生物信息学筛选催化茶黄素合成的多酚氧化酶

利用生物信息学方法从天然植物中筛选天然PPO酶源.用PPO保守序列从Uniport中检索到529条植物源PPO,除去重复的和不完整的序列后,得到178条PPO序列.用同源建模法,以甘薯PPO晶体结构(1BUG)为模板,构建各PPO的三维结构模型,经Procheck和Verify3D评价后,获得163个优质的PPO三维结构.用TM-score(空间拓扑)和RMSD(结构叠合)对163个PPO与茶PPO(A6N8J4)的三维结构进行了相似性比较.用Autodock Vina将163个PPO与茶中4种主要儿茶素进行分子对接,根据酶与底物结合的亲和力(Binding Affinity)预测各PPO的活性,发现酶与底物的亲和力与酶的一级结构序列同源性和酶的三维结构的重叠度之间无直接关系.从潜在的10种高PPO活性的植物材料中提取PPO、测定其茶黄素转化活性.10种植物材料中均有不同程度的PPO活性,其中沙梨和甘薯的PPO活性最高,且高于茶叶PPO活性.甘薯资源极其丰富,可从甘薯生产淀粉的废水中大量回收PPO,用于茶黄素的工业合成.本研究表明,利用生物信息学法可以从大量酶的序列信息中成功筛选出高活性的酶,与传统的酶活性筛选法比,可大大提高筛选范围和效率.

HPLC分析Cu^(2+)对茶酶源酶促氧化合成茶黄素的影响

为比较不同浓度Cu2+处理下茶树鲜叶多酚氧化酶对酶性合成茶黄素效率的影响。通过测定茶叶样品中多酚氧化酶的质量分数,并对氧化产品进行HPLC分析。结果表明,不同浓度Cu2+处理下茶黄素合成效率呈线性变化。n(Cu2+)/n(PPO)=0.2时,茶黄素合成率最高,为35.193%,乙酸乙酯层茶黄素质量分数为45.738%。n(Cu2+)/n(PPO)=0.8时,茶鲜叶多酚氧化酶氧化效果与n(Cu2+)/n(PPO)=0时相当。n(Cu2+)/n(PPO)>0.8时,Cu2+增加可抑制茶树鲜叶多酚氧化酶活性。分析儿茶素转化率可知,n(Cu2+)/n(PPO)=0.4时,儿茶素转化率最高,达99.05%;n(Cu2+)/n(PPO)>0.4时,儿茶素转化率呈下降趋势。总体而言,n(Cu2+)/n(PPO)=0.2时,茶多酚氧化酶氧化合成茶黄素有最优值。