组RAW264.7细胞的表面分子CD80及所有AAP组RAW264.7细胞的表面分子CD86均极显著升高(P<0.01或P<0.001);AAPH组IL-1β及AAPM组和AAPH组IL-6、TNF-α和NO表达水平均显著增加(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结果表明,AAP能提高小鼠巨噬细胞RAW264.7表面分子CD80和CD86表达水平及细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和NO的分泌能力。

茶树菇多糖通过ROS-线粒体功能障碍通路诱导结直肠癌细胞凋亡

结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是一种全球性的消化道癌症,其致死率和发病率位居全球前三,给全人类的身体健康带来巨大威胁。常见的结直肠癌化疗药物具有一定副作用,因此人们正在积极寻求低副作用的天然产物对抗CRC。本研究通过体外细胞实验探究茶树菇多糖(Agrocybe cylindracea polysaccharide,ACP)抑制结直肠癌细胞增殖的作用机制。结果显示,茶树菇多糖明显抑制了结直肠癌细胞(HCT-116、CT26)增殖且呈浓度和时间依赖性,而对正常肠上皮细胞IEC-6无明显毒性。此外,RNA-seq结果指出茶树菇多糖下调了氧化磷酸化通路。进一步的实验表明茶树菇多糖导致了活性氧(Reactive oxygen species,ROS)积累、线粒体膜电位丧失和功能障碍,进而促进HCT-116细胞凋亡。值得关注的是,NAC(N-acetyl-L-cysteine)能通过清除ROS抑制茶树菇多糖诱导的细胞凋亡。综上实验结果表明,茶树菇多糖能够通过ROS-线粒体功能障碍通路诱导HCT-116细胞凋亡,最终达到抑制其增殖的目的,为开发治疗结直肠癌的低敏感性药物提供新线索,同时为茶树菇多糖的利用提供理论依据。

茶树菇菌丝多糖提取工艺研究

茶树菇多糖是具有提高人体免疫力的生物活性物质,其菌丝体提取多糖相较于子实体更短时高效,在功能性食品深加工行业有广泛的应用前景。通过单因素试验结合L9(34)正交试验探究料液比、超声时间及超声功率对提取茶树菇菌丝多糖含量的影响,结果表明,料液比1∶40 (g∶m L),超声时间10 min,超声功率400 W,菌丝多糖含量高达2.11%。该结果可为后续批量生产茶树菇菌丝多糖提供参考。

超声波辅助复合酶法提取茶树菇多糖工艺优化

为探究超声波辅助纤维素酶和果胶酶对茶树菇多糖提取效果的影响,本文以茶树菇粉为原料,以茶树菇多糖提取率为考察指标,探究复合酶比、超声时间、料液比对多糖提取率的影响。在此基础上,通过响应面试验优化提取工艺。结果表明,超声波辅助复合酶法提取茶树菇多糖的最佳工艺为料液比1∶29(g∶mL),复合酶比1.5∶1.0,超声时间29 min。在上述条件下,茶树菇多糖的提取率为24.128%。

表面活性剂辅助酶法提取茶树菇多糖工艺研究

本文采用生物表面活性剂辅助酶法提取茶树菇多糖,通过单因素实验和正交实验考察各因素对茶树菇多糖提取率的影响。结果表明,吐温80具有较好的促提取效果,最佳提取条件为吐温80添加量0.15%、料液比1∶20(g∶mL)、酶解时间3 h、纤维素酶添加量0.4 g、酶解温度45℃。在此条件下,茶树菇多糖提取率约为15.82%,较单一使用纤维素酶法提高了7.41个百分点。该方法在一定程度上提高了茶树菇多糖提取率,为多糖提取工艺的研究提供一定参考。

茶树菇多糖提取工艺的优选

目的:研究确定茶树菇多糖的最佳提取工艺。方法:采用热水浸提法对茶树菇多糖的提取工艺条件进行优化,以多糖得率为评价指标,选用单因素试验和L18(35)正交试验法,考察浸提比、pH值、浸提温度、乙醇浓度、浸提时间等5个因素对茶树菇多糖得率的影响。结果:提取茶树菇多糖的最佳工艺条件是浸提比1∶10、pH7.5、浸提温度90℃、浸提时间1 h、乙醇浓度95%,为改善茶树菇多糖的提取方法提供了实验基础。

茶树菇水溶性多糖的分离纯化和化学组成的研究

本研究为了对茶树菇保健食品的研究开发提供理论依据,研究了茶树菇中的功能因子——真菌水溶性多糖。研究中首次分离纯化得到五种茶树菇水溶性多糖,并进一步分析研究其中含量最大的多糖AP2的物理化学组成。结果表明,AP2分子量为122460,是由D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖和半乳糖醛酸组成的酸性多糖,其中半乳糖醛酸含量为6.8%。

茶树菇多糖的提取研究

采用热水浸提法提取茶树菇粗多糖,采用正交实验考察了提取时间、提取温度和固液比对茶树菇多糖得率的影响。结果表明,提取温度对茶树菇多糖的得率影响最为显著,在提取温度为90℃、固液比1:20和提取时间为4h提取3次计12h,茶树菇多糖得率为6.13%。在此基础上,分别考察了微波和超声波外场强化各因素对多糖得率的影响,结果表明,经微波和超声波强化后茶树菇多糖得率均有增加,超声波强化效果好于微波强化效果,微波强化处理后用热水浸提,多糖得率可达8.58%,超声波外场强化处理频率为59Hz,功率为112W,超声时间为20min后用热水浸提,多糖得率可达10.07%,提取时间减少4h。

纤维素酶辅助提取茶树菇多糖的研究

通过单因素及正交试验研究纤维素酶酶解辅助提取茶树菇子实体多糖的最佳工艺。研究结果表明:水浴提取茶树菇子实体多糖料液比为1∶60,提取时间120m in,温度为60℃时提取效果最佳;纤维素酶酶解辅助提取茶树菇子实体多糖,料液比为1∶80,酶浓度1.5%,浸提液pH 6.0,提取温度50℃。对2种提取法进行了比较,水浴法提取茶树菇多糖的平均提取率为1.40%;纤维素酶酶解辅助提取茶树菇多糖的平均提取率2.38%,比水浴法提高了70.47%。纤维素酶酶解辅助提取茶树菇多糖明显优与水浴法。

碱提工艺对茶树菇多糖形貌特征和构象及其生物活性的影响

利用传统水提及碱提的方法得到茶树菇粗多糖S-ACP和J-ACP,经CTAB法和Sephadex G-150凝胶层析法对其分离纯化,分别得到S-ACP2-1和S-ACP2-2以及J-ACP2-1和J-ACP2-2两组主要组分,用扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)对多糖的形貌进行表征并测定其体外抗氧化活性和抗肿瘤活性;对多糖S-ACP2-2、J-ACP2-2进行刚果红实验测定及圆二色谱仪(CD)分析。SEM观测结果:S-ACP2-1为较粗的表面光滑的丝状,J-ACP2-1呈较细的有少量碎屑的丝状;S-ACP2-2为较大的片状,J-ACP2-2在大的片状周围有很多细小的碎屑。AFM观测结果:碱液可以使多糖分子部分断裂成小片段。刚果红实验:S-ACP2-2、J-ACP2-2在水溶液中为自由卷曲构型。CD分析:S-ACP2-2的空间构型中有序结构较少,J-ACP2-2在水溶液中为无序构型。对比4种多糖的活性,碱液作用的多糖J-ACP2-2活性高于S-ACP2-2。

茶树菇多糖提取方法

比较了各种单一提取法和由单一提取法组成的几种组合提取法对茶树菇多糖的提取效果。实验表明,单一提取法中,碱浸提法最佳,40 g/L NaOH浸提液提取的粗、纯多糖得率高达15.99%和4.18%;组合浸提法中,依次使用“热水浸提法和碱浸提法”的组合浸提法得到的粗、纯多糖较高,分别为17.79%和4.20%,且其浸提时间较短,为理想的浸提方法。

茶树菇多糖对荷瘤动物模型影响的研究

对茶树菇多糖对荷瘤动物模型的影响进行了研究,实验结果表明:茶树菇多糖对小鼠S180移植肉瘤及S180腹水瘤具有显著的抑制作用,对环磷酰胺所致的实验小鼠白细胞数下降有显著的升高作用。

茶树菇多糖抗氧化活性研究

采用热水浸提法,提取茶树菇多糖并进行初步纯化,采用水杨酸法、邻苯三酚自氧化法,研究茶树菇多糖清除·OH和O2-·的效果;用硫代巴比妥酸(TBA)法测定对蚕蛹油的抗脂质过氧化作用,结果表明:茶树菇多糖具有较强的清除·OH和O2-·的作用,对蚕蛹油的抗氧化作用效果较弱。

茶树菇多糖提取的复合酶制剂筛选及工艺研究

通过单因素实验及正交试验对茶树菇多糖提取复合酶制剂进行筛选及工艺确定。复合酶制剂的筛选:通过单因素实验确定酶浓度,水解时间,初始pH及水解温度以及料液比对茶树菇水解液多糖含量的影响,并以此作为复合酶复配的依据。接着考察复合酶的浓度,水解初始pH,水解时间,水解温度和料液比对水解的影响,确定复合酶水解茶树菇提取多糖的最佳工艺。复合酶最优复配组合为纤维素酶:木聚糖酶:β-葡聚糖酶=3:3:6(酶活以80 U/mg计),最佳提取工艺为pH为5.0,酶解时间2 h,酶解温度50℃,料液比为1:20,在此条件下多糖含量为197.65 mg/g,与其他方法相比有明显提高。

茶树菇子实体多糖的分离纯化和免疫活性研究

茶树菇(Agrocybe aegerita)子实体经热水提取,Sevage法脱蛋白质,乙醇沉淀,Sephadex G-100和DEAE-Sephadex A-25柱层析得到茶树菇纯多糖ACPS。采用薄层层析、高效液相色谱、红外光谱对ACPS进行化学结构分析。结果表明,ACPS是1种分子量为11863的酸性多糖,其多糖、还原糖和糖醛酸含量分别为91.09%、10.05%和4.73%。动物试验结果表明,ACPS能显著增加正常小鼠的脾脏重量,提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,具有显著增强免疫功能的作用。

茶树菇多糖抗氧化性能的研究

采用水提醇沉的方法从茶树菇子实体中提取茶树菇粗多糖,经DEAE-Sephadex A-25柱层析得到茶树菇纯多糖。研究茶树菇粗多糖的还原能力及清除亚硝酸根的作用,考察茶树菇纯多糖对羟基自由基、超氧阴离子的清除作用,以此来评价该多糖的抗氧化活性。结果表明,茶树菇多糖具有较强的体外抗氧化性能,对亚硝酸根,羟基自由基及超氧阴离子具有明显的清除作用。

茶树菇多糖的提取、气相色谱分析和AFM观测以及活性研究

利用水提得到茶树菇水提多糖S-ACP,并对水提残渣进行碱提得多糖J-ACP。分别用考马斯亮蓝G-250法及苯酚硫酸法测定蛋白含量及总糖含量,气相色谱(GC)分析多糖组分,原子力显微镜(AFM)观测结构形貌,并进行了体外抗氧化活性测定。结果表明,S-ACP的单糖组成为木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其摩尔比为2.527:0.140:1.284:1.738;J-ACP的单糖组成为鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其摩尔比为1.327:2.525:0.140:3.641:1.765;AFM观测表明S-ACP为多侧支的雪花状结构,J-ACP为少侧支的简单环状结构,且二者均非单链存在;抗氧化活性结果表明S-ACP活性高于J-ACP。

木瓜蛋白酶酶解辅助提取茶树菇多糖的研究

茶树菇多糖具有多种药理生理功能,该文通过正交试验研究了水浴及木瓜蛋白酶酶解辅助提取茶树菇子实体多糖的最佳工艺。研究结果表明:水浴提取茶树菇子实体多糖料液比为1∶60,提取时间120min,提取温度为60℃时提取效果最佳,平均提取率为1.47%;木瓜蛋白酶酶解辅助提取茶树菇子实体多糖,料液比1∶80,2%的木瓜蛋白酶,pH值为5.0,酶解温度45℃提取效果最佳;用此工艺提取茶树菇多糖的平均提取率为3.08%。以t检验分析,酶解辅助提取法显著优于水浴提取法。

茶树菇多糖联合化疗对食管癌大鼠TNF-α和IFN-γ的影响

目的:观察茶树菇多糖联合化疗对食管癌大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)的影响。方法:选用40只大鼠随机分为正常(正常对照)组,模型(模型对照)组,化疗(用替加氟)组,联合(替加氟联合茶树菇多糖)组。除正常组大鼠外,其他组大鼠皮下注射甲基戊基亚硝胺5 mg/kg,诱发食管癌模型,建模成功后各组治疗4周,记录大鼠的体重变化。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清TNF-α和IFN-γ水平,采用免疫组化检测大鼠食管组织的TNF-α和IFN-γ表达情况。结果:在实验过程中,正常组大鼠体重呈逐步上升趋势,联合组大鼠体重呈缓慢上升趋势;而模型组和化疗组大鼠的体重变化不明显。联合组大鼠血清TNF-α水平明显低于模型组和化疗组,但高于正常组(P<0.05);而联合组大鼠血清IFN-γ水平明显高于模型组和化疗组,而低于正常组(P<0.05)。联合组大鼠的TNF-α阳性表达率低于模型组和化疗组,高于正常组;而IFN-γ阳性表达率高于模型组和化疗组,低于正常组(P<0.05)。结论:茶树菇多糖联合化疗可调节食管癌大鼠的免疫功能。其机制可能与下调TNF-α水平和上调IFN-γ水平有关。